【摘要】： 目的 支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘)是一種常見的呼吸道疾病，由多種因素引起的以可逆性氣道阻塞、氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥為特征的免疫變態(tài)反應(yīng)性疾病。術(shù)前并存哮喘病史者，呼吸道的反應(yīng)性明顯增高，容易誘發(fā)支氣管痙攣。包括藥物、輸血、誤吸、手術(shù)及機(jī)械刺激等多種麻醉手術(shù)因素，均可致哮喘的突然發(fā)作。嚴(yán)重時(shí)可危及患者生命。 由于靜脈麻醉藥異丙酚和氯胺酮具有氣道舒張作用，因此常用于哮喘病人的麻醉誘導(dǎo)和維持。哮喘的本質(zhì)是一種以氣道反應(yīng)性增高為特征的慢性氣道炎癥，氣道痙攣只是哮喘的一個(gè)方面。以往的研究往往局限于這兩種藥物對(duì)氣道的舒張作用，而關(guān)于哮喘發(fā)作時(shí)，藥物對(duì)肺臟其他方面的影響研究甚少。人們只是推測(cè)這兩種藥物可能通過緩解支氣管痙攣，抑制肺臟微血管的滲出，清除氧自由基，減少肺表面活性物質(zhì)破壞，而改善肺臟的病變，但尚無此方面的研究。 基于上述原因，本實(shí)驗(yàn)建立了哮喘大鼠模型，并在此基礎(chǔ)上通過哮喘大鼠氣道壓及氣道染料含量的變化，研究異丙酚和氯胺酮對(duì)哮喘大鼠氣道痙攣及氣道滲出的影響；通過光鏡觀察肺臟病理變化，肺臟超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、NO含量和NOS活性的測(cè)定，及免疫組化測(cè)定iNOS和NT表達(dá)，研究異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠肺臟氧化應(yīng)激的影響；通過膜天平測(cè)定肺泡灌洗液(BALF)表面張力的變化，Western-blot法測(cè)定肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)含量，及電鏡觀察肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變，研究異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠肺表面活性物質(zhì)(PS)及SP-A的影響；利用膜片鉗制技術(shù)全細(xì)胞方法記錄不同濃度異丙酚和氯胺酮對(duì)正常和哮喘大鼠單一氣管平滑肌細(xì)胞ATP敏感鉀電流(I_(KATP))的變化，在離子通道方面對(duì)其作用機(jī)制作進(jìn)一 步的探討。本研究為臨床哮喘病人的靜脈麻醉藥選擇提供了充分的實(shí)驗(yàn)依 據(jù)。本實(shí)驗(yàn)分四個(gè)部分，包括：一、異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠氣道痙攣 及氣道滲出作用的研究；二、異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠肺臟氧化應(yīng)激的 影響；三、異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠肺表面活性物質(zhì)及SP－A的影響； 四、異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠單一氣管平滑肌細(xì)胞I。。的影響。 實(shí)驗(yàn)方法 1．實(shí)驗(yàn)材料：2月齡的清潔級(jí) SD大鼠 90只，雌雄不拘，體重 160－ 2209，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。RM－6200四道生理記錄儀 （光電，日本八 小型動(dòng)物呼吸機(jī)（H刪rd 638，美國(guó)八 低溫離心機(jī) （Dupont super T－ZI，美國(guó)廠 722型分光光度計(jì)（上海分析儀器總廠入 O燈mPus AX－70顯微攝像系統(tǒng)（OlymPus，日本）；MetaMomh／OlymPus DP10／BXSI顯微圖像分析系統(tǒng)（Olympus，日本入 MTP－二型膜天平 （華東師大科教儀器廠廠LM－20A函數(shù)記錄儀（上海大華儀表廠人 透 射電鏡（Hitachi H－600，日本）；垂直電極拉制器（Narishige PP－83， 日本人 AXopatch叫 膜片鉗放大器（AXon Insmiment，美國(guó)＊ 雙軌記憶 示波器（VC－10，日本）；AD／DA轉(zhuǎn)換板（Dopdata 1200，美國(guó)）；計(jì)算 機(jī)支持的 pCLAMP 5．5．1程序。卵蛋白 u，美國(guó)入滅活百日咳菌苗 口京生物制品研究所廠 戊巴比妥鈉（上�；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站分裝 廠八氫氧化鋁（沈陽市試劑三廠廠伊文氏藍(lán)（上�；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng) 站分裝廠）；iNOS一抗（Santa C。z Biotechnology Inc，美國(guó)）；抗硝基酪 氨酸（NT）單克隆抗體（C8yman，美國(guó)h免疫組化SP試劑盒門京中 山生物技術(shù)有限公司八NO及NOS試劑盒（南京建成生物工程研究所＊ 膠原酶（hwhington，美國(guó)八鏈霉蛋白酶（Merk，日本入 彈性蛋白酶 矚ina，美國(guó)入格列苯腮矚ina，美國(guó)X三磷酸腺昔二鈉矚ina， 美國(guó)，異丙酚（AstraZeneca，英國(guó)人氯胺酮（上海第一制藥廠人 2．異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠氣道痙攣及氣道滲出的影響：SD大鼠 腹腔注射卵蛋白（OA人氫氧化鋁與滅活百日咳菌苗致敏。注射致敏液2 周后，動(dòng)物隨機(jī)分為5組＊＝6卜 C組（對(duì)照組入靜脈注射生理鹽水； ppo組，靜脈注射異丙酚 50ms·k才‘·h－‘；P100組，靜脈注射異丙酚 ·2· 100mg·kg－’·h－‘；K50組，靜脈注射氯胺酮 50mg·kg－‘·h－‘；K100 組，靜脈注射氯胺酮100mg·kg－‘·h‘。Zndn后靜脈注射伊文氏藍(lán) pB入 30min后靜脈注射 OA激發(fā)哮喘發(fā)作，并維持 30min。觀察氣道 壓、肺系數(shù)、肺濕干重比＼肺含水量、肺組織EB含量變化。 3．異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠肺臟氧化應(yīng)激的影響：SD大鼠致敏及 分組同前，30min后靜脈注射OA激發(fā)哮喘發(fā)作，并維持3h。觀察肺組織 SOD活性＼MDA水平、NO水平和NOS活性；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方 法，測(cè)定iNOS和NT的表達(dá)；并通過光鏡觀察肺臟病理變化。 4．異丙酚、氯胺酮對(duì)哮喘大鼠肺表面活性物質(zhì)及其相關(guān)蛋白A矚P －A）的影響：SD大鼠致敏及分組同前，30min后靜脈注射OA激發(fā)哮喘 發(fā)作，并維持 3 h。觀察 BALF的表面活性；并應(yīng)用 Western－blot法，測(cè) 定BALF中SP－A含量的變化，電鏡觀察哮喘大鼠肺泡11型上皮細(xì)胞超微 結(jié)構(gòu)的變化。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R562.25
【圖文】：

給藥前激發(fā)前l(fā)minsmin15min30mintime恤in)圖1一2靜脈注射氛胺酮后哮喘大鼠氣道壓變化。*與C組比較差異顯著，P<0.05

本文編號(hào)：2805625