【摘要】：背景：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種以氣流受限不完全可逆為特征的疾病。目前COPD發(fā)病率和患病率呈上升趨勢(shì)。到2020年,它將成為全球第三大死因。COPD的本質(zhì)是慢性氣道炎癥。眾所周知,吸煙和感染在COPD患者持續(xù)的氣道炎癥過(guò)程中起重要作用,且可以導(dǎo)致COPD患者肺功能的惡化、加速疾病的進(jìn)展。長(zhǎng)期以來(lái),對(duì)呼吸道病毒感染在COPD發(fā)病中的作用研究較少,且一直存在爭(zhēng)議。 呼吸道病毒感染的發(fā)生率很高,有些病毒侵入人體后,可侵犯到重要器官,并且隨著急性呼吸道感染的延續(xù),可能發(fā)生以下3種情況(1)急性或隱性病毒感染后,病毒潛伏在組織內(nèi),形成潛在性感染,無(wú)臨床癥狀,在某些條件的刺激下,病毒可再度增生出現(xiàn)急性發(fā)作；(2)病毒長(zhǎng)期慢性存在組織內(nèi),形成慢性感染,不斷增生,不斷排出病毒,在相當(dāng)一段時(shí)間內(nèi)可無(wú)臨床癥狀；(3)病毒感染后,形成慢發(fā)病毒感染,經(jīng)過(guò)很長(zhǎng)的潛伏期,以后出現(xiàn)慢性進(jìn)行性疾病。流行病學(xué)研究表明,兒童時(shí)期下呼吸道感染可能是引起支氣管哮喘及成人后發(fā)生COPD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一,下呼吸道感染的主要病原為病毒,常見(jiàn)的有呼吸道合胞病毒(RSV)和腺病毒(ADV)。 國(guó)內(nèi)外有學(xué)者研究證明在腺病毒急性感染期病毒復(fù)制停止后,腺病毒EIADNA和蛋白質(zhì)可持續(xù)存在于肺組織中,主要為支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及黏膜下細(xì)胞。且研究顯示ADV(雙鏈DNA病毒)在COPD患者的氣道炎癥、氣流阻塞的過(guò)程中起一定的作用。而有關(guān)RNA病毒特別是呼吸道合胞病毒(RSV)在COPD進(jìn)展過(guò)程中所起的作用國(guó)外相關(guān)報(bào)道也很少,國(guó)內(nèi)尚未有人研究。 目的：本課題擬通過(guò)隨訪測(cè)定不同季節(jié)80例穩(wěn)定期COPD患者RSV-RNA感染狀況以及患者誘導(dǎo)痰中IL-6、IL-8、MMP-12的濃度變化來(lái)探討RSV感染與COPD患者氣道炎癥的關(guān)系,RSV感染狀況與季節(jié)的關(guān)系,從而幫助我們認(rèn)識(shí)RSV感染在COPD發(fā)病中的作用機(jī)制,為COPD患者的治療和預(yù)防病情惡化提供理論依據(jù),開(kāi)辟治療新思路。 方法：選取我院呼吸科門(mén)診隨訪的穩(wěn)定期COPD患者(入選標(biāo)準(zhǔn)符合2007年《慢性阻塞性肺疾病診治指南(修訂版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn))80例并簽署知情同意書(shū),并符合下列標(biāo)準(zhǔn)：(1)無(wú)支氣管哮喘病史,吸入沙丁胺醇200ug后FEV1占預(yù)計(jì)值%的可逆性10%；(2)無(wú)合并嚴(yán)重心、肝、腎等系統(tǒng)疾��；(3)胸片無(wú)其他肺部疾病。試驗(yàn)分組如下：正常對(duì)照組：無(wú)吸煙史的健康對(duì)照者20例。均無(wú)特殊病史,近2月內(nèi)無(wú)全身感染,經(jīng)體格檢查、胸部X線攝片、肺通氣功能測(cè)定均未發(fā)現(xiàn)異常。 用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)測(cè)定受試者誘導(dǎo)痰RSV-RNA拷貝數(shù)和痰液中炎性因子IL-6、IL-8及基質(zhì)金屬蛋白酶-12(MMP-12)的濃度；每個(gè)季節(jié)進(jìn)行隨訪,隨訪一年,每次隨訪分別測(cè)定上述指標(biāo),探討RSV感染與穩(wěn)定期COPD患者氣道炎癥的關(guān)系,RSV感染狀況與季節(jié)的關(guān)系。 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：(1)入選慢性阻塞性肺病病人氣流受限客觀指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 入選的慢性阻塞性肺疾病(COPD)病人共80例,其中男47例,女33例,年齡43-72歲,平均(52.33±11.07)歲；病程3-45年,平均(15.63±11.45)年。 各組病人的氣流阻塞指標(biāo)FEV1和FEV1/FVC數(shù)值和比較,按常規(guī)操作方法檢測(cè)患者肺活量(VC)、FEV1、FEV1/FVC。VC、FEV1以實(shí)測(cè)值/預(yù)計(jì)值的比值表示,FEV1/FVC為實(shí)測(cè)值,各檢測(cè)數(shù)據(jù)以X±S表示。 COPD組病人,FEV1占預(yù)計(jì)值百分比為(69.59±26.44)%,FEV1%為58.79±19.55,對(duì)照組FEV1占預(yù)計(jì)值百分比為(87.23±29.11)%,FEV1%為74.89±23.86。兩組之間的氣道阻塞指數(shù)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (2)誘導(dǎo)痰RSV Real Time RT-PCR檢測(cè)方法的建立及檢測(cè)結(jié)果1.COPD組痰標(biāo)本的收集及處理、痰液細(xì)胞分類(lèi)和計(jì)數(shù)結(jié)果：誘導(dǎo)痰液細(xì)胞分類(lèi)和活力檢測(cè)合格,細(xì)胞總數(shù)為(6.74±3.58)X103,上皮細(xì)胞20%,細(xì)胞存活率40%。同時(shí)制備痰細(xì)胞學(xué)涂片3張,室溫下自然風(fēng)干進(jìn)行HE染色,光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi),分類(lèi)計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞(55.67±13.71)%、淋巴細(xì)胞(11.07±6.70)%、巨噬細(xì)胞(13.7±7.45)%及嗜酸性粒細(xì)胞(2.2±1.14)%。 2.Real Time熒光定量RT-PCR檢測(cè)RSV方法的建立 各組病人的呼吸道病毒(RSV)的檢出率結(jié)果：COPD組病人,RSV陽(yáng)性檢出23例,檢出率為28.75%；對(duì)照組病人,RSV陽(yáng)性檢出0例；兩組RSV感染狀況差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,COPD組RSV明顯高于對(duì)照組的RSV檢出率(P0.05)。 3.誘導(dǎo)痰炎癥因子IL-6、IL-8和MMP12等指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果 各組病人誘導(dǎo)痰中炎癥因子IL-6、IL-8和MMP12的檢測(cè)結(jié)果如表8-11,各組檢測(cè)數(shù)據(jù)以X±S表示。COPD-RSV陽(yáng)性組誘導(dǎo)痰炎癥因子IL-6、IL-8和MMP12等檢測(cè)明顯高于COPD-RSV陰性組并高于對(duì)照組,P0.05。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,入選病人的RSV感染與COPD有較高的相關(guān)性以及第二次、第三次和第四次隨訪結(jié)果顯示：RSV在COPD穩(wěn)定期病例組第二次隨訪的感染率高于對(duì)照組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05；RSV感染與COPD病人氣道炎癥的相關(guān)性分析結(jié)果顯示,RSV感染與誘導(dǎo)痰炎癥因子IL-6、IL-8以及MMP12的水平也有一定相關(guān)性的關(guān)系,其相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果P0.05,相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 進(jìn)一步的相關(guān)性分析還提示不同季節(jié)的RSV感染率有所不同,率的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05,結(jié)果顯示COPD患者RSV的感染率在冬春季節(jié)明顯高于夏秋季節(jié)。 結(jié)論：本研究通過(guò)對(duì)穩(wěn)定期COPD患者誘導(dǎo)痰中RSV-RNA、IL-6、IL-8、MMP-12的濃度變化來(lái)探討RSV感染與COPD患者氣道炎癥的關(guān)系,結(jié)論為呼吸道合胞病毒感染與穩(wěn)定期COPD患者氣道炎癥較強(qiáng)的相關(guān)性,COPD穩(wěn)定期RSV陽(yáng)性病人痰液中IL-6、IL-8、MMP-12的濃度明顯高于對(duì)照組,P0.05,而且隨著RSV感染率的增高,相關(guān)性越強(qiáng)(P0.05)。進(jìn)一步的分析還提示不同季節(jié)的RSV感染率有所不同,冬春季節(jié)明顯高于夏秋季節(jié)�？傊�,RSV感染與COPD病人的氣道炎癥有較強(qiáng)的相關(guān)性。RSV病毒感染的檢測(cè)對(duì)于了解COPD的病情和指導(dǎo)進(jìn)一步的治療具有重要參考價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R563.9
【圖文】：

燙口_少\學(xué)碩卜貨位論文 2.2RT‘PCR產(chǎn)物的純化圖2 D12000，呼吸道合胞鄉(xiāng)丙、井RSV常規(guī)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的純化圖，2.0%瓊脂糖凝膠電泳。M為j)\l一丘·l」l萬(wàn)分J二雖分別為Z000bp， 1000bp，750bp，SOObp，25ObP，IOObp;1泳i返為純化!l乎(l及i立合!{包病

圖2D12000，呼吸道合胞鄉(xiāng)丙、井RSV常規(guī)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的純化圖，2.0%瓊脂糖凝膠電泳j)\l一丘·l」l萬(wàn)分J二雖分別為Z000bp，1000bp，750bp，SOObp，25ObP，IOObp;為純化!l乎(l及i立合!{包病，(工RSV常規(guī)PCR擴(kuò)少曾產(chǎn)物。2.3RcalTime熒光定量RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)品重組質(zhì)粒的PCR鑒定

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2800068