目的分離大鼠肺成纖維細(xì)胞和腹腔肥大細(xì)胞作體外培養(yǎng),通過肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞接觸和非接觸共體培養(yǎng)觀察,了解肥大細(xì)胞對(duì)肺成纖維細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及功能的影響。 方法在無菌條件下用胰酶消化法分離成年大鼠肺成纖維細(xì)胞并用免疫組化鑒定,體外培養(yǎng)3代后用作實(shí)驗(yàn)；收集大鼠腹腔灌洗液,在無菌條件下用肥大細(xì)胞分離液分離和純化肥大細(xì)胞,用甲苯胺藍(lán)染色鑒定,實(shí)驗(yàn)分為三組：對(duì)照組：正常大鼠肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)；接觸共育組：肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞接觸共體培養(yǎng)；非接觸共育組：肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞非接觸共體培養(yǎng)，用Transwell共育皿區(qū)隔開肥大細(xì)胞和肺成纖維細(xì)胞,每組設(shè)3復(fù)孔,并作細(xì)胞爬片,共培養(yǎng)5天,每日鏡下計(jì)數(shù)肺成纖維細(xì)胞數(shù)量,建立生長(zhǎng)曲線,5天后通過免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)肌成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)志物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-smooth muscleactin, a-SMA), MTT比色法測(cè)定肺成纖維細(xì)胞增殖率,通過ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)液中bFGF、TGFβ1及Ⅰ型膠原蛋白含量。 結(jié)果①細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示：接觸共育組各時(shí)段成纖維細(xì)胞的數(shù)目均較非接觸共育組和對(duì)照組明顯增多。接觸共育組中成纖維細(xì)胞增殖數(shù)與非接觸共育組和對(duì)照組比較,有明顯差異(P0.05)；非接觸共育組和對(duì)照組比較,差異不明顯(P0.05).②MTT結(jié)果：接觸共育組肺成纖維細(xì)胞光密度值明顯高于對(duì)照組和非接觸共育組(P0.05),提示接觸共育組肺成纖維細(xì)胞增殖明顯高于對(duì)照組和非接觸共育組,非接觸共育組比對(duì)照組也高,但差異不明顯(P0.05).③免疫細(xì)胞化學(xué)染色可見接觸共育組有大量α—SMA染色陽(yáng)性細(xì)胞,與非接觸共育組和對(duì)照組比較,α—SMA染色的平均光密度值(IOD)明顯增加,(P0.05),提示接觸共育組肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞明顯增加。非接觸共育組比對(duì)照組高,但差異不明顯(P0.05)。④ELISA法檢測(cè)結(jié)果提示,在肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞接觸共育培養(yǎng)組,培養(yǎng)液中bFGF、TGFβ1及Ⅰ型膠原蛋白含量明顯高于非接觸共育組和對(duì)照組(P0.05),提示接觸共育組肺成纖維細(xì)胞合成Ⅰ型膠原蛋白和分泌bFGF、TGFβ1明顯增加,非接觸共育組比對(duì)照組也高,但差異不明顯(P0.05)。 結(jié)論肥大細(xì)胞影響肺成纖維細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化及膠原合成；肥大細(xì)胞與肺成纖維細(xì)胞緊密接觸有利于bFGF、TGFβ1的合成；肥大細(xì)胞可能通過緊密接觸及合成的bFGF、TGFβ1來促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)化及膠原合成；
【學(xué)位單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R563.9
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 大鼠肺成纖維細(xì)胞和腹腔肥大細(xì)胞體外分離 培養(yǎng)和鑒定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 肥大細(xì)胞對(duì)肺成纖維細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及功能的影響
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
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【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2850536