目的探討miR-145通過SMAD3調(diào)節(jié)慢性阻塞性肺疾�。–OPD）的發(fā)生及機制。方法檢測延安大學(xué)附屬醫(yī)院有COPD的吸煙者、無COPD的吸煙者、無COPD的未吸煙者肺組織中miR-145、SMAD3的表達水平。用20%CEM處理支氣管上皮細胞后,構(gòu)建COPD的細胞模型,將miR-145 mimics/inhibitor轉(zhuǎn)染該細胞后,通過ELISA方法檢測細胞上清中IL-6、IL-8、IL-10表達水平,RT-PCR、Western blot檢測SMAD3、IL-6、IL-8、IL-10和ECM降解相關(guān)蛋白MMP-9、EMMPRIN以及P13K、Akt、mTOR的表達,CCK-8法檢測細胞的增殖情況。通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測SMAD3與miR-145的靶向關(guān)系,同時,將pEGFP-N1-SMAD3轉(zhuǎn)染COPD模型細胞后,RT-PCR、Western blot檢測IL-6、IL-8、IL-10、MMP-9、EMMPRIN及P13K、Akt、mTOR的表達。結(jié)果有COPD的吸煙者肺組織中miR-145低表達、SMAD3高表達;miR-145能夠抑制COPD模型細胞IL-6、IL-8、... 

【文章來源】：實用藥物與臨床. 2020,23(12)

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【部分圖文】：

RT-PCR檢測不同樣品肺組織中miR-145、SMAD3的表達

首先,通過TargetScan、miRanda和PicTar數(shù)據(jù)庫分析比對,結(jié)果顯示,SMAD3-3’UTR中包含了能夠與miR-145完全互補的一段序列(圖5A)。熒光素酶活性分析實驗結(jié)果顯示,miR-145 mimics+pGL3-SMAD3-3’UTR-WT組與NC mimics+pGL3-SMAD3-3′UTR-WT組比較,熒光素酶活性顯著降低,而突變型兩組相比熒光素酶活性沒有顯著變化(圖5B)。然后,將miR-145 mimics /inhibitor轉(zhuǎn)染支氣管上皮細胞后,RT-PCR和Western blot結(jié)果顯示,miR-145 mimics組與NC mimics組比較,miR-145 mimics能夠抑制SMAD3的表達(圖5C～D),miR-145 inhibitor組與NC inhibitor 組比較,與以上結(jié)果完全相反(圖5C～D)。圖3 RT-PCR、Western blot方法檢測miR-145 mimics/inhibitor對MMP-9、EMMPRIN表達的影響

RT-PCR、Western blot方法檢測miR-145 mimics/inhibitor對MMP-9、EMMPRIN表達的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同HRCT表型慢性阻塞性肺疾病患者呼吸功能和HRCT定量指標(biāo)的對比研究[J]. 王強,羅勇.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2020(13)
[2]探討慢性阻塞性肺疾病患者炎性因子的表達及臨床意義[J]. 張鵬,王靖雯,路堯,孫輝.  四川解剖學(xué)雜志. 2019(04)
[3]慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者行呼吸康復(fù)干預(yù)的應(yīng)用研究[J]. 巫瑞,權(quán)紅麗,王改萍,付蓉.  工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病. 2019(06)
[4]中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白在慢性阻塞性肺疾病中的研究進展[J]. 羅浩,萬方,楊雪,李瑞雪,程義局,杜娟.  世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2019(85)
[5]歐前胡素通過TGF-β1/Smad3和PI3K/Akt信號通路對哮喘小鼠氣道重塑模型的影響[J]. 咸哲民,王重陽,樸玉華,李俊峰,姜京植,趙雨喆,李良昌,樸紅梅,延光海.  中國藥理學(xué)通報. 2018(12)



本文編號：3033076