目的 ①了解肺部感染病人軍團(tuán)菌的感染狀況； ②了解軍團(tuán)菌感染組、病人對(duì)照組和健康人對(duì)照組TLR2和TLR4mRNA在外周血PBMC中的表達(dá)情況； ③探討相關(guān)細(xì)胞因子在軍團(tuán)菌感染中的作用及其與TLR2、TLR4的關(guān)系。 方法 ①收集277例肺部感染患者尿液標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定尿液中的的Lp1特異性尿抗原；采用PCR法擴(kuò)增尿液中軍團(tuán)菌屬特異性16SrRNA基因。 ②軍團(tuán)菌感染的判定標(biāo)準(zhǔn)為Lp1特異性尿抗原陽性或尿液中軍團(tuán)菌屬特異性基因擴(kuò)增陽性。 ③將17例軍團(tuán)菌感染者作為病例組，隨機(jī)抽取20例軍團(tuán)菌檢測(cè)陰性的肺部感染者為病人對(duì)照組，同期收集20例健康體檢者為健康人對(duì)照組，采用real-time RT-PCR方法檢測(cè)軍團(tuán)菌感染組、病人對(duì)照組和健康人對(duì)照組TLR2和TLR4mRNA，分析PBMC TLR2和TLR4mRNA與軍團(tuán)菌感染的關(guān)系； ④將17例軍團(tuán)菌感染者作為病例組，隨機(jī)抽取20例軍團(tuán)菌檢測(cè)陰性的肺部感染者為病人對(duì)照組，同期收集20例健康體檢者為健康人對(duì)照組，ELISA方法分別檢測(cè)軍團(tuán)菌感染組、病人對(duì)照組和健康人對(duì)照組血清中IL-1、2、6、TNF-α的濃度，分析軍團(tuán)菌感染與相關(guān)細(xì)胞因子的關(guān)系及TLR2、4的表達(dá)與細(xì)胞因子水平的關(guān)系。 ⑤采用SPSS13.0軟件進(jìn)行資料的錄入和分析。 結(jié)果 ①277例患者中，由于部分患者少尿。對(duì)243例尿標(biāo)本進(jìn)行了軍團(tuán)菌16SrRNA基因PCR擴(kuò)增陽性的為10人，陽性率為6.58%。對(duì)213例LP1尿抗原檢測(cè),共有10例檢測(cè)結(jié)果陽性，LP1尿抗原陽性率為4.0%(10/213)。2個(gè)檢測(cè)方法同時(shí)陽性的結(jié)果有3例。軍團(tuán)菌總陽性率為6.13%。不同基礎(chǔ)病種軍團(tuán)菌感染率不同，以血液病組最高（30.00%），神經(jīng)系統(tǒng)疾病組次之（17.64%），慢性阻塞性肺病組最低（11.71%）。 ②比較病例組與病人對(duì)照組、病例組與健康人對(duì)照組的PBMC中TLR2mRNA和TLR4mRNA相對(duì)表達(dá)量，real-time RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示軍團(tuán)菌感染組比健康人對(duì)照組的TLR2Ct/β-actinCt比值顯著減少，即軍團(tuán)菌感染組TLR2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于正常健康人組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p㩳0.0001。TLR2 mRNA表達(dá)未在軍團(tuán)菌感染組與病人對(duì)照組顯示有差異,p=0.983。軍團(tuán)菌感染組比健康人對(duì)照組的TLR4Ct/β-actinCt比值顯著減少，即軍團(tuán)菌感染組TLR4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于健康人對(duì)照組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p㩳0.0001。TLR4 mRNA表達(dá)未在軍團(tuán)菌感染組與病人對(duì)照組顯示有差異,p =0.224。 ③軍團(tuán)菌感染組IL-2的濃度（41.072±7.153pg/ml）比健康人對(duì)照組（4.263±1.132pg/ml）高；IL-6濃度（216.663±24.346pg/ml）比健康人對(duì)照組（125.325±11.936pg/ml）高；TNF-α濃度（389.348±77.832pg/ml）比健康人對(duì)照組（39.137±7.389pg/ml）高，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。但I(xiàn)L-1的濃度在軍團(tuán)菌感染組與健康人對(duì)照組間未見到差異。以IL-2代表Th1型細(xì)胞因子，IL-6代表Th2型細(xì)胞因子計(jì)算Th1/Th2比值，Th1/Th2比值軍團(tuán)菌感染組（0.3834±0.11）與健康人對(duì)照組（0.246±0.0981）比較，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以TLR2/β-actin Ct值與IL-1、2、6以TNF-α及的濃度作相關(guān)分析，結(jié)果顯示TLR2/β-actin Ct與IL-2、6及TNF-α的分泌呈負(fù)相關(guān)關(guān)系相關(guān)系數(shù)分別為-0.783、-0.816、-0.664（p0.05），隨著TLR2 mRNA的增加，相應(yīng)細(xì)胞因子分泌增加。以TLR4/β-actin Ct值與IL-1、2、6以TNF-α及的濃度作相關(guān)分析，結(jié)果顯示TLR4/β-actin Ct值與IL-1、2、6及TNF-α的分泌呈負(fù)相關(guān)關(guān)系相關(guān)系數(shù)分別為-0.691、-0.713、-0.768、-0.889（p0.05），隨著TLR4mRNA的增加，相應(yīng)細(xì)胞因子分泌增加。 結(jié)論 ①太原地區(qū)肺部感染患者中，軍團(tuán)菌感染者占6.13%。 ②PBMC中TLR2及TLR4mRNA的表達(dá)量在軍團(tuán)菌感染組與其他肺炎感染者組無差異，但均高于健康人對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示TLR2和TLR4在軍團(tuán)菌病感染中有一定作用。 ③TLR2、4與Th1及Th2細(xì)胞因子分泌有正相關(guān)關(guān)系，提示其在機(jī)體抗軍團(tuán)菌感染狀態(tài)中的生物學(xué)作用可能是通過細(xì)胞因子的分泌來實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R563.1
【部分圖文】：

山西 醫(yī)科 大 學(xué)碩 表 2- 2 T L R4 m RN A 在 軍 團(tuán)菌 感 染 組 和 正 常 人 對(duì) 照組 PB M C 表 達(dá)的 差異 分組 例 數(shù) TL R4 C t /β - ac t i nC t 值（ x ±軍團(tuán) 菌 感染 組 17 1. 2 18 0 ±0 . 03 9 9 5 病人 對(duì) 照組 20 1 .1 98 4 ±0 . 06 0 9 3 健康 人 對(duì)照 組 20 1. 2 77 9 ±0 . 03 9 9 2 1 4 . 55 5 , P 㩳0 . 0 00 1

=1 4 . 55 5 , P 㩳0 . 0 00 1圖 1 R e al - t im e R T- PC R T LR 2 m RN A 擴(kuò)增 曲 線

圖 3 R e a l- t im e R T- P CR T LR 4 m RN A 擴(kuò)增 曲 線 圖 4 R e a l- t im e R T- P CR T LR 4 m RN A 溶解 曲線 3 討論

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2819443