【摘要】： 矽肺是我國(guó)最為嚴(yán)重的職業(yè)衛(wèi)生問(wèn)題之一，其發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜至今尚未明確，可能涉及：矽塵誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞產(chǎn)生各種細(xì)胞調(diào)節(jié)因子、誘發(fā)氧化應(yīng)激損傷等，從而引起肺成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下大量誘導(dǎo)合成應(yīng)答蛋白，對(duì)細(xì)胞防御具有重要意義。目前關(guān)于應(yīng)答蛋白與矽肺的相關(guān)研究較少，本課題采用離體實(shí)驗(yàn)和人群分子流行病學(xué)方法探討應(yīng)答蛋白與矽肺發(fā)生的關(guān)系。 離體實(shí)驗(yàn)：大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(AMs)和人胚肺成纖維細(xì)胞(HELF)組成體外模型。采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)測(cè)定二氧化硅粉塵處理AMs的培養(yǎng)上清刺激HELF應(yīng)答蛋白如熱休克蛋白70(HSP70)各型(HSP70-1、HSP70-2和HSP70-hom)、熱休克蛋白27(HSP27)、金屬硫蛋白(MT)亞型1A、2A和血紅素氧合酶-1(HO-1)以及與ECM合成、降解有關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP9)及其組織抑制劑1(TIMP1)mRNA表達(dá)，觀察其誘導(dǎo)表達(dá)水平的變化規(guī)律。同時(shí)，利用蛋白質(zhì)組學(xué)的雙向凝膠電泳分離技術(shù)與質(zhì)譜鑒定技術(shù)(2-DE-MS)對(duì)模型中HELF蛋白表達(dá)進(jìn)行分析并采用免疫印跡法(western blot)對(duì)其中的HSP27進(jìn)行驗(yàn)證。 一定范圍內(nèi)，HELF的HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom以及HO-1、HSP27等應(yīng)答蛋白mRNA表達(dá)與二氧化硅(SiO_2)粉塵濃度呈現(xiàn)良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系(P＜0.05)，但不同的應(yīng)答蛋白有不同的誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)特征。各種應(yīng)答蛋白被誘導(dǎo)表達(dá)達(dá)到峰值時(shí)間各有不同。MT1A、MT2A的mRNA表達(dá)雖能被染塵AMs上清誘導(dǎo)，但無(wú)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系(P＞0.05)。MMP9、TIMP1能被明顯誘導(dǎo)表達(dá)，但MMP9、TIMP1mRNA表達(dá)存在一定的時(shí)差，早期以MMP9增高為主，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，以TIMP1表達(dá)增加更為顯著。 2-DE-MS初步鑒定了經(jīng)誘導(dǎo)的HELF的數(shù)個(gè)蛋白：HSP27、PeroxiredoxinⅡ亞型b、鈣網(wǎng)蛋白-3和鈣網(wǎng)蛋白-5類似物等。其中經(jīng)western blot檢測(cè)證實(shí)HSP27蛋白可被染塵AMs上清誘導(dǎo)表達(dá)，其表達(dá)水平隨染塵劑量的增加而增加，與HSP27mRNA表達(dá)趨勢(shì)基本一致。 人群分子流行病學(xué)：采用病例-對(duì)照方法。選擇中國(guó)西南某兩大煤礦519例礦工為研究對(duì)象，其中接塵對(duì)照294例，確診的矽肺患者225例(Ⅰ期134例、Ⅱ期73例、Ⅲ期18例)。采用工種接觸數(shù)值估測(cè)(JEM)對(duì)累積粉塵暴露進(jìn)行接觸評(píng)估；對(duì)礦工的吸煙、飲酒等生活習(xí)慣、職業(yè)衛(wèi)生習(xí)慣、職業(yè)危害認(rèn)知狀況、心理狀況及營(yíng)養(yǎng)狀況等進(jìn)行詳細(xì)的問(wèn)卷調(diào)查；進(jìn)行肺功能檢查并調(diào)查呼吸困難情況等對(duì)接塵礦工的健康效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)；采用采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)方法對(duì)174例非吸煙人群(41名健康對(duì)照、133名礦工)血清中的MMP9／TIMP1進(jìn)行測(cè)定；采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)基因分型技術(shù)對(duì)519例礦工的MMP9(C-1562T)、HSP70-1(G190C)、HSP70-2(A1267G)和HSP70-hom(T2437C)基因進(jìn)行基因分型。 粉塵接觸評(píng)估經(jīng)單因素方差分析：JEM在病例組顯著高于對(duì)照(P＜0.01)。病例組中Ⅰ期矽肺平均JEM：105.4±46.9，Ⅱ期矽肺平均JEM：114.3±40.3，Ⅲ期矽肺平均JEM：92.3±34.3，其別間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。相關(guān)分析顯示：JEM與矽肺分期呈明顯的正相關(guān)(P＜0.01)。研究現(xiàn)場(chǎng)粉塵現(xiàn)況為：各項(xiàng)指標(biāo)基本達(dá)標(biāo)，但是個(gè)別工種平均濃度還有超標(biāo)現(xiàn)象，總粉塵濃度甚至達(dá)到30％。提示還存在一定的隱患。 對(duì)各期矽肺患者的肺通氣功能測(cè)定并結(jié)合詳細(xì)的個(gè)體調(diào)查進(jìn)行分析：矽肺組肺功能參數(shù)中用力肺活量(FVC)、一秒鐘用力呼氣量(FEV1.0)、FEV1.0／FVC的實(shí)測(cè)值、實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值百分比均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)；各項(xiàng)肺功能參數(shù)隨著JEM分級(jí)的增加而呈下降的趨勢(shì)(P＜0.05)；趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)：肺功能異常類型發(fā)生率從高到低依次為限制性通氣功能障礙、阻塞性通氣功能障礙、混合性通氣功能障礙。兩分類Logistic回歸分析，礦工肺功能障礙有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的影響因素按OR值從大到小依次排列為：Ⅱ+Ⅲ期矽肺(OR=12.557)、Ⅰ期矽肺(4.863)、BI＜400(2.971)、BI600～(2.504)、JEM150～(2.390)、BI400～(2.300)、慢支(1.715)。 174例非吸煙人群(健康對(duì)照41例，接塵工人64例，矽肺患者69例)血清MMP9及TIMP1檢測(cè)結(jié)果經(jīng)秩和檢驗(yàn)：與健康對(duì)照組比較，接塵工人血清中MMP9增加較為明顯(P＜0.05)，而TIMP1增加的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，各期矽肺的MMP9、TIMP1濃度呈增加趨勢(shì)，而MMP9／TIMP1比值呈下降趨勢(shì)，且與健康對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。經(jīng)JEM分級(jí)與年齡分級(jí)校正，與接塵對(duì)照組比較，Ⅰ期矽肺患者的TIMP1升高(P＜0.05)，Ⅱ期矽肺患者M(jìn)MP9／TIMP1比值增加(P＜0.05)以及Ⅲ期矽肺患者的MMP9、TIMP1升高(P＜0.05)，而MMP9／TIMP1呈下降趨勢(shì)(P＜0.01)。 基因分型結(jié)果經(jīng)卡方檢驗(yàn)：HSP70-2(A1267G)等位基因頻率在矽肺各期間分布差異有邊緣統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.046)，G位點(diǎn)的攜帶率在Ⅱ+Ⅲ期矽肺中明顯高于Ⅰ期矽肺和接塵對(duì)照組(P＜0.05)。Ⅱ+Ⅲ期矽肺的HSP70-hom(T2437C)的突變純合子(C／C)攜帶率高于接塵對(duì)照組和Ⅰ期矽肺(8.8％vs2.4％和3％)，在相同JEM分級(jí)和相同的布萊克曼吸煙指數(shù)(BI)分級(jí)，攜帶突變純合基因型的個(gè)體發(fā)生矽肺的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于雜合子攜帶個(gè)體與野生純合子攜帶個(gè)體(P＜0.05)。 MMP9-1562C／C野生純合子基因型與HSP70-2G位點(diǎn)攜帶者在Ⅱ+Ⅲ期矽肺中的分布與對(duì)照和Ⅰ期矽肺組比較差異有臨界差異(P=0.087)；JEM(150～)水平下，HSP70-hom2437C突變位點(diǎn)的攜帶者中，其分布在矽肺與對(duì)照組比較也表現(xiàn)出臨界差異(P=0.094)。吸煙和基因間的交互作用分析沒(méi)有發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。LDA分析顯示HSP70-1(190)、HSP70-2(1267)和HSP70-hom(2437)三對(duì)等位基因處于高度連鎖不平衡；PHASE軟件進(jìn)行單倍型分析：HSP70-1，HSP70-2和HSP70-hom的190，1267和2437等位基因構(gòu)成的G-A-T和G-G-T單倍型在Ⅱ+Ⅲ期矽肺中明顯增加，與Ⅰ期矽肺和接塵對(duì)照相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 綜上所述，HELF應(yīng)答蛋白HSP70各型(HSP70-1、HSP70-2和HSP70-hom)、HSP27、HO-1以及MMP9／TIMP1mRNA的表達(dá)能被染SiO_2粉塵的AMs上清誘導(dǎo)并呈現(xiàn)一定的劑量-反應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，但各自存在不同的誘導(dǎo)動(dòng)力學(xué)特征，提示可能是因?yàn)楸谎芯炕虮磉_(dá)的調(diào)控序列存在差異；不同應(yīng)答蛋白表達(dá)存在時(shí)相差，交錯(cuò)對(duì)細(xì)胞起到保護(hù)作用。MMP9／TIMP1mRNA表達(dá)時(shí)相差異提示早期以MMP9表達(dá)及活性增加，基質(zhì)降解為主；TIMP1出現(xiàn)對(duì)MMP9起拮抗作用，隨著MMP9／TIMP平衡打破，膠原沉積。HSP27、PeroxiredoxinⅡ及鈣網(wǎng)蛋白等與SiO_2引起的氧化應(yīng)激密切相關(guān)。 預(yù)防矽肺的發(fā)生除了通過(guò)控制作業(yè)場(chǎng)所的粉塵濃度，同時(shí)做好個(gè)體防護(hù)，減少粉塵暴露；加強(qiáng)礦工職業(yè)衛(wèi)生教育和健康促進(jìn)，識(shí)別易感人群(如HSP70-hom2437C的C／C基因型、以及HSP70-1，HSP70-2和HSP70-hom的G-G-T、G-A-T單倍型攜帶者)。為達(dá)到WHO消除矽肺的目標(biāo)而奮斗。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R135.2
【圖文】：

MTZA M50515253545556 MTITZT3T4TS圖1一 1MRC一5細(xì)胞經(jīng)不同濃度染塵AMs上清誘導(dǎo)后應(yīng)答蛋白和GAPDH的RT一PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖像 A:5102組(24h);B:TioZ組(24h)

MTZA M50515253545556 MTITZT3T4TS圖1一 1MRC一5細(xì)胞經(jīng)不同濃度染塵AMs上清誘導(dǎo)后應(yīng)答蛋白和GAPDH的RT一PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖像 A:5102組(24h);B:TioZ組(24h)

255075濃度(pg/口l)圖1一 4MRC一5細(xì)胞經(jīng)不同濃度染塵AMs上清誘導(dǎo)后MMPg汀IMPI相對(duì)表達(dá)豐度*:vs空白組(24h)， p<0.05:#:vsAMs對(duì)照組(24h)，尸<0.05△:vsTioZ組(24h)，p<0.05;@:vsLps組(24h)，p<0.052.3.3經(jīng)染塵AMs上清誘導(dǎo)后MRC一5細(xì)胞在不同時(shí)間熱應(yīng)答蛋白的表達(dá)結(jié)果見(jiàn)圖1一5，圖1一5顯示了經(jīng)50協(xié)歲 ml5102誘導(dǎo)后，染塵AMs上清誘導(dǎo)MRc一5細(xì)胞后熱應(yīng)答蛋白HSP70一l、HSP70一2、HSP70一hom、HO一l、HSP27mRNA在0、2、8、12、16、24h表達(dá)的變化。HSP70一0h沒(méi)有檢測(cè)到表達(dá);HSP70一l、HSP70一2、HO一lmRNA水平在Zh均可見(jiàn)顯著升高(P<0.05);HSP70一2、HSP27mRNA在8h顯著升高(P<0.05);HSP70一1在sh達(dá)到峰值，在12h后降低

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 樓介治,高樹(shù)貴;矽肺病人康復(fù)療養(yǎng)的效果觀察[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1990年01期

2 成文明;鄉(xiāng)辦石英廠矽肺發(fā)病情況的調(diào)查[J];中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;1993年02期

3 劉峰;鄭小芹;;有色金屬公司晚發(fā)型矽肺的X線診斷分析[J];地方病通報(bào);2007年03期

4 裘敏厡;費(fèi)登珊;林誠(chéng);;矽肺X線診斷的研究[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1959年06期

5 鐘毅;;矽肺病人200例心電圖分析[J];鐵道勞動(dòng)安全衛(wèi)生與環(huán)保;1982年01期

6 磨傳真;吳開(kāi)國(guó);;矽肺鈣化問(wèn)題的探討[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1983年02期

7 李立華;鄧銀榮;;矽肺病并發(fā)癥的觀察與護(hù)理[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2006年07期

8 劉凱;;65例矽肺呼吸衰竭患者血?dú)夥治鯷J];中國(guó)工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

9 楊永慧;樊俊清;;老年矽肺病人臨床護(hù)理體會(huì)[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年04期

10 ;天津市兩年來(lái)治療矽肺的報(bào)告[J];天津醫(yī)藥;1959年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 曹殿鳳;趙修海;;硅磚生產(chǎn)粉塵致矽肺病65例動(dòng)態(tài)觀察病情分析[A];2008年全國(guó)職業(yè)性呼吸系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

2 德里達(dá);張寧;;教授的未來(lái)和無(wú)條件大學(xué)——在復(fù)旦大學(xué)的演講[A];當(dāng)代國(guó)外馬克思主義評(píng)論（第三輯）[C];2002年

3 金延欣;;矽肺并慢性肺源性心臟病的護(hù)理[A];全國(guó)傳染病護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2008年

4 李海群;;矽肺病人的抗菌藥物應(yīng)用心得[A];玉溪市第十三屆內(nèi)科學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2009年

5 宋會(huì)朝;;47例矽肺病淺析[A];全國(guó)鐵路第五屆疾病控制學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

6 鐘鈴;宓奰;沈皓;承煥生;王建中;李嘉慶;楊明杰;;復(fù)旦大學(xué)核微探針系統(tǒng)[A];第十二屆全國(guó)核物理大會(huì)暨第七屆會(huì)員代表大會(huì)論文摘要集[C];2004年

7 ;大會(huì)學(xué)術(shù)委員會(huì)主席介紹[A];第四屆長(zhǎng)三角婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)論壇暨浙江省2009年婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

8 申華莉;樊惠芝;于雁靈;陸豪杰;孫瑞霞;田健;金紅;張婕;許雪姣;徐國(guó)賓;王勝;方彩云;水雯箐;包慧敏;黃珍玉;王彥;毛煜;王靜;鐘華;張祥民;劉銀坤;楊們?cè)?;高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌裸鼠模型LCI-D20的蛋白質(zhì)組研究[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年

9 陳育明;郭旭光;左春蘭;陳大華;楊秉華;朱仝茂;陳筱運(yùn);;微波硫燈在復(fù)旦大學(xué)亮化工程中的應(yīng)用[A];海峽兩岸第六屆照明科技與營(yíng)銷研討會(huì)專題報(bào)告文集[C];1999年

10 張素華;張兆志;;148例矽肺患者肺葉灌洗回收液檢驗(yàn)結(jié)果分析[A];淄博市第十一屆自然科學(xué)優(yōu)秀學(xué)術(shù)成果論文集[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 吳玉華;礦工矽肺病面面觀[N];中國(guó)礦業(yè)報(bào);2003年

2 記者 趙翔;提出“救治、救助、脫貧、問(wèn)責(zé)”八字原則[N];工人日?qǐng)?bào);2011年

3 湖南 教授 羅學(xué)宏;矽肺病與肺結(jié)核“狼狽為奸”[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

4 本報(bào)記者 張安妮;38，很可能不是最終的數(shù)字[N];中國(guó)安全生產(chǎn)報(bào);2010年

5 特約記者 劉德安　通訊員 鄒文娟;退職后得矽肺病索賠未果[N];檢察日?qǐng)?bào);2010年

6 商登瑩;矽肺病年噬十幾億元[N];中國(guó)煤炭報(bào);2000年

7 本報(bào)記者 朱海華;“得了職業(yè)矽肺病，誰(shuí)為我負(fù)責(zé)？”[N];福建日?qǐng)?bào);2003年

8 本報(bào)記者 劉侃 過(guò)國(guó)忠;關(guān)注宜興m東鎮(zhèn)矽肺病事件[N];科技日?qǐng)?bào);2001年

9 周劍虹 于杰 陳江;誰(shuí)對(duì)他們的健康負(fù)責(zé)？[N];中國(guó)礦業(yè)報(bào);2006年

10 記者 趙福中;湄潭78名返鄉(xiāng)農(nóng)民工遭遇矽肺病之痛[N];工人日?qǐng)?bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張海英;應(yīng)答蛋白基因多態(tài)性對(duì)矽肺發(fā)生的修飾作用[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

2 葉輝;復(fù)旦大學(xué)中國(guó)文學(xué)批評(píng)史研究論綱[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

3 吳芬;鐵礦工矽肺的遺傳易感性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

4 蘇永延;復(fù)旦大學(xué)文學(xué)史傳統(tǒng)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2005年

5 紀(jì)仕辰;鏈狀分子軟物質(zhì)的蒙特卡羅模擬和部分實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

6 馬金芳;人肺癌變過(guò)程中的分子遺傳學(xué)改變[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

7 蘇e

本文編號(hào)：2805102