本文關(guān)鍵詞：鄰苯二甲酸二丁酯暴露對(duì)小鼠哮喘的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)因具有優(yōu)良的化學(xué)性質(zhì)而成為當(dāng)前廣泛使用的一種增塑劑,主要用于塑料、樹脂溶劑、潤滑劑、膠黏劑、化妝品、農(nóng)藥載體、印刷油墨等領(lǐng)域。DBP與材料分子是以氫鍵或者范德華力非共價(jià)結(jié)合,易隨著產(chǎn)品的生產(chǎn)、使用和廢棄被釋放到環(huán)境中,進(jìn)而通過多種途徑進(jìn)入人體內(nèi)造成危害。研究表明,DBP作為一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,可通過類雌激素、抗雄激素和甲狀腺激素干擾等機(jī)制對(duì)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)分泌干擾作用。除此之外,DBP還具有神經(jīng)發(fā)育毒性、免疫毒性、生殖毒性等。近幾十年來,世界范圍內(nèi),特別是發(fā)達(dá)國家,過敏性疾病的發(fā)病率逐年上升,但是人們所處環(huán)境中過敏原的種類和數(shù)量卻沒有發(fā)生顯著的變化。流行病學(xué)調(diào)查及實(shí)驗(yàn)室研究表明,環(huán)境中鄰苯二甲酸脂類(phthalate esters, PAEs)物質(zhì)的含量與過敏性疾病的發(fā)生存在著重要的聯(lián)系,PAEs物質(zhì)持續(xù)地暴露可以通過類似免疫佐劑的作用增加過敏原誘導(dǎo)型哮喘的發(fā)病幾率及嚴(yán)重程度。本研究中,我們通過建立Th2型小鼠哮喘模型來探究持續(xù)經(jīng)口暴露DBP是否會(huì)加重小鼠哮喘模型中哮喘樣的相關(guān)癥狀,并探究其中可能的分子機(jī)制。無特定病原體(specific-pathogen-free, SPF)級(jí)的雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為5組：生理鹽水對(duì)照組、DBP單獨(dú)染毒組、卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏組、OVA和DBP聯(lián)合染毒組、褪黑素(melatonin, MT)保護(hù)組。各組小鼠在0～27天內(nèi)連續(xù)按照小鼠體重進(jìn)行生理鹽水或DBP (10 mg/kg/day)灌胃,OVA致敏組及聯(lián)合染毒組小鼠在第6、13、20、27天行腹腔和皮下多點(diǎn)注射OVA以啟動(dòng)小鼠免疫反應(yīng),而保護(hù)組中在OVA致敏時(shí)提前半小時(shí)腹腔注射濃度為10mg/kg的抗氧化劑MT。第28～34天,OVA致敏組進(jìn)行1%OVA (30 min/day)霧化激發(fā),誘發(fā)小鼠哮喘樣癥狀。完成霧化激發(fā)24 h后,通過測(cè)定小鼠肺功能、肺部組織切片病理觀察、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)和γ-干擾素(y-interferon, IFN-y)的水平、小鼠血清中總免疫球蛋白-E (Total Immunoglobulin-E, T-IgE)的含量以及小鼠肺部組織氧化應(yīng)激水平來研究DBP對(duì)哮喘的作用以及可能的機(jī)制。結(jié)果顯示,DBP單獨(dú)染毒組相較于對(duì)照組,所有指標(biāo)均沒有顯著差異,表明DBP作為一種小分子物質(zhì),不能起始小鼠的免疫應(yīng)答反應(yīng)。OVA致敏組中,肺部組織Th2型反應(yīng)加劇,主要表現(xiàn)為：細(xì)胞因子IL-4含量上升,血清中T-IgE含量升高,氣道高反應(yīng)性(airway hyper responsiveness, AHR)增強(qiáng),氣道重塑嚴(yán)重,肺部組織纖維化程度增加、氣管上皮細(xì)胞粘液分泌增多以及BALF中各炎癥細(xì)胞數(shù)量增多；Th1型反應(yīng)減弱,主要表現(xiàn)為：IFN-y含量下降以及IFN-y/IL-4比值下降,并且與生理鹽水對(duì)照組相比有顯著差異,表明小鼠哮喘模型構(gòu)建成功,在此過程中Thl/Th2的平衡向Th2類細(xì)胞群平移。此外,OVA致敏組中氧化應(yīng)激水平較對(duì)照組有顯著差異,表明氧化應(yīng)激為哮喘的致病機(jī)理之一。在聯(lián)合染毒組中,DBP的持續(xù)暴露均能在一定程度上增加小鼠的哮喘樣癥狀以及氧化應(yīng)激的水平,但是相較于OVA致敏組,除吸氣阻力外均不表現(xiàn)出顯著差異,表明DBP在小鼠哮喘模型中的表現(xiàn)出了較為微弱免疫佐劑效應(yīng),并且其增加小鼠模型哮喘樣的癥狀現(xiàn)象并不是通過氧化應(yīng)激機(jī)制實(shí)現(xiàn)。抗氧化劑MT的使用,能夠有效地減輕所有的聯(lián)合染毒產(chǎn)生的負(fù)面作用。綜上所述,長期暴露于DBP可以通過微弱的免疫佐劑作用加重過敏原所誘發(fā)的過敏性疾病,但是在小鼠哮喘模型中所表現(xiàn)佐劑效應(yīng)并未通過氧化應(yīng)激的介導(dǎo)作用,提示過敏體質(zhì)的人或者哮喘患者應(yīng)盡量避免過多地暴露于DBP以及其他PAEs含量較多的環(huán)境中,以減少過敏性疾病的發(fā)病幾率。
【關(guān)鍵詞】：鄰苯二甲酸二丁酯 哮喘 免疫佐劑效應(yīng) 動(dòng)物模型 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-13
• 1 緒論13-32
• 1.1 哮喘的簡介13-15
• 1.2 哮喘的發(fā)病機(jī)理15-19
• 1.2.1 經(jīng)典學(xué)說15-16
• 1.2.2 氧化應(yīng)激16-17
• 1.2.3 氣道神經(jīng)源性炎癥理論17-19
• 1.2.4 亞硝基谷胱甘肽還原酶/亞硝基谷胱甘肽理論19
• 1.3 動(dòng)物哮喘模型的制備19-21
• 1.3.1 動(dòng)物種類選擇19-20
• 1.3.2 致敏原種類的選擇20-21
• 1.3.3 致敏和激發(fā)21
• 1.4 動(dòng)物哮喘模型的評(píng)價(jià)21-22
• 1.5 鄰苯二甲酸酯22-30
• 1.5.1 鄰苯二甲酸酯的簡介22-23
• 1.5.2 DBP的物化性質(zhì)及應(yīng)用23-24
• 1.5.3 DBP的暴露水平24-25
• 1.5.4 DBP的暴露途徑25-27
• 1.5.5 DBP的毒性研究27-30
• 1.6 立題依據(jù)30-32
• 2 材料與方法32-45
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料32-34
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物32
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和試劑盒32-33
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要溶液及其配制33
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器33-34
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法34-45
• 2.2.1 動(dòng)物哮喘模型的建立34-35
• 2.2.2 小鼠肺組織勻漿的制備35
• 2.2.3 小鼠肺組織中ROS含量的測(cè)定35-36
• 2.2.4 小鼠肺組織中GSH含量的測(cè)定36
• 2.2.5 小鼠肺組織中MDA含量的測(cè)定36-37
• 2.2.6 小鼠血清總IgE(T-IgE)含量的檢測(cè)37-38
• 2.2.7 BALF中炎癥細(xì)胞的計(jì)數(shù)38-39
• 2.2.8 BALF樣品中細(xì)胞因子的檢測(cè)39-40
• 2.2.9 小鼠AHR檢測(cè)40-42
• 2.2.10 小鼠肺組織病理學(xué)的檢測(cè)42-44
• 2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析44-45
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-59
• 3.1 小鼠肺組織氧化應(yīng)激水平的測(cè)定結(jié)果45-47
• 3.1.1 ROS含量的變化45
• 3.1.2 GSH含量的變化45-46
• 3.1.3 MDA含量的變化46-47
• 3.2 小鼠血清中T-IgE的測(cè)定結(jié)果47-48
• 3.3 小鼠BALF中炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)的測(cè)定結(jié)果48-49
• 3.4 小鼠BALF中細(xì)胞因子的測(cè)定結(jié)果49-50
• 3.5 小鼠AHR的檢測(cè)結(jié)果50-55
• 3.5.1 吸氣阻力(Ri)51-52
• 3.5.2 呼氣阻力(Re)52-53
• 3.5.3 肺的順應(yīng)性(Cldyn)53-54
• 3.5.4 小鼠AHR檢測(cè)結(jié)果的多重分析54-55
• 3.6 肺組織病理切片的檢測(cè)結(jié)果55-59
• 3.6.1 H&E染色55-56
• 3.6.2 Masson染色56-57
• 3.6.3 PAS染色57-59
• 4 討論59-69
• 4.1 DBP暴露方式、劑量以及檢測(cè)指標(biāo)的選擇59-60
• 4.2 DBP暴露所誘導(dǎo)氧化應(yīng)激對(duì)哮喘的影響60-62
• 4.3 DBP暴露對(duì)小鼠哮喘模型BALF中炎癥細(xì)胞和細(xì)胞因子的影響62-64
• 4.3.1 DBP暴露對(duì)細(xì)胞因子的影響62
• 4.3.2 DBP暴露對(duì)炎癥細(xì)胞的影響62-64
• 4.4 DBP暴露對(duì)小鼠哮喘模型氣道重塑的影響64-66
• 4.5 DBP暴露對(duì)小鼠哮喘模型AHR的影響66-67
• 4.6 DBP在小鼠哮喘模型中的佐劑效應(yīng)探討67-69
• 5 結(jié)論69-70
• 參考文獻(xiàn)70-78
• 附錄Ⅰ 英文縮略詞表78-80
• 附錄Ⅱ 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文80-81
• 致謝81-82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉慧杰,舒為群;鄰苯二甲酸酯類化合物的毒理學(xué)效應(yīng)及對(duì)人群健康的危害[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年19期

2 曹祺風(fēng);宋文生;朱長春;唐亞夫;;鄰苯二甲酸二丁酯研究概述[J];中國膠粘劑;2007年10期

3 吳平谷,韓關(guān)根,王惠華,趙瑩;飲用水中鄰苯二甲酸酯類的調(diào)查[J];環(huán)境與健康雜志;1999年06期

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本文編號(hào)：313858