目的：特發(fā)性肺纖維化為致命的肺部疾病。其特點是肺上皮細(xì)胞損傷,肺成纖維細(xì)胞／肌成纖維細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)過渡沉積,造成肺結(jié)構(gòu)破壞。但機制不明。最近的證據(jù)表明,Wnt信號通路在IPF患者異常活躍。本研究采用Wntl蛋白干預(yù)人胚肺成纖維細(xì)胞,探討對細(xì)胞增殖、活化的影響；通過Wntl蛋白及β-catenin質(zhì)粒干預(yù)A549細(xì)胞,探討Wnt/β-catenin信號通路對肺上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)變作用。通過模型鼠,觀察肺纖維化形成過程中,β-catenin動態(tài)變化規(guī)律。用肺纖維化模型鼠的支氣管肺泡灌洗液培養(yǎng)HEPF和A549細(xì)胞,探討對細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變的影響,及與Wnt/β-catenin信號通路的相關(guān)性；用P-catenin基因siRNA干擾慢病毒沉默β-catenin,再用支氣管肺泡灌洗液培養(yǎng)細(xì)胞,對細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變的影響,進一步揭示W(wǎng)nt/β-catenin信號通路對成纖維細(xì)胞活化、增殖及肺上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)變的作用。方法：我們用不同濃度的Wntl干預(yù)人胚肺成纖維細(xì)胞,MTT檢測細(xì)胞增殖率,RT-PCR及westen blot檢測a-平滑肌肌動蛋白、波形蛋白、Ⅰ型膠原蛋白表達；不同濃度的Wntl干預(yù)A54... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
第一章 緒論
    1.1 肺纖維化研究現(xiàn)狀
    1.2 Wnt/β-catenin信號通路的基本結(jié)構(gòu)和表達調(diào)控
    1.3 Wnt/β-catenin信號通路與肺纖維化疾病的相互關(guān)系
    1.4 Wnt/β-catenin和TGF-β信號相互聯(lián)系
    1.5 結(jié)語
    1.6 研究目的、研究方案、技術(shù)路線
        1.6.1 研究目的
        1.6.2 研究內(nèi)容
        1.6.3 研究方案
        1.6.4 技術(shù)路線
    參考文獻
第二章 Wnt1對人胚肺成纖維細(xì)胞作用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
        2.1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 MTT測定Wnt1干預(yù)后細(xì)胞增殖率
        2.2.2 不同濃度Wnt1干預(yù)細(xì)胞后,α-SMA、vimentin、collagen-Ⅰ蛋白表達
        2.2.3 不同濃度Wnt1干預(yù)細(xì)胞后,α-SMA、vimentin、collagen-Ⅰ基因表達
        2.2.4 免疫熒光顯示W(wǎng)nt1干預(yù)HEPF細(xì)胞后β-catenin核轉(zhuǎn)位
    2.3 討論
第三章 Wnt1、β-catenin質(zhì)粒對A549細(xì)胞的作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
        3.1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 Wnt1誘導(dǎo)A549細(xì)胞E-cad、α-SMA、vimentin和collagen Ⅰ蛋白表達
        3.2.2 Wnt1干預(yù)A549細(xì)胞E-cad、α-SMA、vimentin和collagen Ⅰ基因表達
        3.2.3 免疫熒光顯示W(wǎng)nt1干預(yù)A549細(xì)胞后β-catenin核移位
        3.2.4 β-catenin質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后細(xì)胞表型改變
    3.3 討論
第四章 β-catenin在肺纖維化模型鼠肺組織中的表達
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 實驗方法
        4.1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化模型建立
        4.2.2 免疫組織化學(xué)檢測肺組織中β-catenin蛋白動態(tài)表達
        4.2.3 Westen Blot檢測肺組織中β-catenin蛋白的動態(tài)表達
    4.3 討論
第五章 β-catenin基因RNA干擾慢病毒表達載體的構(gòu)建及鑒定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 實驗方法
        5.1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 攜帶目的基因慢病毒質(zhì)粒的測序分析結(jié)果
        5.2.2 慢病毒顆粒的包裝和滴度測定
        5.2.3 慢病毒感染HEPF細(xì)胞體外感染效率的測定（MOI試驗）
        5.2.4 慢病毒轉(zhuǎn)染HEPF細(xì)胞后β-catenin蛋白的表達
        5.2.5 慢病毒轉(zhuǎn)染HEPF細(xì)胞后β-catenin基因表達
    5.3 討論
第六章 肺纖維化模型鼠支氣管肺泡灌洗液對HEPF及A549細(xì)胞影響
    6.1 材料與方法
        6.1.1 材料
        6.1.2 方法
        6.1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
    6.2 結(jié)果
        6.2.1 肺纖維化模型鼠支氣管肺泡灌洗液對HEPF細(xì)胞影響
        6.2.2 β-catenin siRNA慢病毒轉(zhuǎn)染HEPF細(xì)胞
        6.2.3 慢病毒轉(zhuǎn)染HEPF細(xì)胞后肺纖維化模型鼠支氣管肺泡灌洗液培養(yǎng)細(xì)胞
        6.2.4 肺纖維化模型鼠支氣管肺泡灌洗液對A549細(xì)胞影響
        6.2.5 β-catenin siRNA慢病毒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞
        6.2.6 慢病毒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后肺纖維化模型鼠支氣管肺泡灌洗液培養(yǎng)細(xì)胞
    6.3 討論
第七章 主要結(jié)論、學(xué)術(shù)創(chuàng)新與展望
    7.1 主要結(jié)論
    7.2 學(xué)術(shù)創(chuàng)新
    7.3 展望
參考文獻
致謝
讀博期間發(fā)表的論文,參加的課題



本文編號：3145360