【摘要】：急性肺損傷(acute lung injury, ALI)及其嚴(yán)重形式急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress'syndrome, ARDS)是多種因素引起的臨床常見危重癥,而過度炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致ALI/ARDS的主要原因,因此,抑制ALI/ARDS早期階段的“瀑布式”炎癥反應(yīng)可改善ALI/ARDS的預(yù)后。髓樣細(xì)胞表達(dá)觸發(fā)受體-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-1, TREM-1)是表達(dá)于巨噬細(xì)胞和中粒細(xì)胞等髓樣細(xì)胞表面的免疫球蛋白超家族受體,研究表明TREM-1可放大TLR4介導(dǎo)的免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。血管活性腸肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)是肺內(nèi)含量最為豐富的神經(jīng)肽之一。本室前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)VIP可抑制TNF-α等炎癥因子的表達(dá)而呈現(xiàn)出抑炎特性。VIP對ALI小鼠肺內(nèi)TREM-1表達(dá)有無影響尚未見報道。 目的： 觀察脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的ALI小鼠肺內(nèi)TREM-1的表達(dá)及VIP的調(diào)控。 方法： 1.采用LPS復(fù)制ALI小鼠動物模型,RT-PCR法檢測肺內(nèi)TREM-1mRNA表達(dá)；氣管注射VIP慢病毒觀察肺內(nèi)高表達(dá)VIP對ALI時小鼠TREM-1mRNA表達(dá)的影響； 2.給予靜息狀態(tài)的小鼠巨噬細(xì)胞不同濃度的VIP和不同的作用時間,RT-PCR法檢測TREM-1mRNA表達(dá)；進(jìn)一步以LPS應(yīng)激小鼠巨噬細(xì)胞,給予不同濃度的VIP預(yù)處理和不同的作用時間,采用RT-PCR法檢測TREM-1mRNA表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測TREM-1蛋白表達(dá)。NF-κB抑制劑PDTC預(yù)處理后觀察LPS應(yīng)激的巨噬細(xì)胞TREM-1的表達(dá)。VIP預(yù)處理后Western Blot檢測LPS應(yīng)激的小鼠巨噬細(xì)胞中I-κB的含量。 結(jié)果： 1.VIP對ALI小鼠肺內(nèi)TREM-1mRNA表達(dá)的影響 ALI動物模型復(fù)制成功后,采用RT-PCR檢測ALI小鼠肺內(nèi)TREM-1mRNA的表達(dá),結(jié)果顯示：LPS經(jīng)腹腔注射6h后即可檢測到小鼠肺內(nèi)TREM-1mRNA的表達(dá)顯著增加。經(jīng)氣管注射VIP慢病毒觀察肺內(nèi)高表達(dá)VIP對ALI小鼠肺內(nèi)TREM-1mRNA表達(dá)的影響,結(jié)果顯示：與GFP+LPS組相比(0.630±0.039),VIP可降低ALI小鼠肺內(nèi)TREM-1mRNA的表達(dá)(0.531±0.027,P0.05)。 2.VIP對LPS應(yīng)激的小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1表達(dá)的影響 2.1VIP對靜息狀態(tài)的小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA表達(dá)的影響 RT-PCR法檢測結(jié)果顯示：VIP(10-8M)預(yù)處理不同時間后(2、4、6、12和24h)或不同濃度的VIP(10-10、10-9、10-8和10-7M)預(yù)處理后,小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA的表達(dá)均無明顯變化(圖3,圖4,P0.05)。 2.2VIP對LPS應(yīng)激的小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA表達(dá)的影響 RT-PCR檢測顯示：LPS處理3h后即可檢測到小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA表達(dá)明顯增加(0.062±0.005),且LPS處理6h后達(dá)峰值(0.107±0.015,P0.05)。采用不同濃度的LPS(0.04、0.2、1、5和25μg/ml)應(yīng)激小鼠巨噬細(xì)胞,可見隨著LPS濃度升高,小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA表達(dá)逐漸增加；當(dāng)LPS濃度為1μg/ml時,小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA表達(dá)最高(0.165±0.015,P0.05)。 RT-PCR檢測顯示：與VIP預(yù)處理2hLPS應(yīng)激的小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA表達(dá)(0.364±0.018)相比,VIP(10-8M)預(yù)處理6h表達(dá)明顯減少(0.251±0.008),VIP預(yù)處理12h表達(dá)最低(0.178±0.006),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。采用不同濃度的VIP(10-10、10-9、1098和10-7M)預(yù)處理LPS應(yīng)激的小鼠巨噬細(xì)胞,可見隨著VIP濃度升高,小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA表達(dá)逐漸減少；當(dāng)VIP濃度為10-7M時,小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA表達(dá)最低(0.249±0.010,P0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示：LPS(1μg/ml)可增加小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1蛋白表達(dá)(117.46±6.225,P0.05),而VIP(10-8M)可降低TREM-1蛋白表達(dá)(90.89±3.635,P0.05)。 3.VIP抑制LPS應(yīng)激的小鼠巨噬細(xì)胞NF-κB活化 RT-PCR檢測結(jié)果顯示：PDTC可顯著性地抑制LPS應(yīng)激的小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1mRNA的表達(dá)(0.135±0.009,P0.05)。進(jìn)一步采用Western Blot檢測小鼠巨噬細(xì)胞中I-κB的含量來反映NF-κB的活化,結(jié)果顯示：VIP對靜息狀態(tài)的小鼠巨噬細(xì)胞中I-κB的表達(dá)無明顯影響(P0.05)；與LPS處理組(0.186±0.022)相比,VIP+LPS組小鼠巨噬細(xì)胞I-κB表達(dá)明顯增加(0.317±0.034,P0.05)。 結(jié)論： 1.ALI時小鼠肺內(nèi)TREM-1表達(dá)上調(diào),VIP可降低TREM-1的表達(dá)； 2.LPS上調(diào)小鼠巨噬細(xì)胞TREM-1的表達(dá),VIP可抑制該效應(yīng),其機(jī)制可能與NF-κB的活化有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R563.8

【參考文獻(xiàn)】

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1 Glenn Paul Dorsam;Keith Benton;Jarrett Failing;Sandeep Batra;;Vasoactive intestinal peptide signaling axis in human leukemia[J];World Journal of Biological Chemistry;2011年06期

本文編號：2793530