本文關(guān)鍵詞：miR-181b抑制TGFBR1表達(dá)在肺纖維化過程中的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究miR-181b對(duì)肺纖維化過程的調(diào)控作用，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探討。 方法：收集7例特發(fā)性肺纖維化患者和9例正常人肺活檢組織，并取正常小鼠和博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠模型的肺組織，提取RNA檢測miR-181b水平。將A549細(xì)胞分為control組、mimic-NC組、mimic組、inhibitor組和inhibitor-NC組。control組無干預(yù)；mimic組加入miR-181b的激動(dòng)劑mimic；inhibitor組加入miR-181b的抑制劑inhibitor，mimic-NC組和inhibitor-NC組分別為mimic組和inhibitor的陰性對(duì)照組，加入無活性的microRNA。轉(zhuǎn)染后，通過western blot檢測TGFBR1表達(dá)。同時(shí)，將TGFBR1mRNA3’UTR構(gòu)建入luciferase報(bào)告系統(tǒng)（TGFBR1-3’UTR-wt），同時(shí)將突變后的TGFBR1mRNA3’UTR也插入luciferase報(bào)告系統(tǒng)中（TGFBR1-3’UTR-mut1，TGFBR1-3’UTR-mut2和TGFBR1-3’UTR-mut3）。然后將miR-181b與luciferase空質(zhì)粒（empty vector）或TGFBR1-3’UTR-wt質(zhì)�；騎GFBR1-3’UTR mut1/2/3質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染至HEK-293細(xì)胞中，檢測各組細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度。將30只小鼠分為對(duì)照組、miR-181b組和GFP組，，每組10只小鼠。對(duì)照組小鼠不作任何處理，miR-181b組經(jīng)尾靜脈注射入rAAV-miR-181b載體使miR-181b在小鼠體內(nèi)過表達(dá)；GFP組經(jīng)小鼠尾靜脈注射入rAAV-GFP載體。所有小鼠經(jīng)博來霉素刺激誘導(dǎo)特發(fā)性肺纖維化模型，模型制作成功后，處死小鼠取肺組織，HE染色和Masson染色檢測肺病理變化和膠原沉積情況，western blot檢測TGFBR1、磷酸化SMAD2和SMAD3蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：IPF病人肺組織中的miR-181b表達(dá)水平只有正常人肺組織中的1/3，而與正常小鼠相比，IPF小鼠肺組織中miR-181b表達(dá)水平更低，約下調(diào)4倍左右。miR-181b mimic可顯著降低A549細(xì)胞中TGFBR1水平（p0.05），而miR-181b inhibitor可顯著升高A549細(xì)胞中TGFBR1水平（p0.05），5組細(xì)胞中的TGFBR1mRNA水平并無明顯差異。luciferase assay結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-181b后，TGFBR1-3’UTR-wt組熒光強(qiáng)度明顯低于其陰性對(duì)照組（miR-con），和TGFBR1-3’UTR-mut1/2組熒光強(qiáng)度也不同程度的低于其陰性對(duì)照。而TGFBR1-3’UTR-mut3組或空質(zhì)粒組（empty vector）熒光強(qiáng)度與其陰性對(duì)照無明顯差異。miR-181b組小鼠肺纖維化程度明顯高于BLM組和GFP組，但仍高于對(duì)照組；BLM組小鼠肺纖維化程度與GFP組無明顯差異。轉(zhuǎn)染AAV5-miR-181b的IPF小鼠模型肺組織內(nèi)TGFBR1、p-SMAD2和p-SMAD3的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組和Vector組小鼠（p0.05）。 結(jié)論：miR-181b在特發(fā)性肺纖維化疾病進(jìn)程中表達(dá)下調(diào)，過表達(dá)miR-181b可在轉(zhuǎn)錄后水平通過下調(diào)靶蛋白TGFBR1表達(dá)，阻斷肺組織中TGF-β信號(hào)通路的傳導(dǎo)，從而減輕肺纖維化的程度。
【關(guān)鍵詞】：特發(fā)性肺纖維化 轉(zhuǎn)化生長因子β 微小RNA 博來霉素 腺相關(guān)病毒
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-11
• 第1章 緒論11-27
• 1.1 引言11-12
• 1.2 綜述12-27
• 1.2.1 概述12-13
• 1.2.2 特發(fā)性肺纖維化的發(fā)病機(jī)制13-18
• 1.2.3 特發(fā)性肺纖維化的診斷18-21
• 1.2.4 特發(fā)性肺纖維化的治療21-26
• 1.2.5 總結(jié)與展望26-27
• 第2章 資料和方法27-40
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料27-29
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)器材27
• 2.1.2 主要試劑27-29
• 2.1.3 受試人群29
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-40
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組與處理方法29-30
• 2.2.2 qRT-PCR 檢測 miRNAs 和 mRNA 表達(dá)30-33
• 2.2.3 寡核苷酸（miRNA）的轉(zhuǎn)染33-34
• 2.2.4 miR-181b 靶基因預(yù)測34
• 2.2.5 熒光素酶報(bào)告基因分析34-35
• 2.2.6 IPF 小鼠模型的建立35
• 2.2.7 肺組織學(xué)染色35-36
• 2.2.8 western blot 檢測36-38
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38-40
• 第3章 結(jié)果40-45
• 3.1 miR-181b 在 IPF 肺組織中表達(dá)下調(diào)40
• 3.2 miR-181b 減輕 IPF 的肺纖維化改變40-41
• 3.3 TGFBR1 是 miR-181b 可能的作用靶點(diǎn)41-42
• 3.4 miR-181b 下調(diào) A549 細(xì)胞 TGFBR1 蛋白表達(dá)42-43
• 3.5 miR-181b 可與 TGFBR1 mRNA 3’UTR 端結(jié)合43-44
• 3.6 miR-181b 阻斷 IPF 肺組織內(nèi) TGF-β 信號(hào)通路的傳導(dǎo)44-45
• 第4章 討論45-49
• 第5章 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-59
• 附錄59-60
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果60-61
• 致謝61

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2 楊s

本文編號(hào)：326800