發(fā)布時間：2020-10-22 05:29

　　 目的: 探討全氟化碳原液(PFC)和新型全氟化碳乳劑(NPE)對A549細胞生長的影響;觀察PFC和NPE對TNF-α攻擊的A549細胞鈉離子通道(ENaC)表達的影響。 方法: 1.PFC對A549細胞生長影響及對TNF-α攻擊的A549細胞ENaC表達影響的研究。分為對照組、TNF-α組、PFC組和治療組共四組。TNF-α以100ng/ml的濃度攻擊細胞,PFC以1/10細胞培養(yǎng)液體積的比例與細胞共同培養(yǎng)。正常組細胞不做任何處理,實驗組細胞分別用不同因素處理2、4、6h,用MTT法測各組細胞活力變化;提取細胞RNA和蛋白,分別用real-time PCR法檢測細胞ENaCα、β、γ亞單位表達水平變化;ENaC-α蛋白表達水平采用Western-blot法檢測。 2. NPE對A549細胞生長影響及對TNF-α攻擊的A549細胞ENaC表達影響的研究。分為對照組、TNF-α組、NPE組和治療組共四組。TNF-α以100ng/ml的濃度攻擊細胞,NPE以1/10細胞培養(yǎng)液體積的比例與細胞共同培養(yǎng)。正常組細胞不做任何處理,實驗組細胞分別用不同因素處理2、4、6h,用MTT法測各組細胞活力變化;提取細胞RNA和蛋白,分別用real-time PCR法檢測ENaCα、β、γ亞單位表達水平變化;ENaC-α蛋白表達水平采用Western-blot法檢測。 結(jié)果: 1. PFC對A549細胞生長影響:2h組:與對照組細胞相比較:TNF-α組、PFC組和治療組細胞基本形態(tài)無明顯變化。4h組:TNF-α組細胞細胞生長狀態(tài)不良,死亡細胞較多。PFC組和治療組細胞一般情況較TNF-α組好,死亡細胞數(shù)較少。6h各組細胞一般情況與4h組無明顯差別。 2. PFC對TNF-α攻擊的A549細胞活力的影響:2h組:TNF-α組、PFC組、治療組細胞吸光度值與對照組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P﹥0.05)。4h組:PFC組細胞吸光度值為與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P﹥0.05);TNF-α組、治療組細胞吸光度值較對照組降低,治療組吸光度值較TNF-α組增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)。6h各組吸光度值比較結(jié)果與4h組相似。 3. real-time PCR結(jié)果顯示:2h組:與對照組相比,各組ENaC-α、β、γ亞單位mRNA水平變化不明顯;處理4h后,與對照組相比,TNF-α組細胞ENaC各亞單位mRNA水平均有不同程度的降低,PFC組細胞則與對照組無明顯差異,治療組細胞ENaC各亞單位mRNA水平也有不同程度降低,與TNF-α組同時相點相比,差異無統(tǒng)計學意義。6h組情況與4h組相同。 4. Western-blot結(jié)果顯示:2h組:與對照組相比,各組ENaC-α蛋白表達變化不明顯;4h組和6h組中,有TNF-α組細胞ENaC-α蛋白表達明顯下調(diào),其他各組細胞ENaC-α蛋白表達與對照組并無差別。 5.NPE對A549細胞生長影響:2h組:與對照組細胞相比較:TNF-α組、NPE組、治療組細胞基本形態(tài)無明顯變化。4h組:TNF-α致傷組細胞細胞生長狀態(tài)不良,死亡細胞較多。NPE組和治療組細胞一般情況較TNF-α組好,細胞形態(tài)變化不明顯,死亡細胞數(shù)較少。6h組各組細胞一般情況與4h組無明顯區(qū)別。 6. NPE對TNF-α攻擊的A549細胞活力的影響: 2h組:NPE組、TNF-α組、治療組細胞吸光度值與對照組比較,無明顯差異(P﹥0.05)。4h組:NPE組細胞吸光度值與對照組比較,無明顯差異(P﹥0.05);TNF-α組、治療組細胞吸光度值較對照組明顯降低,治療組吸光度值較T組增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)。6h各組吸光度值比較結(jié)果與4h組相似。 7. real-time PCR結(jié)果顯示:2h組:與對照組相比,各組ENaC-α、β、γ亞單位mRNA水平變化不明顯;處理4h后,與對照組相比,TNF-α組細胞ENaC各亞單位mRNA水平均有不同程度的降低,NPE組細胞則與對照組無明顯差別,治療組細胞ENaC各亞單位mRNA水平也有不同程度降低,但較TNF-α組同時相點相比有明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義。6h組情況與4h組相同。 8. Western-blot結(jié)果顯示:2h組:與對照組相比,各組ENaC-α蛋白表達變化不明顯;4h組和6h組中, TNF-α組細胞ENaC-α蛋白表達明顯下調(diào),治療組細胞ENaC-α蛋白表達與TNF-α組相比有明顯增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05),NPE組細胞ENaC-α蛋白表達與對照組無明顯差異。 結(jié)論: 1. TNF-α可對A549細胞生長及活力產(chǎn)生抑制作用,且可以下調(diào)細胞ENaC-α、β、γ亞單位及ENaC-α蛋白表達水平。 2.PFC可能通過物理屏障作用對TNF-α攻擊的A549細胞產(chǎn)生一定的保護作用,對細胞ENaC-α、β、γ亞單位及ENaC-α蛋白表達的下調(diào)無改善作用。 3.NPE可改善TNF-α對A549細胞生長的抑制作用,同時可以改善TNF-α對細胞ENaC各基因及ENaC-α蛋白表達的下調(diào)。
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2008
【中圖分類】：R563.8
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
研究論文 全氟化碳對A549 細胞鈉離子通道表達影響的研究
    前言
    第一部分 全氟化碳原液（PFC）對A549 細胞鈉離子通道表達影響的研究
        前言
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
    第二部分 新型全氟化碳乳劑（NPE）對A549 細胞鈉離子通道表達影響的研究
        前言
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
    全文結(jié)論
        附圖
        參考文獻
綜述 急性肺損傷時肺泡上皮鈉離子通道研究進展
致謝
個人簡歷

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本文編號：2851165