急性肺損傷(acute lung injury，ALI)／急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratorydistress syndrome，ARDS)是臨床上比較常見的危重病癥，死亡率高達(dá)40％。ALI是ARDS的前期。ALI／ARDS的主要病理改變是彌漫性的肺泡-毛細(xì)血管膜的損傷，可由嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克、酸中毒及有害氣體吸入等多種因素引起，臨床表現(xiàn)為呼吸窘迫和頑固性低氧血癥。除機(jī)械通氣外，目前對ALI／ARDS的治療仍缺乏有效的手段。尋找新的治療措施是目前ALI／ARDS研究中的重點(diǎn)。 上世紀(jì)九十年代以來，干細(xì)胞研究領(lǐng)域取得了一系列突破性進(jìn)展，為利用干細(xì)胞修復(fù)組織損傷，治療一些疑難和復(fù)雜疾病提供了可能性。文獻(xiàn)相繼報道了干細(xì)胞在治療心力衰竭、糖尿病等方面的一些進(jìn)展，展示了其作為一種新型治療手段的良好前景。干細(xì)胞是一類具有無限自我更新能力和多向分化潛能的細(xì)胞，按發(fā)生學(xué)來源可分為胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell，ESC)和成體干細(xì)胞(somatic stem cell)。成體干細(xì)胞存在于機(jī)體的各種組織器官中，在病理狀態(tài)或外因誘導(dǎo)下可以表現(xiàn)出不同程度的再生和更新能力。某些情況下，成體干細(xì)胞表現(xiàn)出很強(qiáng)的跨系或跨胚層分化潛能，即具有“可塑性(plasticity)”。 骨髓(bone marrow)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)屬于成體干細(xì)胞，目前報道它具有向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞甚至肝臟細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞等方向分化的多種潛能。而且骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過骨髓吸取就可以得到，取材容易，并在體外有很大的擴(kuò)增潛能，因此利用MSCs治療疾病具有突出的優(yōu)點(diǎn)。 本研究觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的急性肺損傷中的作用，主要進(jìn)行了以下幾方面的工作： 1．小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定。取小鼠后肢股骨和脛骨，吸取骨髓進(jìn)行全骨髓培養(yǎng)，得到MSCs，并做細(xì)胞免疫化學(xué)染色，檢測MSCs特異表面標(biāo)記。 2．建立LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型。利用小鼠咽后壁吸入LPS的方法造成小鼠肺損傷；稱重計算肺水腫指數(shù)；肺組織切片HE染色觀察組織病理改變；ELISA檢測肺泡灌洗液和肺組織勻漿中IL-1β含量。 3．供體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的移植和效果評價。將供體MSCs用Brdu標(biāo)記后行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，觀察細(xì)胞核中Brdu標(biāo)記效果；將標(biāo)記過的MSCs制成細(xì)胞懸液，通過尾靜脈移植入肺損傷小鼠體內(nèi)，移植后4天做肺組織切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色及雙染色觀察移植細(xì)胞的植入和分化狀態(tài)；檢測肺水腫指數(shù)，肺泡灌洗液和肺組織勻漿中IL-1β含量。 結(jié)果表明： 1、培養(yǎng)的MSCs細(xì)胞多呈集落樣生長，體積較小，成梭形或柳葉形，細(xì)胞核明顯，核漿比大。細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色顯示，表面標(biāo)記CD44陽性，而造血系表面標(biāo)記CD34陰性。 2、吸入LPS后，小鼠出現(xiàn)典型的肺損傷病理改變，炎癥細(xì)胞浸潤，肺泡間隔增厚，毛細(xì)血管充血，肺泡內(nèi)可見透明膜形成，嚴(yán)重者肺泡正常結(jié)構(gòu)消失。損傷小鼠肺水腫指數(shù)和肺組織勻漿1L-1β含量明顯增加。 3、用Brdu標(biāo)記小鼠MSCs后，利用抗Brdu單克隆抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，顯示標(biāo)記的細(xì)胞出現(xiàn)Brdu陽性；標(biāo)記的MSCs移植入同種異體的小鼠肺損傷模型內(nèi)，小鼠肺部出現(xiàn)外源性MSCs，這些細(xì)胞表現(xiàn)出上皮細(xì)胞表型，免疫組織化學(xué)雙染色顯示Brdu陽性細(xì)胞也表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)志物——細(xì)胞角蛋白(Cytokeratin，CK)。治療后小鼠與治療前相比，肺水腫指數(shù)和肺組織勻漿IL-1β含量下降。 上述研究結(jié)果提示：利用全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)的MSCs特點(diǎn)符合已知MSCs的特征；吸入LPS后小鼠出現(xiàn)典型的急性肺損傷病理改變；將用Brdu標(biāo)記的外源性MSCs通過尾靜脈移植到肺損傷小鼠體內(nèi)，MSCs可遷移至肺損傷部位，并表現(xiàn)出上皮細(xì)胞表型，參與損傷的肺上皮的修復(fù)，并減輕肺水腫程度，減少炎癥因子釋放。
【學(xué)位單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R563.8
【部分圖文】：

二、小鼠急性肺損傷模型小鼠咽后壁吸入lmglm!的LPSS即172h后，取肺組織進(jìn)行切片，日E染色，如圖3C、30所示，可以觀察到與正常肺組織(圖3A、3B)相比，損傷肺組織出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤，肺泡間隔增厚，毛細(xì)血管充血，肺泡管、肺泡腔內(nèi)可見透明膜形成，嚴(yán)重者肺泡正常結(jié)構(gòu)消失，幾乎全部被炎癥細(xì)胞充斥。 A(X10)B(X20) C(X10)D(X20)圖3小鼠肺組織日E染色 Fig3.HEstainingofIungtissue AandB、 HESteiningofnaturaltissueCandD、HEs怕 iningofinjuredtissue取出肺組織，測量肺水腫指數(shù)。如圖4和圖5所示，損傷小鼠肺水腫指數(shù)比正常小鼠增加了24.26%，肺組織勻漿IL一

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)記將MSCs用Brdu標(biāo)記后，用抗Brdu單克隆抗體做免疫細(xì)胞化學(xué)染色，OAB顯顯示已被標(biāo)記的細(xì)胞。如圖6顯示，用Brdu標(biāo)記的培養(yǎng)MSCs細(xì)胞核區(qū)顯示棕(圖6A)，而未用BFdu標(biāo)記的MSC則不顯色(圖6B)。A(X20)B(X20)圖6免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示MSC的日rdu標(biāo)記 Fig6.labelingMSCwithBrdubeforeinjeotionA、 labelingMSCwithBrdu， brown15anti一B川uB、 MSCnotlabeledbyBrdu

Fig3.HEstainingofIungtissue AandB、 HESteiningofnaturaltissueCandD、HEs怕 iningofinjuredtissue取出肺組織，測量肺水腫指數(shù)。如圖4和圖5所示，損傷小鼠肺水腫指數(shù)比正常小鼠增加了24.26%，肺組織勻漿IL一，p含量增加了543.5%。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 鄧楊梅;謝強(qiáng)敏;平燕婷;;急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征治療藥物的研究進(jìn)展[J];世界臨床藥物;2006年01期

本文編號：2819912