嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）作為一種新發(fā)傳染病,2003年4月WHO已正式宣布SARS-冠狀病毒（SARS-CoV,SARS Coronavirus）是導(dǎo)致SARS的病原體。然而2003年軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所卻從北京第一例確診SARS患者及其母親的咽拭子標(biāo)本中分離到了呼腸病毒,在我們進(jìn)一步研究呼腸病毒的基因序列時(shí),卻意外的在標(biāo)本中檢測(cè)到了脊髓灰質(zhì)炎病毒。為了進(jìn)一步研究SARS的病原學(xué),我們采用細(xì)胞培養(yǎng)法、RT-PCR、中和試驗(yàn)、血清學(xué)檢測(cè)等方法對(duì)SARS患者發(fā)病時(shí)及痊愈2年后的臨床標(biāo)本進(jìn)行呼腸病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒的分離鑒定。 在SARS發(fā)病時(shí),我們利用HEp-2細(xì)胞對(duì)4份確診SARS患者的咽拭子標(biāo)本進(jìn)行病毒分離,接種后細(xì)胞均在培養(yǎng)第3d開始出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)。采用隨機(jī)引物RT-PCR對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行了病毒核酸擴(kuò)增,結(jié)果在4份標(biāo)本中擴(kuò)增出了脊髓灰質(zhì)炎病毒,3份標(biāo)本中擴(kuò)增到了呼腸病毒,4份咽拭子標(biāo)本接種HEp-2細(xì)胞后,細(xì)胞病變均不能被呼腸病毒1、2、3型抗血清中和,但卻可以被含有1型脊髓灰質(zhì)炎病毒的混合標(biāo)準(zhǔn)抗血清中和,中和試驗(yàn)結(jié)果顯示這4份咽拭子標(biāo)本中均含有Ⅰ型脊髓灰質(zhì)炎... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：108 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

脊髓灰質(zhì)炎病毒PcR產(chǎn)物克隆至-Taeys載體后Eocul酶切產(chǎn)物的電泳圖譜

了逆轉(zhuǎn)錄PcR擴(kuò)增病毒核酸，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)克隆至Taeys載:在4份標(biāo)本中均擴(kuò)增出了脊髓灰質(zhì)炎病毒基因片段，在3D、YU)中擴(kuò)增出了呼腸病毒基因片段。髓灰質(zhì)炎病毒PcR產(chǎn)物克隆至-Taeys載體后Eocul酶切產(chǎn)物的電

圖5.脊髓灰質(zhì)炎病毒突變位點(diǎn)的測(cè)序結(jié)果及圖譜(2)新分離呼腸病毒52、S3、54、L3片段的序列測(cè)定及分析:隨機(jī)引物錨定PCR法擴(kuò)增新分離呼腸病毒基因組并克隆至-Taesy載體后測(cè)序，結(jié)果顯示:所擴(kuò)增的部分呼腸病毒核普酸序列與GneeBakn中己知的呼腸病毒1、2、3型的核昔酸序列具有高度同源性，新分離呼腸病毒52、S3、54、L3片段的全基因組核普酸序列，與GneeBakn中呼腸病毒1、2、3型核普酸序列的同源性分別為83%一92%、74%一79%和85%一9k20r;根據(jù)其核普酸序列推定的相應(yīng)氨基酸序列與呼腸病毒1、2、3型的同源性分別為95%一99%、85%一96%和95%一99%，詳細(xì)結(jié)果見表6。表7.52、53、54、L3序列與呼腸病毒l、2、3型同源性比較核營(yíng)酸同源性(%)氨基酸同源性(%)R3一98959599R2一9585%90只︸︸、︸︸、︶，ng9Q聲Q了R3一858785R292一79777674﹃氣了j︸I口，‘O八O八O八QRx一5352L3S4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]中國(guó)急性弛緩性麻痹（AFP）病例中脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗株VP1區(qū)基因變異的研究[J]. 張勇,祝雙利,趙蓉,李杰,陳立,侯曉輝,王東艷,張禮璧,許文波.  病毒學(xué)報(bào). 2004(01)
[3]SARS患者雙份血清中抗呼腸病毒和冠狀病毒中和抗體的測(cè)定[J]. 朱虹,貌盼勇,何君,馬靜,胡燕,朱雷,黃如統(tǒng),端青.  軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊. 2004(01)
[4]新分離呼腸病毒BYD1株實(shí)驗(yàn)感染食蟹猴動(dòng)物模型的初步建立[J]. 朱虹,左庭婷,何君,甘永華,檀華,張浩杰,宋立華,黃如統(tǒng),周育森,端青.  軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊. 2003(05)
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[7]呼腸病毒,在SARS患者中分離與初步鑒定[J]. 端青,朱虹,楊怡,李衛(wèi)華,周育森,何君,何昆,張浩杰,周濤,宋立華,甘永華,檀華,靳寶鋒,李慧艷,左庭婷,陳德蕙,張學(xué)敏.  科學(xué)通報(bào). 2003(13)
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