本文關(guān)鍵詞：COPD患者外周血巨噬細(xì)胞移動抑制因子的表達及意義，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是當(dāng)今世界危害人類健康的重要疾病,其患病率高,大約5-13%,在年齡大于40歲的人群中,患病率大約8-13%。香煙暴露和室內(nèi)空氣污染是COPD最重要的致病因素,而且隨著吸煙率的持續(xù)上升,COPD的患病率也逐漸上升,特別是婦女和發(fā)展中國家。吸煙者罹患COPD的發(fā)病率接近20%,而不吸煙者只有4%。因此,預(yù)計到2030年,COPD將逐漸上升為第三位的致死病因,并給很多國家造成了很大的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。最近的研究顯示,慢性阻塞性肺病不僅是肺部的異常炎癥反應(yīng),而且還是一種全身的炎癥反應(yīng),包括系統(tǒng)性氧化應(yīng)激,循環(huán)炎癥細(xì)胞的激活和循環(huán)中炎性細(xì)胞因子水平的增加。COPD患者肺部的局部炎癥,可以通過直接釋放細(xì)胞因子和趨化因子,或間接通過激活外周血炎癥細(xì)胞來影響其他組織器官。因此,COPD不但影響中小氣道、肺實質(zhì)和肺血管,而且引起很多的合并癥,例如心血管疾病,糖尿病,抑郁,體重減輕和肌肉功能異常。目前的研究證明,多種炎癥因子參與了COPD的發(fā)病發(fā)展過程,導(dǎo)致了小氣道的纖維化和肺泡的破壞。綜上所述,炎癥反應(yīng)在COPD發(fā)病機制中有著重要的地位,針對炎癥介質(zhì)的治療可能是COPD有效的抗炎治療作用點。但因為太多炎癥介質(zhì)參與了COPD的炎癥過程,針對單一的炎癥介質(zhì)并不能有很多的臨床獲益,所以明確炎癥介質(zhì)的特征和它們的相互作用,找出導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的炎癥介質(zhì)源頭,對COPD的抗炎治療是至關(guān)重要的 核因子-kappaB (nuclear factor-kappaB, NF-κB)是一種與許多基因啟動子上κ B序列特異性結(jié)合而啟動基因轉(zhuǎn)錄功能的蛋白。在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞分化和生長、細(xì)胞黏附和凋亡等方面發(fā)揮著重要作用。在非激活狀態(tài)下,NF-κB與I κ B非共價結(jié)合形成復(fù)合物,在胞漿內(nèi)以無活性的二聚體形式存在。當(dāng)活化信號(包括TNF-α、LPS、氧化劑、氧自由基、放射線、紫外線、病毒及其代謝產(chǎn)物等)暴露時,NF-κB與I κ B解離,促使NF-κB活化,活化的NF-κB進入核內(nèi),結(jié)合至DNA反應(yīng)元件啟動子,激活炎癥基因的轉(zhuǎn)錄,誘導(dǎo)細(xì)胞因子、粘附分子、血管活性調(diào)節(jié)因子上調(diào),進一步使得下游細(xì)胞因子濃度升高,包括白細(xì)胞介素-6(interleukin-6, IL-6)。因此NF-κB參與炎癥反應(yīng)的啟動,而且很多研究已證明,NF-kB在COPD的發(fā)病機制起著重要作用,而作為其下游產(chǎn)物的IL-6,也被證實在COPD的炎癥反應(yīng)中起著重要作用。 巨噬細(xì)胞移動抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor, MIF)作為一種前炎癥因子,與多種炎癥性疾病及自身免疫性疾病的發(fā)生及進展有關(guān),其通過NF-kB通路,誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的與COPD發(fā)病過程中相同的炎癥介質(zhì),從而在炎癥性疾病中起重要作用；而以往的研究表明NF-kB與COPD發(fā)病密切相關(guān),由此推斷MIF可能與COPD相關(guān),并在COPD發(fā)病過程中起著關(guān)鍵作用。本研究通過測定COPD患者外周血MIF、NF-κB、IL-6的表達水平,旨在探討MIF在COPD發(fā)病機制中的可能作用。 目的：研究慢性阻塞性肺疾病患者外周血中巨噬細(xì)胞移動抑制因子的表達水平及其意義。分析MIF、NF-kB、IL-6三者是否相關(guān),初步判斷它們分別作為炎癥反應(yīng)過程中上、中、下游產(chǎn)物在COPD病程中的作用。分析MIF、NF-kappaB、IL-6三者與慢性阻塞性肺病患者FEV1%是否相關(guān)。 方法：研究對象分為3組：慢性阻塞性肺病急性加重期組、穩(wěn)定期組和對照組。所有患者均接受肺功能檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：自身免疫性疾病(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血管炎)、惡性腫瘤、泌尿系疾病(急慢性腎小球腎炎、腎病綜合癥)、消化道疾病(肝炎、肝硬化、炎癥性腸病)、冠心病(包括心絞痛、心肌梗死)、呼吸道疾病(支氣管哮喘、過敏性鼻炎、活動性肺結(jié)核)。入選標(biāo)準(zhǔn)：COPD按2010GOLD制定的COPD診斷標(biāo)準(zhǔn)。對照組無COPD,并無排除標(biāo)準(zhǔn)中相應(yīng)疾病,在性別、年齡、吸煙構(gòu)成等一般資料上與COPD組相匹配。選擇2012年2月至2012年7月慢性阻塞性肺病急性加重期及穩(wěn)定期患者各25例,無慢性阻塞性肺病的對照組25例,抽取靜脈血,使用ELISA方法測定血漿MIF、IL-6的濃度,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)MIF陽性的CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞的比率,實時熒光定量PCR技術(shù)(RT-PCR)檢測外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)MIF-mRNA的表達水平,Western blot測定PBMC NF-κB含量。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS13.0軟件,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)用x±s表示。先進行正態(tài)分布檢測,如非正態(tài)分布,進行排秩,排秩后采用Kruskal—Wallis檢驗。正態(tài)分布數(shù)據(jù),進行one-way ANOVA檢驗,若方差齊,進一步的兩兩比較采用LSD檢驗；若方差不齊,采用Welch檢驗,進一步的兩兩比較采用Dunnett'sT3檢驗；相關(guān)性分析：正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用Pearson直線相關(guān)性分析,非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用Spearman相關(guān)性分析。 結(jié)果： 1.急性加重期組25例,其中男20例,女5例,平均年齡(62.2±4.9)歲,平均病程7.78年,FEV15pred51.9±8.2,FEV1/FVC56.8±5.7;穩(wěn)定期組25例,其中男19例,女6例,平均年齡(59.2±5.1)歲,平均病程6.56年,FEV1%pred53.4±7.3,FEV1/FVC60.9±4.4;對照組25例,其中男20例,女5例；平均年齡(59.4±4.6)歲,FEV1%pred87.8±5.6,FEV1/FVC82.5±11.3;均有吸煙史。 2.淋巴細(xì)胞亞群表達MIF的結(jié)果：CD4+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率(CD4+MIF+T淋巴細(xì)胞/CD4+T淋巴細(xì)胞的百分比)在急性加重期組、穩(wěn)定期、對照組分別為(76.81±14.65)%,(60.09±16.03)%、(65.88%±16.64)%,急性加重期組相對于穩(wěn)定期組、對照組均有明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.002,0.037),穩(wěn)定期組相對于對照組并沒有獲得統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.302)；COPD穩(wěn)定期組,CD4+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率與FEV1%負(fù)相關(guān)(r=-0.521,P=0.008)；CD8+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率(CD8+MIF+T淋巴細(xì)胞/CD8+淋巴細(xì)胞的百分比)在急性加重期組、穩(wěn)定期、對照組分別為(76.94±19.96)%、(58.48±25.28)%、(55.92%±29.90)%,急性加重期組相對于穩(wěn)定期組、對照組均有明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.010,0.012),穩(wěn)定期組相對于對照組并沒有獲得統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.975); COPD穩(wěn)定期組,CD8+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率與FEV1%負(fù)相關(guān)(r=-O.663,P0.01)。 3.血漿MIF的檢測結(jié)果：急性加重期組、穩(wěn)定期組、對照組血漿MIF濃度分別為128.94±30.31pg/ml,119.57±17.64pg/ml,123.22±33.55pg/ml,各組間均無統(tǒng)計學(xué)差異(F=0.786,P=-0.460)。 4.血漿MIF與MIF+T淋巴細(xì)胞的相關(guān)性結(jié)果：血漿MIF與CD4+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率無相關(guān)性,r值為0.029,P值為0.803。血漿MIF與CD8+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率也無相關(guān)性,r值為0.142,P值為0.224。 5. PBMC MIF-mRNA的表達結(jié)果：急性加重期組、穩(wěn)定期、對照組分別為0.0303±0.03075,0.0140±0.01819,0.0186±0.00711,急性加重期組相對于穩(wěn)定期組、對照組均有明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.004,0.036)。穩(wěn)定期組相對于對照組并沒有獲得統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.422)。 6.MIF基因表達與蛋白表達的相關(guān)性分析結(jié)果：PBMC MIF的基因表達與CD4+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率及CD8+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率結(jié)果一致,相關(guān)分析顯示MIF-mRNA與CD4+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率(r=0.323,P=0.010),與CD8+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率(r=0.354,P=0.004)均成正相關(guān)；與血漿MIF無相關(guān)(r=0.087,P=0.459)。 7. NF-κB在COPD急性加重期組、穩(wěn)定期組、對照組的表達分別為0.9659±0.0754,0.9496±0.1439,0.9182±0.0513,3組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(F=1.675,P=0.194)；以慢性阻塞性肺病的嚴(yán)重程度分級(Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級),NF-κB在3級患者中也無統(tǒng)計學(xué)差異。 8.IL-6在COPD急性加重期組、穩(wěn)定期組、對照組濃度(pg/ml)分別為31.88±19.46,44.46±16.18,23.86±9.93,在COPD急性加重期組、穩(wěn)定期組及對照組3組間具有統(tǒng)計學(xué)的差異(x2=24.457,P0.01),3組的平均秩次分別為37.94,54.54,24.52,根據(jù)平均秩次進一步推斷,穩(wěn)定期組濃度最高,其次為急性加重期組；而在COPDⅡ級、Ⅲ級、Ⅳ級3組間,IL-6也具有統(tǒng)計學(xué)的差異(x2=10.328,P=0.006),3組的平均秩次分別為20.48,35.54,29.67,根據(jù)平均秩次進一步推斷,Ⅲ級、Ⅳ級明顯高于Ⅱ級。無論是COPD穩(wěn)定期患者還是急性加重期患者,血清IL-6的表達水平均與FEV1負(fù)相關(guān),r分別為-0.497,-0.613,P值分別為0.011,0.001。 9.CRP在COPD急性加重期組、穩(wěn)定期組、對照組濃度(mg/L)分別為28.13±38.56,8.21±16.31,2.86±4.85,在COPD急性加重期組、穩(wěn)定期組及對照組3組間具有統(tǒng)計學(xué)的差異(x2=33.051,P0.01),3組的平均秩次分別為55.48,38.46,20.06,根據(jù)平均秩次進一步推斷,急性加重期組濃度最高,其次為穩(wěn)定期組。 10.MIF與NF-κB、IL-6的相關(guān)性分析結(jié)果：在COPD穩(wěn)定期組,CD4+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率、CD8+MIF+T淋巴細(xì)胞陽性率與NF-κB相關(guān),r分別為0.497,0.854,P值分別為0.036,0.01；不論COPD急性加重期組還是穩(wěn)定期組,MIF(包括基因、蛋白)與IL-6之間均無相關(guān)。 結(jié)論： 1.CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞MIF表達增多在COPD的急性加重過程中起作用,但不直接參與慢性阻塞性肺病的全身慢性炎癥。 2. COPD患者外周血單個核細(xì)胞NF-κB無明顯升高,提示其并不直接參與慢性阻塞性肺病患者的全身慢性炎癥。 3. COPD穩(wěn)定期患者外周血IL-6表達明顯增加,表明其與COPD的慢性炎癥相關(guān),在氣道炎癥、氣道阻塞發(fā)生發(fā)展過程中可能具有重要作用；無論是COPD穩(wěn)定期患者還是急性加重期患者,血清IL-6的表達水平均與FEV1%負(fù)相關(guān),在一定程度上反映氣道阻塞的嚴(yán)重程度。
【關(guān)鍵詞】：慢性阻塞性肺病 巨噬細(xì)胞移動抑制因子 核因子κB 白細(xì)胞介素6
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563.9
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-17
• 前言17-26
• 第一章 病例選擇,血漿、外周血單個核細(xì)胞的收集26-29
• 一、研究對象26-27
• 二、血漿、外周血單個核細(xì)胞的收集27-29
• 第二章 MIF在COPD外周血的表達及意義29-44
• 一、材料與方法29-35
• 二、結(jié)果35-40
• 三、討論40-44
• 第三章 NF-κB在COPD外周血的表達及意義44-54
• 一、材料與方法44-49
• 二、結(jié)果49-51
• 三、討論51-54
• 第四章 IL-6在COPD外周血的表達及意義54-60
• 一、材料與方法54-56
• 二、結(jié)果56-57
• 三、討論57-60
• 本研究的不足之處60-61
• 全文結(jié)論61-62
• 參考文獻62-70
• 攻讀學(xué)位期間成果70-71
• 致謝71-73
• 統(tǒng)計學(xué)證明73

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：COPD患者外周血巨噬細(xì)胞移動抑制因子的表達及意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：296203