發(fā)布時(shí)間：2020-08-21 08:40

【摘要】：研究背景:急性肺損傷(ALI)由生物、化學(xué)及物理等各種因素誘發(fā),它的病理生理基礎(chǔ)特征為炎癥浸潤(rùn)、肺氣血屏障損傷及非心源性間質(zhì)水腫,嚴(yán)重的可引起低氧血癥及呼吸困難,進(jìn)而發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)并需要機(jī)械通氣治療。組蛋白去乙�；�2(HDAC2)與組蛋白乙酰基轉(zhuǎn)移酶(HAT)兩者之間的動(dòng)態(tài)平衡控制著組蛋白乙�；胶腿旧|(zhì)的結(jié)構(gòu),從而調(diào)控炎癥因子的表達(dá),在本研究中我們主要關(guān)注HDAC2在急性肺損傷發(fā)病過(guò)程中上皮細(xì)胞損傷的分子機(jī)制。目的:利用脂多糖(LPS)干預(yù)肺上皮細(xì)胞體外模型,并且氣道滴注LPS建立小鼠急性肺損傷的動(dòng)物感染模型,探索HDAC2在急性肺損傷中的作用及其與NF-κB炎癥信號(hào)通路之間的調(diào)控作用。方法:LPS體外干預(yù)人氣道上皮細(xì)胞(HBE),RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)炎癥因子mRNA水平表達(dá)情況;Western Blot方法檢測(cè)HBE細(xì)胞HDAC2以及NF-κB信號(hào)通路中p65以及p-p65的變化。此外,將構(gòu)建并鑒定的8周大的HDAC2+/-小鼠以及其同窩對(duì)照WT(HDAC2+/+)小鼠隨機(jī)分為對(duì)照、對(duì)照模型組,實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M。對(duì)照組和模型組分別氣道滴注PBS(50μl)和LPS(2mg/50μl)。觀察測(cè)定各組小鼠的肺泡灌洗液中的細(xì)胞總數(shù)和白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù),觀察肺血管通透性改變;采用Western Blot法檢測(cè)HDAC2及其下游轉(zhuǎn)錄因子蛋白水平變化。結(jié)果:目前實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LPS干預(yù)HBE細(xì)胞和氣道滴注小鼠,均能夠下調(diào)細(xì)胞內(nèi)HDAC2表達(dá)。上皮細(xì)胞內(nèi)HDAC2下調(diào),可以活化NF-κB增加LPS誘導(dǎo)的炎癥因子IL-6,IL-8(小鼠體內(nèi)CXCL1、CXCL2)表達(dá)。體內(nèi)模型,HDAC2+/-小鼠氣道滴注LPS 24h后與WT模型組相比,肺泡灌洗液白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞比例、總數(shù)增加,炎癥因子IL-6、IL-1β、CXCL1、CXCL2在肺組織表達(dá)增加。結(jié)論:LPS能夠下調(diào)急性肺損傷模型上皮細(xì)胞HDAC2,隨之激活NF-κB信號(hào)通路及其下游炎癥因子IL-6,IL-8表達(dá)。過(guò)表達(dá)HDAC2可能為臨床治療急性肺損傷提供一個(gè)新靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R563
【圖文】：

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文邐實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑３實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑３．１成功構(gòu)建ＬＰＳ引起的小鼠急性肺損傷模型逡逑模型組小鼠經(jīng)氣道滴注ＬＰＳ邋（５ｍｇ／ｋｇ）邋２４ｈ后與滴注ＰＢＳ對(duì)照組小鼠相比，逡逑活動(dòng)能力下降，神情淡漠，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍，食欲不振，體重減輕。模型組逡逑小鼠ＢＡＬＦ細(xì)胞總數(shù)，中性粒細(xì)胞比例，中性粒細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組顯著增加，提逡逑示中性粒細(xì)胞炎癥模型ＡＬＩ造模成功。逡逑

ｔ邋0Ｌ＾■＿逡逑圖３．１成功構(gòu)建ＬＰＳ引起的小鼠急性肺損傷模型，ＬＰＳ邋（ｌＯＯ＾ｇ／ｍｌ）氣道滴逡逑注２４ｈ后ＢＡＬ細(xì)胞總數(shù)，中性粒細(xì)胞比例，中性粒細(xì)胞總數(shù)變化。Ｄａｔａ邋ａｒｅ邋Ｍｅａｎ士逡逑ＳＥＭ，邋＊，；？＜０．０５；邋＊＊，尸＜０．０１，＊＊＊，邋ｐ＜０．００１。逡逑１６逡逑

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本文編號(hào)：2799156