目的探討miR-145通過SMAD3調(diào)節(jié)慢性阻塞性肺疾�。–OPD）的發(fā)生及機(jī)制。方法檢測(cè)延安大學(xué)附屬醫(yī)院有COPD的吸煙者、無COPD的吸煙者、無COPD的未吸煙者肺組織中miR-145、SMAD3的表達(dá)水平。用20%CEM處理支氣管上皮細(xì)胞后,構(gòu)建COPD的細(xì)胞模型,將miR-145 mimics/inhibitor轉(zhuǎn)染該細(xì)胞后,通過ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞上清中IL-6、IL-8、IL-10表達(dá)水平,RT-PCR、Western blot檢測(cè)SMAD3、IL-6、IL-8、IL-10和ECM降解相關(guān)蛋白MMP-9、EMMPRIN以及P13K、Akt、mTOR的表達(dá),CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況。通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)SMAD3與miR-145的靶向關(guān)系,同時(shí),將pEGFP-N1-SMAD3轉(zhuǎn)染COPD模型細(xì)胞后,RT-PCR、Western blot檢測(cè)IL-6、IL-8、IL-10、MMP-9、EMMPRIN及P13K、Akt、mTOR的表達(dá)。結(jié)果有COPD的吸煙者肺組織中miR-145低表達(dá)、SMAD3高表達(dá);miR-145能夠抑制COPD模型細(xì)胞IL-6、IL-8、... 

【文章來源】：實(shí)用藥物與臨床. 2020,23(12)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

RT-PCR檢測(cè)不同樣品肺組織中miR-145、SMAD3的表達(dá)

首先,通過TargetScan、miRanda和PicTar數(shù)據(jù)庫(kù)分析比對(duì),結(jié)果顯示,SMAD3-3’UTR中包含了能夠與miR-145完全互補(bǔ)的一段序列(圖5A)。熒光素酶活性分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-145 mimics+pGL3-SMAD3-3’UTR-WT組與NC mimics+pGL3-SMAD3-3′UTR-WT組比較,熒光素酶活性顯著降低,而突變型兩組相比熒光素酶活性沒有顯著變化(圖5B)。然后,將miR-145 mimics /inhibitor轉(zhuǎn)染支氣管上皮細(xì)胞后,RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示,miR-145 mimics組與NC mimics組比較,miR-145 mimics能夠抑制SMAD3的表達(dá)(圖5C～D),miR-145 inhibitor組與NC inhibitor 組比較,與以上結(jié)果完全相反(圖5C～D)。圖3 RT-PCR、Western blot方法檢測(cè)miR-145 mimics/inhibitor對(duì)MMP-9、EMMPRIN表達(dá)的影響

RT-PCR、Western blot方法檢測(cè)miR-145 mimics/inhibitor對(duì)MMP-9、EMMPRIN表達(dá)的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3033076