目的探討內(nèi)皮祖細(xì)胞（Endothelial progenitor cells, EPCs）的培養(yǎng)及鑒定,比較密度梯度離心和全骨髓培養(yǎng)法分離培養(yǎng)EPCs的差異。方法取4周雄性近交系C57BL／6J小鼠骨髓,分別采用密度梯度離心及全骨髓培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)。相差倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞貼壁情況和細(xì)胞形態(tài)；采用免疫熒光檢測細(xì)胞攝取Dil-acLDL及結(jié)合FITC-UEA-I能力；采用免疫熒光檢測細(xì)胞血管性血友病因子（vWF）表達(dá),免疫細(xì)胞化學(xué)檢測內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）表達(dá)及流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志CD34、CD133和Flk-1的表達(dá)。結(jié)果（1）全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)貼壁細(xì)胞多數(shù)呈長梭形鋪展生長,部分細(xì)胞呈類圓形及紡錘形；密度梯度離心培養(yǎng)細(xì)胞多呈類圓形、紡綞形、梭形或多邊形,部分細(xì)胞呈線狀排列,培養(yǎng)過程中可見典型鋪路石樣外觀及形成血管樣結(jié)構(gòu)。（2）密度梯度離心培養(yǎng)攝取Dil-acLDL和結(jié)合FITC-UEA-I雙陽性率較全骨髓培養(yǎng)法高[（95.3±1.8）%Vs.（59.7±8.6）%,P<0.05]。（3）密度梯度離心培養(yǎng)細(xì)胞vWF及eNOS表達(dá)陽性率均高于全骨髓培養(yǎng)法[（92.9±1.... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

全骨髓培養(yǎng)法細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察(x200)

c:細(xì)胞結(jié)合Fl’fC一UEA一l，顯示綠色 ;d:DAPI染核定位;c:熒光共聚焦，雙染呈黃色或橙色;f:雙染與OAPI染核圖片重疊圖1共兩種培養(yǎng)方法的攝取Di卜aclJDL及結(jié)合Flrrc一隴A一I雙染比較 (X200)a一d:全骨髓培養(yǎng)貼壁細(xì)胞雙染鑒定;二h:密度梯度離心法貼壁細(xì)胞雙染鑒定1.3.3免疫熒光法檢測細(xì)胞vWF表達(dá)熒光顯微鏡卜，空白對照未見熒光顯示(圖l一sa)，vWF陽性細(xì)胞胞漿見綠色熒光表達(dá)(圖1一sb)。個侶，髓培養(yǎng)法及密度梯度離心法培養(yǎng)第10d細(xì)胞vWF陽性表達(dá)率分別為(51.6士3.5)%、(92.叭1.5)%。密度梯度離心法第10d細(xì)胞vwF表達(dá)率高于個什髓培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸<0.05，表l一1)。

貨位論文第1今培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計(jì)一學(xué)意義(尸<0.05，圖l一4，表1一l)。圖1一3密度梯度離心法培養(yǎng)細(xì)胞第10d攝取Di卜acLDL及結(jié)合FITC一U卜A一I雙染(、400)注:a:普通光學(xué)顯微鏡;b:細(xì)月刨聶取Di卜acLDL，顯示紅色;c:細(xì)胞結(jié)合Fl’fC一UEA一l，顯示綠色 ;d:DAPI染核定位;c:熒光共聚焦，雙染呈黃色或橙色;f:雙染與OAPI染核圖片重疊圖1共兩種培養(yǎng)方法的攝取Di卜aclJDL及結(jié)合Flrrc一隴A一I雙染比較 (X200)a一d:全骨髓培養(yǎng)貼壁細(xì)胞雙染鑒定;二h:密度梯度離心法貼壁細(xì)胞雙染鑒定1.3.3免疫熒光法檢測細(xì)胞vWF表達(dá)熒光顯微鏡卜，空白對照未見熒光顯示(圖l一sa)，vWF陽性細(xì)胞胞漿見綠色熒光表達(dá)(圖1一sb)。個侶，髓培養(yǎng)法及密度梯度離心法培養(yǎng)第10d細(xì)胞vWF陽性表達(dá)率分別為(51.6士3.5)%、(92.叭1.5)%。密度梯度離心法第10d細(xì)胞vwF表達(dá)率高于個什髓培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸<0.05

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3270444