支氣管哮喘(asthma)是一種全球性的嚴(yán)重威脅公眾健康的常見(jiàn)疾病,并且發(fā)病率仍呈上升趨勢(shì),但對(duì)其發(fā)病機(jī)理還不完全明確。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),哮喘是一種以T淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞等炎性細(xì)胞在氣道浸潤(rùn)為特征的慢性氣道炎癥,其免疫異常表現(xiàn)為CD4~+T細(xì)胞的過(guò)度活化,Th1/Th2細(xì)胞比例和功能的失衡。而樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells, DCs)是機(jī)體內(nèi)抗原遞呈功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cells, APCs),是目前發(fā)現(xiàn)的唯一能在體外激活初始T(na(?)ve T)細(xì)胞的APC,其在誘導(dǎo)Th1/Th2型細(xì)胞反應(yīng)平衡和偏移過(guò)程中起關(guān)鍵作用。為了從分子水平探討DC在小鼠哮喘模型中的作用,本研究用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏小鼠,建立哮喘模型。然后用重組小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rmGM-CSF)和重組白細(xì)胞介素4(recombinant mouse interleukin 4, rmIL-4)在體外從骨髓中誘導(dǎo)擴(kuò)增出DC,觀察其形態(tài)學(xué)變化,用流式細(xì)胞儀對(duì)其表面分子CD80、CD40、CD86及33D1進(jìn)行鑒定,并比較這些分子在兩組之間表達(dá)水平的差異,非同位素的混合淋巴反應(yīng)測(cè)定其刺激同種異體T細(xì)胞的增殖能力;采用多探針的核酸酶保護(hù)分析(ribonuclease protection assay, RPA)來(lái)檢測(cè)DC中細(xì)胞因子mRNA的轉(zhuǎn)錄;最后用凝膠電泳遷移率阻滯(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)來(lái)研究DC中核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor κB, NF-κB)的活化情況,為了解DC在哮喘發(fā)病機(jī)理中的作用提供一定的分子基礎(chǔ),為未來(lái)基于DC的哮喘治療提供新的思路。主要成果及結(jié)論如下: 1.哮喘鼠和對(duì)照鼠的骨髓細(xì)胞在含rmGM-CSF和rmIL-4的完全培養(yǎng)液培養(yǎng),可從中誘導(dǎo)出大量的DC,第2天出現(xiàn)點(diǎn)狀集落、細(xì)胞呈圓形,繼續(xù)培養(yǎng),集落逐漸增多、細(xì)胞變大;第4天在倒置顯微鏡下可看到大小不一的樹(shù)突,有少數(shù)細(xì)胞開(kāi)始懸浮;至第7天,細(xì)胞大多懸浮,呈現(xiàn)DC的典型外形—樹(shù)突狀或星狀,
【學(xué)位單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類(lèi)】：R562.25
【部分圖文】：

不同Dc數(shù)目刺激同種異體T細(xì)胞增殖的比較
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本文編號(hào)：2872368