【摘要】：背景：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種以氣流受限不完全可逆為特征的疾病。目前COPD發(fā)病率和患病率呈上升趨勢。到2020年,它將成為全球第三大死因。COPD的本質(zhì)是慢性氣道炎癥。眾所周知,吸煙和感染在COPD患者持續(xù)的氣道炎癥過程中起重要作用,且可以導致COPD患者肺功能的惡化、加速疾病的進展。長期以來,對呼吸道病毒感染在COPD發(fā)病中的作用研究較少,且一直存在爭議。 呼吸道病毒感染的發(fā)生率很高,有些病毒侵入人體后,可侵犯到重要器官,并且隨著急性呼吸道感染的延續(xù),可能發(fā)生以下3種情況(1)急性或隱性病毒感染后,病毒潛伏在組織內(nèi),形成潛在性感染,無臨床癥狀,在某些條件的刺激下,病毒可再度增生出現(xiàn)急性發(fā)作；(2)病毒長期慢性存在組織內(nèi),形成慢性感染,不斷增生,不斷排出病毒,在相當一段時間內(nèi)可無臨床癥狀；(3)病毒感染后,形成慢發(fā)病毒感染,經(jīng)過很長的潛伏期,以后出現(xiàn)慢性進行性疾病。流行病學研究表明,兒童時期下呼吸道感染可能是引起支氣管哮喘及成人后發(fā)生COPD的獨立危險因素之一,下呼吸道感染的主要病原為病毒,常見的有呼吸道合胞病毒(RSV)和腺病毒(ADV)。 國內(nèi)外有學者研究證明在腺病毒急性感染期病毒復制停止后,腺病毒EIADNA和蛋白質(zhì)可持續(xù)存在于肺組織中,主要為支氣管上皮細胞、肺泡上皮細胞及黏膜下細胞。且研究顯示ADV(雙鏈DNA病毒)在COPD患者的氣道炎癥、氣流阻塞的過程中起一定的作用。而有關(guān)RNA病毒特別是呼吸道合胞病毒(RSV)在COPD進展過程中所起的作用國外相關(guān)報道也很少,國內(nèi)尚未有人研究。 目的：本課題擬通過隨訪測定不同季節(jié)80例穩(wěn)定期COPD患者RSV-RNA感染狀況以及患者誘導痰中IL-6、IL-8、MMP-12的濃度變化來探討RSV感染與COPD患者氣道炎癥的關(guān)系,RSV感染狀況與季節(jié)的關(guān)系,從而幫助我們認識RSV感染在COPD發(fā)病中的作用機制,為COPD患者的治療和預防病情惡化提供理論依據(jù),開辟治療新思路。 方法：選取我院呼吸科門診隨訪的穩(wěn)定期COPD患者(入選標準符合2007年《慢性阻塞性肺疾病診治指南(修訂版)》的診斷標準)80例并簽署知情同意書,并符合下列標準：(1)無支氣管哮喘病史,吸入沙丁胺醇200ug后FEV1占預計值%的可逆性10%；(2)無合并嚴重心、肝、腎等系統(tǒng)疾�。�(3)胸片無其他肺部疾病。試驗分組如下：正常對照組：無吸煙史的健康對照者20例。均無特殊病史,近2月內(nèi)無全身感染,經(jīng)體格檢查、胸部X線攝片、肺通氣功能測定均未發(fā)現(xiàn)異常。 用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(RT-PCR)和酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)測定受試者誘導痰RSV-RNA拷貝數(shù)和痰液中炎性因子IL-6、IL-8及基質(zhì)金屬蛋白酶-12(MMP-12)的濃度；每個季節(jié)進行隨訪,隨訪一年,每次隨訪分別測定上述指標,探討RSV感染與穩(wěn)定期COPD患者氣道炎癥的關(guān)系,RSV感染狀況與季節(jié)的關(guān)系。 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示,進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果：(1)入選慢性阻塞性肺病病人氣流受限客觀指標檢測結(jié)果 入選的慢性阻塞性肺疾病(COPD)病人共80例,其中男47例,女33例,年齡43-72歲,平均(52.33±11.07)歲；病程3-45年,平均(15.63±11.45)年。 各組病人的氣流阻塞指標FEV1和FEV1/FVC數(shù)值和比較,按常規(guī)操作方法檢測患者肺活量(VC)、FEV1、FEV1/FVC。VC、FEV1以實測值/預計值的比值表示,FEV1/FVC為實測值,各檢測數(shù)據(jù)以X±S表示。 COPD組病人,FEV1占預計值百分比為(69.59±26.44)%,FEV1%為58.79±19.55,對照組FEV1占預計值百分比為(87.23±29.11)%,FEV1%為74.89±23.86。兩組之間的氣道阻塞指數(shù)差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 (2)誘導痰RSV Real Time RT-PCR檢測方法的建立及檢測結(jié)果1.COPD組痰標本的收集及處理、痰液細胞分類和計數(shù)結(jié)果：誘導痰液細胞分類和活力檢測合格,細胞總數(shù)為(6.74±3.58)X103,上皮細胞20%,細胞存活率40%。同時制備痰細胞學涂片3張,室溫下自然風干進行HE染色,光學顯微鏡下進行細胞計數(shù)及分類,分類計數(shù)中性粒細胞(55.67±13.71)%、淋巴細胞(11.07±6.70)%、巨噬細胞(13.7±7.45)%及嗜酸性粒細胞(2.2±1.14)%。 2.Real Time熒光定量RT-PCR檢測RSV方法的建立 各組病人的呼吸道病毒(RSV)的檢出率結(jié)果：COPD組病人,RSV陽性檢出23例,檢出率為28.75%；對照組病人,RSV陽性檢出0例；兩組RSV感染狀況差別具有統(tǒng)計學意義,COPD組RSV明顯高于對照組的RSV檢出率(P0.05)。 3.誘導痰炎癥因子IL-6、IL-8和MMP12等指標的檢測結(jié)果 各組病人誘導痰中炎癥因子IL-6、IL-8和MMP12的檢測結(jié)果如表8-11,各組檢測數(shù)據(jù)以X±S表示。COPD-RSV陽性組誘導痰炎癥因子IL-6、IL-8和MMP12等檢測明顯高于COPD-RSV陰性組并高于對照組,P0.05。 4.統(tǒng)計學分析顯示,入選病人的RSV感染與COPD有較高的相關(guān)性以及第二次、第三次和第四次隨訪結(jié)果顯示：RSV在COPD穩(wěn)定期病例組第二次隨訪的感染率高于對照組,差別有統(tǒng)計學意義,P0.05；RSV感染與COPD病人氣道炎癥的相關(guān)性分析結(jié)果顯示,RSV感染與誘導痰炎癥因子IL-6、IL-8以及MMP12的水平也有一定相關(guān)性的關(guān)系,其相關(guān)性檢驗結(jié)果P0.05,相關(guān)性具有統(tǒng)計學意義。 進一步的相關(guān)性分析還提示不同季節(jié)的RSV感染率有所不同,率的差別具有統(tǒng)計學意義,P0.05,結(jié)果顯示COPD患者RSV的感染率在冬春季節(jié)明顯高于夏秋季節(jié)。 結(jié)論：本研究通過對穩(wěn)定期COPD患者誘導痰中RSV-RNA、IL-6、IL-8、MMP-12的濃度變化來探討RSV感染與COPD患者氣道炎癥的關(guān)系,結(jié)論為呼吸道合胞病毒感染與穩(wěn)定期COPD患者氣道炎癥較強的相關(guān)性,COPD穩(wěn)定期RSV陽性病人痰液中IL-6、IL-8、MMP-12的濃度明顯高于對照組,P0.05,而且隨著RSV感染率的增高,相關(guān)性越強(P0.05)。進一步的分析還提示不同季節(jié)的RSV感染率有所不同,冬春季節(jié)明顯高于夏秋季節(jié)�？傊�,RSV感染與COPD病人的氣道炎癥有較強的相關(guān)性。RSV病毒感染的檢測對于了解COPD的病情和指導進一步的治療具有重要參考價值。
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R563.9
【圖文】：

燙口_少\學碩卜貨位論文 2.2RT‘PCR產(chǎn)物的純化圖2 D12000，呼吸道合胞鄉(xiāng)丙、井RSV常規(guī)PCR擴增產(chǎn)物的純化圖，2.0%瓊脂糖凝膠電泳。M為j)\l一丘·l」l萬分J二雖分別為Z000bp， 1000bp，750bp，SOObp，25ObP，IOObp;1泳i返為純化!l乎(l及i立合!{包病

圖2D12000，呼吸道合胞鄉(xiāng)丙、井RSV常規(guī)PCR擴增產(chǎn)物的純化圖，2.0%瓊脂糖凝膠電泳j)\l一丘·l」l萬分J二雖分別為Z000bp，1000bp，750bp，SOObp，25ObP，IOObp;為純化!l乎(l及i立合!{包病，(工RSV常規(guī)PCR擴少曾產(chǎn)物。2.3RcalTime熒光定量RT-PCR標準品重組質(zhì)粒的PCR鑒定

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 方怡,冉丕鑫;腺病毒感染與慢性阻塞性肺疾病發(fā)病機制研究現(xiàn)狀[J];國外醫(yī)學.呼吸系統(tǒng)分冊;2005年06期

2 單淑香,陳寶元;慢性阻塞性肺疾病流行病學研究進展[J];國外醫(yī)學.呼吸系統(tǒng)分冊;2005年06期

3 陳純;黃譽;唐春利;陳智;;呼吸道病毒感染對慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者免疫功能的影響[J];貴陽醫(yī)學院學報;2008年04期

4 朱汝南 ,鄧潔,王芳,錢淵,盧競,車莉;2000年秋冬至2002年夏北京地區(qū)急性呼吸道感染病毒病原學研究[J];臨床兒科雜志;2003年01期

5 丁楙珍,蘇犁云,孫家娥,徐錦;2000～2002年上海地區(qū)小兒呼吸道病毒感染病原學研究[J];臨床兒科雜志;2004年04期

6 王宋平,熊瑛,王鴻程;慢性阻塞性肺疾病的發(fā)病機制[J];臨床肺科雜志;2005年04期

7 謝偉國;江蓮;侯昕珩;趙洪達;;COPD患者誘導痰的細胞學分析及其臨床意義[J];臨床肺科雜志;2009年12期

8 鄧星奇;修清玉;陳吉泉;李兵;;基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制劑與慢性阻塞性肺疾病氣道炎癥的關(guān)系[J];中國臨床醫(yī)學;2007年03期

9 張偉群;李妍;;常見兒童呼吸道病毒感染的病原檢測[J];現(xiàn)代實用醫(yī)學;2009年04期

10 靳長俊,林殿杰,辛洪濤;病毒感染對慢性阻塞性肺病患者免疫功能的影響[J];山東醫(yī)藥;2002年19期

本文編號：2800068