目的:對(duì)比EL-7013和吡非尼酮（pirfenidone,PFD）的抗纖維化作用及可能機(jī)制。方法:向C57BL/6小鼠氣管內(nèi)滴注3 mg/kg博來(lái)霉素（bleomycin,BLM）構(gòu)建肺纖維化動(dòng)物模型重組人TGF-β₁（10 ng/mL）誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞（human embryonic lung fibroblasts,HLF-1）建立肺纖維化細(xì)胞模型,分別用EL-7013和PFD干預(yù)處理,機(jī)制探討實(shí)驗(yàn)用EX-527抑制Sirt1表達(dá)及活性。HE、Masson染色評(píng)估肺組織病理變化,Western blot檢測(cè)肺組織中COL1A1、COL3A1、α-SMA等纖維化指標(biāo)和TGF-β₁、Phospho-Smad1/Smad1、Phospho-Smad3/Smad3等通路指標(biāo)表達(dá),堿水法檢測(cè)肺組織羥脯氨酸（hydroxyproline,HYP）含量。CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,免疫熒光染色、Western blot、RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞模型中纖維化及TGF-β₁/Smad通路相關(guān)指標(biāo)的蛋白和mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:EL... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,45(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

Western blot檢測(cè)肺組織中COL1A1、COL3A1、α-SMA蛋白的表達(dá)

圖6 Western blot、RT-qPCR檢測(cè)HFL-1細(xì)胞中COL1A1、COL3A1、α-SMA蛋白及mRNA水平2.3 Sirt1對(duì)EL-7013抗纖維化及調(diào)控TGF-β1/Smad通路作用的影響

如圖10A、B所示，TGF-β1+EX-527組的TGF-β1和Phospho-Smad3的蛋白表達(dá)水平均較單獨(dú)TGF-β1組明顯升高，而TGF-β1+EX-527+EL-7013組的TGF-β1和PhosphoSmad3的蛋白表達(dá)水平介于TGF-β1+EX-527組和TGF-β1+EL-7013組之間，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（TGF-β1蛋白表達(dá)：tTGF+EX-527=38.272,P=0.001;tTGF+EL-7013=-25.436,P=0.002;Phospho-Smad3蛋白表達(dá)：tTGF+EX-527=6.080,P=0.026;tTGF+EL-7013=-6.009,P=0.027）。如圖10C示，EX-527特異性抑制Sirt1后，TGF-β1的mRNA表達(dá)水平均較TGF-β1組明顯升高，TGF-β1+EX-527+EL-7013組的TGF-β1的m RNA表達(dá)水平低于TGF-β1+EX-527組，但高于TGF-β1+EL-7013組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（tTGF+EX-527=35.695,P=0.001;tTGF+EL-7013=-84.303,P=0.000）。圖9 免疫熒光染色、Western blot、RT-qPCR檢測(cè)抑制Sirt1后HFL-1細(xì)胞COL1A1、COL3A1、α-SMA蛋白及mRNA水平


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