第一部分 大鼠肺血栓栓塞癥時(shí)及尿激酶治療后血管內(nèi)皮細(xì)胞上細(xì)胞間粘附分子-1,P-選擇素的變化 目的觀察大鼠肺血栓栓塞癥(pulmonary thromboembolism,PTE)時(shí),肺血管內(nèi)皮細(xì)胞上細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion-1,ICAM-1),P-選擇素-(P selectin,Ps)的水平和溶栓治療的影響。 方法采用自體血栓回輸法建立PTE模型,隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、溶栓組。各組動(dòng)物在栓塞后1小時(shí),3小時(shí),24小時(shí),72小時(shí),120小時(shí)五個(gè)時(shí)間段分別處死,取動(dòng)脈血做血?dú)夥治?行病理分析,免疫組化和原位雜交的方法檢測(cè)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM-1和Ps的蛋白及mRNA的水平。 結(jié)果肺栓塞后病理可見(jiàn)肺動(dòng)脈血栓形成,炎性反應(yīng)明顯。肺血管內(nèi)皮上ICAM-1蛋白及mRNA表達(dá)在栓塞后3小時(shí)開(kāi)始增高(P0.01),而Ps蛋白及mRNA表達(dá)在栓塞后1小時(shí)開(kāi)始增高(P0.01)。溶栓治療后,栓塞、出血、萎縮減輕,但炎性反應(yīng)有所加重,肺血管內(nèi)皮上ICAM-1和Ps的水平再次升高(P0.01)。 結(jié)論:PTE后細(xì)胞粘附分子在引起急性肺損傷中起了重要作用,溶栓治療可以改善PTE的血?dú)?但對(duì)肺組織的炎性損傷沒(méi)有幫助,可能與缺血再灌注損傷有關(guān),因此,在PTE溶栓治療的同時(shí)抗炎治療也是非常重要的。 第二部分 大鼠肺血栓栓塞癥NO的變化及紅花注射液的影響 目的觀察大鼠肺血栓栓塞癥NO水平的變化,探討紅花注射液或溶栓治療對(duì)大鼠肺血栓栓塞癥的影響及其作用機(jī)制。 方法150只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、PTE模型組、UK治療組、紅花組(SA組)和UK+SA治療組。采用自體血栓回輸法建立動(dòng)物模型。取動(dòng)脈血測(cè)血?dú)?常規(guī)病理學(xué)檢測(cè),用硝酸還原酶法檢測(cè)血清中NO的水平,免疫組化及原位雜交法檢測(cè)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM-1、P選擇素的表達(dá)水平,利用RT-PCR法檢測(cè)肺組織中蛋白激酶CmRNA的表達(dá)。 結(jié)果1:病理及血?dú)?PTE組、UK組和SA組肺組織病理?yè)p傷明顯,UK+SA組病理改變明顯減輕。UK組和UK+SA組血?dú)庥忻黠@改善。2:免疫組化及原位雜交顯示:SA組,UK+SA組肺血管內(nèi)皮細(xì)胞上P-選擇素蛋白及mRNA的表達(dá)較模型組、溶栓組明顯降低(P0.01)。SA組,UK+SA組肺血管內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM-1蛋白及mRNA的表達(dá)除了1小時(shí)外,其它各時(shí)間段較模型組、溶栓組明顯降低(P0.05);3:NO的水平:模型組NO的水平隨時(shí)間推移而減低,而UK組,SA組和UK+SA組NO水平均有所增高,其中UK+SA組上升幅度最大,與模型組、UK組比較,下降極為顯著(P0.05)。4:蛋白激酶C表達(dá):模型組PKC水平是隨時(shí)間推移而逐漸增加的,UK組PKC水平較模型組有所增加,而SA組,UK+SA組PKC的水平比模型組的水平下降,UK+SA組下降更為明顯(P0.05)。 結(jié)論P(yáng)TE后溶栓結(jié)合紅花注射液治療可通過(guò)抑制蛋白激酶C,促進(jìn)NO的生成,下調(diào)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM-1及P選擇素的表達(dá),減輕PTE時(shí)肺的炎性損傷。 第三部分 紅花含藥血清在缺氧復(fù)氧條件下對(duì)大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 P-選擇素及細(xì)胞間粘附因子-1基因表達(dá)的影響 目的:觀察紅花含藥血清在缺氧復(fù)氧條件下對(duì)大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞P-選擇素及細(xì)胞間粘附因子-1基因表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討NF-KB途徑對(duì)P-選擇素及細(xì)胞間粘附因子-1基因的調(diào)控,由此分析肺栓塞溶栓后缺血再灌注損傷的部分機(jī)制。 方法:分別在常氧、缺氧、復(fù)氧及紅花含藥血清干預(yù)條件下觀察原代分離培養(yǎng)的大鼠肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞P-選擇素及細(xì)胞間粘附因子-1基因的表達(dá),采用細(xì)胞培養(yǎng)、RT-PCR、Western blot、中藥血清藥理學(xué)方法、免疫細(xì)胞化學(xué)染色法等技術(shù),觀察不同條件下大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞P-選擇素及細(xì)胞間粘附因子-1基因的表達(dá)變化;復(fù)氧后給予紅花含藥血清干預(yù)觀察NF-kB與P-選擇素及細(xì)胞間粘附因子-1基因表達(dá)的變化。 結(jié)果:顯示常氧組細(xì)胞1h、6h、12h、24h各個(gè)時(shí)間點(diǎn)其P-選擇素及ICAM-1 mRNA水平?jīng)]有明顯差異(P0.05),而缺氧組的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)P-選擇素及ICAM-1mRNA水平有所上調(diào),但較同時(shí)間點(diǎn)常氧組表達(dá)無(wú)顯著性差異。缺氧12h后再給氧1 h、6h、12hP-選擇素及ICAM-1mRNA及蛋白的表達(dá)均明顯上調(diào),缺氧后再給氧6 h上調(diào)最顯著;NF-kB蛋白表達(dá)亦明顯上調(diào)。缺氧12h后再給氧同時(shí)給予紅花含藥血清干預(yù)組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)P-選擇素及ICAM-1mRNA上調(diào)水平明顯下降,NF-kB蛋白表達(dá)亦明顯下調(diào),同單純?nèi)毖踉俳o氧組相比,差異有顯著性(P均≤0.01)。 結(jié)論:單純?nèi)毖鯛顟B(tài)下大鼠肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞P-選擇素及ICAM-1表達(dá)無(wú)明顯變化,缺氧復(fù)氧條件下P-選擇素及ICAM-1過(guò)度表達(dá),可能參與了肺栓塞溶栓后缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制,紅花注射液可通過(guò)抑制NF-KB對(duì)于這種應(yīng)激損傷有明顯的保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類】：R563.5;R285
【部分圖文】：

對(duì)照組肺組織

溶栓組肺組織

正常對(duì)照組(HEx100)
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2840434