急性肺血栓栓塞癥時粘附分子的作用及中藥紅花注射液治療的影響

發(fā)布時間：2020-10-14 08:40

　　第一部分大鼠肺血栓栓塞癥時及尿激酶治療后血管內(nèi)皮細胞上細胞間粘附分子-1,P-選擇素的變化目的觀察大鼠肺血栓栓塞癥(pulmonary thromboembolism,PTE)時,肺血管內(nèi)皮細胞上細胞間粘附分子-1(intercellular adhesion-1,ICAM-1),P-選擇素-(P selectin,Ps)的水平和溶栓治療的影響。方法采用自體血栓回輸法建立PTE模型,隨機分為對照組、模型組、溶栓組。各組動物在栓塞后1小時,3小時,24小時,72小時,120小時五個時間段分別處死,取動脈血做血氣分析,行病理分析,免疫組化和原位雜交的方法檢測肺血管內(nèi)皮細胞上ICAM-1和Ps的蛋白及mRNA的水平。結(jié)果肺栓塞后病理可見肺動脈血栓形成,炎性反應明顯。肺血管內(nèi)皮上ICAM-1蛋白及mRNA表達在栓塞后3小時開始增高(P0.01),而Ps蛋白及mRNA表達在栓塞后1小時開始增高(P0.01)。溶栓治療后,栓塞、出血、萎縮減輕,但炎性反應有所加重,肺血管內(nèi)皮上ICAM-1和Ps的水平再次升高(P0.01)。結(jié)論:PTE后細胞粘附分子在引起急性肺損傷中起了重要作用,溶栓治療可以改善PTE的血氣,但對肺組織的炎性損傷沒有幫助,可能與缺血再灌注損傷有關(guān),因此,在PTE溶栓治療的同時抗炎治療也是非常重要的。第二部分大鼠肺血栓栓塞癥NO的變化及紅花注射液的影響目的觀察大鼠肺血栓栓塞癥NO水平的變化,探討紅花注射液或溶栓治療對大鼠肺血栓栓塞癥的影響及其作用機制。方法150只大鼠隨機分為對照組、PTE模型組、UK治療組、紅花組(SA組)和UK+SA治療組。采用自體血栓回輸法建立動物模型。取動脈血測血氣,常規(guī)病理學檢測,用硝酸還原酶法檢測血清中NO的水平,免疫組化及原位雜交法檢測肺血管內(nèi)皮細胞上ICAM-1、P選擇素的表達水平,利用RT-PCR法檢測肺組織中蛋白激酶CmRNA的表達。結(jié)果1:病理及血氣:PTE組、UK組和SA組肺組織病理損傷明顯,UK+SA組病理改變明顯減輕。UK組和UK+SA組血氣有明顯改善。2:免疫組化及原位雜交顯示:SA組,UK+SA組肺血管內(nèi)皮細胞上P-選擇素蛋白及mRNA的表達較模型組、溶栓組明顯降低(P0.01)。SA組,UK+SA組肺血管內(nèi)皮細胞上ICAM-1蛋白及mRNA的表達除了1小時外,其它各時間段較模型組、溶栓組明顯降低(P0.05);3:NO的水平:模型組NO的水平隨時間推移而減低,而UK組,SA組和UK+SA組NO水平均有所增高,其中UK+SA組上升幅度最大,與模型組、UK組比較,下降極為顯著(P0.05)。4:蛋白激酶C表達:模型組PKC水平是隨時間推移而逐漸增加的,UK組PKC水平較模型組有所增加,而SA組,UK+SA組PKC的水平比模型組的水平下降,UK+SA組下降更為明顯(P0.05)。結(jié)論PTE后溶栓結(jié)合紅花注射液治療可通過抑制蛋白激酶C,促進NO的生成,下調(diào)肺血管內(nèi)皮細胞上ICAM-1及P選擇素的表達,減輕PTE時肺的炎性損傷。第三部分紅花含藥血清在缺氧復氧條件下對大鼠肺動脈內(nèi)皮細胞 P-選擇素及細胞間粘附因子-1基因表達的影響目的:觀察紅花含藥血清在缺氧復氧條件下對大鼠肺動脈內(nèi)皮細胞P-選擇素及細胞間粘附因子-1基因表達的影響,進一步探討NF-KB途徑對P-選擇素及細胞間粘附因子-1基因的調(diào)控,由此分析肺栓塞溶栓后缺血再灌注損傷的部分機制。方法:分別在常氧、缺氧、復氧及紅花含藥血清干預條件下觀察原代分離培養(yǎng)的大鼠肺動脈血管內(nèi)皮細胞P-選擇素及細胞間粘附因子-1基因的表達,采用細胞培養(yǎng)、RT-PCR、Western blot、中藥血清藥理學方法、免疫細胞化學染色法等技術(shù),觀察不同條件下大鼠肺動脈內(nèi)皮細胞P-選擇素及細胞間粘附因子-1基因的表達變化;復氧后給予紅花含藥血清干預觀察NF-kB與P-選擇素及細胞間粘附因子-1基因表達的變化。結(jié)果:顯示常氧組細胞1h、6h、12h、24h各個時間點其P-選擇素及ICAM-1 mRNA水平?jīng)]有明顯差異(P0.05),而缺氧組的各個時間點P-選擇素及ICAM-1mRNA水平有所上調(diào),但較同時間點常氧組表達無顯著性差異。缺氧12h后再給氧1 h、6h、12hP-選擇素及ICAM-1mRNA及蛋白的表達均明顯上調(diào),缺氧后再給氧6 h上調(diào)最顯著;NF-kB蛋白表達亦明顯上調(diào)。缺氧12h后再給氧同時給予紅花含藥血清干預組各個時間點P-選擇素及ICAM-1mRNA上調(diào)水平明顯下降,NF-kB蛋白表達亦明顯下調(diào),同單純?nèi)毖踉俳o氧組相比,差異有顯著性(P均≤0.01)。結(jié)論:單純?nèi)毖鯛顟B(tài)下大鼠肺動脈血管內(nèi)皮細胞P-選擇素及ICAM-1表達無明顯變化,缺氧復氧條件下P-選擇素及ICAM-1過度表達,可能參與了肺栓塞溶栓后缺血再灌注損傷的發(fā)病機制,紅花注射液可通過抑制NF-KB對于這種應激損傷有明顯的保護作用。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2005
【中圖分類】：R563.5;R285
【部分圖文】：

對照組,肺組織