發(fā)布時(shí)間：2020-10-22 05:29

　　 目的: 探討全氟化碳原液(PFC)和新型全氟化碳乳劑(NPE)對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)的影響;觀察PFC和NPE對(duì)TNF-α攻擊的A549細(xì)胞鈉離子通道(ENaC)表達(dá)的影響。 方法: 1.PFC對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)影響及對(duì)TNF-α攻擊的A549細(xì)胞ENaC表達(dá)影響的研究。分為對(duì)照組、TNF-α組、PFC組和治療組共四組。TNF-α以100ng/ml的濃度攻擊細(xì)胞,PFC以1/10細(xì)胞培養(yǎng)液體積的比例與細(xì)胞共同培養(yǎng)。正常組細(xì)胞不做任何處理,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分別用不同因素處理2、4、6h,用MTT法測(cè)各組細(xì)胞活力變化;提取細(xì)胞RNA和蛋白,分別用real-time PCR法檢測(cè)細(xì)胞ENaCα、β、γ亞單位表達(dá)水平變化;ENaC-α蛋白表達(dá)水平采用Western-blot法檢測(cè)。 2. NPE對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)影響及對(duì)TNF-α攻擊的A549細(xì)胞ENaC表達(dá)影響的研究。分為對(duì)照組、TNF-α組、NPE組和治療組共四組。TNF-α以100ng/ml的濃度攻擊細(xì)胞,NPE以1/10細(xì)胞培養(yǎng)液體積的比例與細(xì)胞共同培養(yǎng)。正常組細(xì)胞不做任何處理,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分別用不同因素處理2、4、6h,用MTT法測(cè)各組細(xì)胞活力變化;提取細(xì)胞RNA和蛋白,分別用real-time PCR法檢測(cè)ENaCα、β、γ亞單位表達(dá)水平變化;ENaC-α蛋白表達(dá)水平采用Western-blot法檢測(cè)。 結(jié)果: 1. PFC對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)影響:2h組:與對(duì)照組細(xì)胞相比較:TNF-α組、PFC組和治療組細(xì)胞基本形態(tài)無明顯變化。4h組:TNF-α組細(xì)胞細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不良,死亡細(xì)胞較多。PFC組和治療組細(xì)胞一般情況較TNF-α組好,死亡細(xì)胞數(shù)較少。6h各組細(xì)胞一般情況與4h組無明顯差別。 2. PFC對(duì)TNF-α攻擊的A549細(xì)胞活力的影響:2h組:TNF-α組、PFC組、治療組細(xì)胞吸光度值與對(duì)照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05)。4h組:PFC組細(xì)胞吸光度值為與對(duì)照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹥0.05);TNF-α組、治療組細(xì)胞吸光度值較對(duì)照組降低,治療組吸光度值較TNF-α組增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。6h各組吸光度值比較結(jié)果與4h組相似。 3. real-time PCR結(jié)果顯示:2h組:與對(duì)照組相比,各組ENaC-α、β、γ亞單位mRNA水平變化不明顯;處理4h后,與對(duì)照組相比,TNF-α組細(xì)胞ENaC各亞單位mRNA水平均有不同程度的降低,PFC組細(xì)胞則與對(duì)照組無明顯差異,治療組細(xì)胞ENaC各亞單位mRNA水平也有不同程度降低,與TNF-α組同時(shí)相點(diǎn)相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6h組情況與4h組相同。 4. Western-blot結(jié)果顯示:2h組:與對(duì)照組相比,各組ENaC-α蛋白表達(dá)變化不明顯;4h組和6h組中,有TNF-α組細(xì)胞ENaC-α蛋白表達(dá)明顯下調(diào),其他各組細(xì)胞ENaC-α蛋白表達(dá)與對(duì)照組并無差別。 5.NPE對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)影響:2h組:與對(duì)照組細(xì)胞相比較:TNF-α組、NPE組、治療組細(xì)胞基本形態(tài)無明顯變化。4h組:TNF-α致傷組細(xì)胞細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不良,死亡細(xì)胞較多。NPE組和治療組細(xì)胞一般情況較TNF-α組好,細(xì)胞形態(tài)變化不明顯,死亡細(xì)胞數(shù)較少。6h組各組細(xì)胞一般情況與4h組無明顯區(qū)別。 6. NPE對(duì)TNF-α攻擊的A549細(xì)胞活力的影響: 2h組:NPE組、TNF-α組、治療組細(xì)胞吸光度值與對(duì)照組比較,無明顯差異(P﹥0.05)。4h組:NPE組細(xì)胞吸光度值與對(duì)照組比較,無明顯差異(P﹥0.05);TNF-α組、治療組細(xì)胞吸光度值較對(duì)照組明顯降低,治療組吸光度值較T組增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。6h各組吸光度值比較結(jié)果與4h組相似。 7. real-time PCR結(jié)果顯示:2h組:與對(duì)照組相比,各組ENaC-α、β、γ亞單位mRNA水平變化不明顯;處理4h后,與對(duì)照組相比,TNF-α組細(xì)胞ENaC各亞單位mRNA水平均有不同程度的降低,NPE組細(xì)胞則與對(duì)照組無明顯差別,治療組細(xì)胞ENaC各亞單位mRNA水平也有不同程度降低,但較TNF-α組同時(shí)相點(diǎn)相比有明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6h組情況與4h組相同。 8. Western-blot結(jié)果顯示:2h組:與對(duì)照組相比,各組ENaC-α蛋白表達(dá)變化不明顯;4h組和6h組中, TNF-α組細(xì)胞ENaC-α蛋白表達(dá)明顯下調(diào),治療組細(xì)胞ENaC-α蛋白表達(dá)與TNF-α組相比有明顯增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05),NPE組細(xì)胞ENaC-α蛋白表達(dá)與對(duì)照組無明顯差異。 結(jié)論: 1. TNF-α可對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)及活力產(chǎn)生抑制作用,且可以下調(diào)細(xì)胞ENaC-α、β、γ亞單位及ENaC-α蛋白表達(dá)水平。 2.PFC可能通過物理屏障作用對(duì)TNF-α攻擊的A549細(xì)胞產(chǎn)生一定的保護(hù)作用,對(duì)細(xì)胞ENaC-α、β、γ亞單位及ENaC-α蛋白表達(dá)的下調(diào)無改善作用。 3.NPE可改善TNF-α對(duì)A549細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用,同時(shí)可以改善TNF-α對(duì)細(xì)胞ENaC各基因及ENaC-α蛋白表達(dá)的下調(diào)。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R563.8
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
研究論文 全氟化碳對(duì)A549 細(xì)胞鈉離子通道表達(dá)影響的研究
    前言
    第一部分 全氟化碳原液（PFC）對(duì)A549 細(xì)胞鈉離子通道表達(dá)影響的研究
        前言
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
        小結(jié)
    第二部分 新型全氟化碳乳劑（NPE）對(duì)A549 細(xì)胞鈉離子通道表達(dá)影響的研究
        前言
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
    全文結(jié)論
        附圖
        參考文獻(xiàn)
綜述 急性肺損傷時(shí)肺泡上皮鈉離子通道研究進(jìn)展
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷

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本文編號(hào)：2851165