【摘要】： 目的 支氣管哮喘(簡稱哮喘)是一種常見的呼吸道疾病，由多種因素引起的以可逆性氣道阻塞、氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥為特征的免疫變態(tài)反應(yīng)性疾病。術(shù)前并存哮喘病史者，呼吸道的反應(yīng)性明顯增高，容易誘發(fā)支氣管痙攣。包括藥物、輸血、誤吸、手術(shù)及機械刺激等多種麻醉手術(shù)因素，均可致哮喘的突然發(fā)作。嚴(yán)重時可危及患者生命。 由于靜脈麻醉藥異丙酚和氯胺酮具有氣道舒張作用，因此常用于哮喘病人的麻醉誘導(dǎo)和維持。哮喘的本質(zhì)是一種以氣道反應(yīng)性增高為特征的慢性氣道炎癥，氣道痙攣只是哮喘的一個方面。以往的研究往往局限于這兩種藥物對氣道的舒張作用，而關(guān)于哮喘發(fā)作時，藥物對肺臟其他方面的影響研究甚少。人們只是推測這兩種藥物可能通過緩解支氣管痙攣，抑制肺臟微血管的滲出，清除氧自由基，減少肺表面活性物質(zhì)破壞，而改善肺臟的病變，但尚無此方面的研究。 基于上述原因，本實驗建立了哮喘大鼠模型，并在此基礎(chǔ)上通過哮喘大鼠氣道壓及氣道染料含量的變化，研究異丙酚和氯胺酮對哮喘大鼠氣道痙攣及氣道滲出的影響；通過光鏡觀察肺臟病理變化，肺臟超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、NO含量和NOS活性的測定，及免疫組化測定iNOS和NT表達(dá)，研究異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠肺臟氧化應(yīng)激的影響；通過膜天平測定肺泡灌洗液(BALF)表面張力的變化，Western-blot法測定肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)含量，及電鏡觀察肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變，研究異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠肺表面活性物質(zhì)(PS)及SP-A的影響；利用膜片鉗制技術(shù)全細(xì)胞方法記錄不同濃度異丙酚和氯胺酮對正常和哮喘大鼠單一氣管平滑肌細(xì)胞ATP敏感鉀電流(I_(KATP))的變化，在離子通道方面對其作用機制作進(jìn)一 步的探討。本研究為臨床哮喘病人的靜脈麻醉藥選擇提供了充分的實驗依 據(jù)。本實驗分四個部分，包括：一、異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠氣道痙攣 及氣道滲出作用的研究；二、異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠肺臟氧化應(yīng)激的 影響；三、異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠肺表面活性物質(zhì)及SP－A的影響； 四、異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠單一氣管平滑肌細(xì)胞I。。的影響。 實驗方法 1．實驗材料：2月齡的清潔級 SD大鼠 90只，雌雄不拘，體重 160－ 2209，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。RM－6200四道生理記錄儀 （光電，日本八 小型動物呼吸機（H刪rd 638，美國八 低溫離心機 （Dupont super T－ZI，美國廠 722型分光光度計（上海分析儀器總廠入 O燈mPus AX－70顯微攝像系統(tǒng)（OlymPus，日本）；MetaMomh／OlymPus DP10／BXSI顯微圖像分析系統(tǒng)（Olympus，日本入 MTP－二型膜天平 （華東師大科教儀器廠廠LM－20A函數(shù)記錄儀（上海大華儀表廠人 透 射電鏡（Hitachi H－600，日本）；垂直電極拉制器（Narishige PP－83， 日本人 AXopatch叫 膜片鉗放大器（AXon Insmiment，美國＊ 雙軌記憶 示波器（VC－10，日本）；AD／DA轉(zhuǎn)換板（Dopdata 1200，美國）；計算 機支持的 pCLAMP 5．5．1程序。卵蛋白 u，美國入滅活百日咳菌苗 口京生物制品研究所廠 戊巴比妥鈉（上�；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝 廠八氫氧化鋁（沈陽市試劑三廠廠伊文氏藍(lán)（上�；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng) 站分裝廠）；iNOS一抗（Santa C。z Biotechnology Inc，美國）；抗硝基酪 氨酸（NT）單克隆抗體（C8yman，美國h免疫組化SP試劑盒門京中 山生物技術(shù)有限公司八NO及NOS試劑盒（南京建成生物工程研究所＊ 膠原酶（hwhington，美國八鏈霉蛋白酶（Merk，日本入 彈性蛋白酶 矚ina，美國入格列苯腮矚ina，美國X三磷酸腺昔二鈉矚ina， 美國，異丙酚（AstraZeneca，英國人氯胺酮（上海第一制藥廠人 2．異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠氣道痙攣及氣道滲出的影響：SD大鼠 腹腔注射卵蛋白（OA人氫氧化鋁與滅活百日咳菌苗致敏。注射致敏液2 周后，動物隨機分為5組＊＝6卜 C組（對照組入靜脈注射生理鹽水； ppo組，靜脈注射異丙酚 50ms·k才‘·h－‘；P100組，靜脈注射異丙酚 ·2· 100mg·kg－’·h－‘；K50組，靜脈注射氯胺酮 50mg·kg－‘·h－‘；K100 組，靜脈注射氯胺酮100mg·kg－‘·h‘。Zndn后靜脈注射伊文氏藍(lán) pB入 30min后靜脈注射 OA激發(fā)哮喘發(fā)作，并維持 30min。觀察氣道 壓、肺系數(shù)、肺濕干重比＼肺含水量、肺組織EB含量變化。 3．異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠肺臟氧化應(yīng)激的影響：SD大鼠致敏及 分組同前，30min后靜脈注射OA激發(fā)哮喘發(fā)作，并維持3h。觀察肺組織 SOD活性＼MDA水平、NO水平和NOS活性；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方 法，測定iNOS和NT的表達(dá)；并通過光鏡觀察肺臟病理變化。 4．異丙酚、氯胺酮對哮喘大鼠肺表面活性物質(zhì)及其相關(guān)蛋白A矚P －A）的影響：SD大鼠致敏及分組同前，30min后靜脈注射OA激發(fā)哮喘 發(fā)作，并維持 3 h。觀察 BALF的表面活性；并應(yīng)用 Western－blot法，測 定BALF中SP－A含量的變化，電鏡觀察哮喘大鼠肺泡11型上皮細(xì)胞超微 結(jié)構(gòu)的變化。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R562.25
【圖文】：

給藥前激發(fā)前l(fā)minsmin15min30mintime恤in)圖1一2靜脈注射氛胺酮后哮喘大鼠氣道壓變化。*與C組比較差異顯著，P<0.05

本文編號：2805625