【摘要】： 目的:復制失血性休克致急性肺損傷(acute lung injury,ALI)動物模型。探討高遷移率族蛋白B1(high mobility group box1 protein,HMGB1)在失血性休克所致ALI中的作用。 方法:①動物實驗:雄性BALB/c小鼠42只,8—12周齡,體重28±3g,隨機分成對照組、失血性休克致ALI組(分4h、16h、24h、48h四個時間點)和抗-HMGB1抗體干預組(分別為抗-HMGB1抗體干預4h和干預24h組)。對照組小鼠心臟穿刺不抽血。失血性休克組小鼠通過心臟穿刺抽血,在1分鐘左右抽30%循環(huán)血量造成失血性休克,靜置1小時后預實驗提示成功復制失血性休克致ALI模型,分別于造模后4h、16h、24h、48h活殺小鼠,活殺前1小時經(jīng)尾靜脈注射伊文蘭(Evens blue dye,EBD),右心室注射PBS緩沖液沖洗肺血管,留取肺組織標本行下一步檢測。失血性休克后1小時,小鼠腹腔注射單克隆鼠抗—HMGB1抗體(200ug/小鼠)�？埂狧MGB1抗體干預4h組于注射抗體后4h活殺小鼠留取肺組織檢測髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)。抗—HMGB1抗體干預24h組注射抗體23h后于小鼠尾靜脈注射EBD50mg/kg(5mg/ml,200ul),1小時后活殺小鼠測肺組織EBD量。②標本檢測:應用Western Blot方法檢測肺組織HMGB1含量;ELISA方法檢測肺組織白介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor alpha,TNFα)含量;MPO試劑盒檢測肺組織MPO;肺組織烘干,分光光度法測EBD。 結(jié)果:①模型動物肺組織病理學檢查:光鏡下失血性休克致ALI組小鼠肺組織標本在ALI 4h可見肺泡間隔增厚,肺泡腔變窄,肺泡間質(zhì)水腫,肺泡腔內(nèi)有水腫液形成,肺組織點片狀出血,血管中見多形核粒細胞附壁,紅細胞聚集,微血栓形成,肺泡腔亦可見多形核粒細胞。ALI 16h組肺組織彌漫性炎癥改變較4h組明顯,以24h組肺組織急性彌漫性病變最重,并持續(xù)至48h組�？�-HMGB1抗體干預組小鼠肺組織也可見肺泡間質(zhì)水腫增厚,肺泡內(nèi)見水腫液及多形核粒細胞,但程度較對應時間點ALI組減輕。②肺組織IL-1β和TNFα檢測結(jié)果:與對照組(IL-1β284.83±30.49pg/ml;TNFα584.17±181.17pg/ml)相比,失血性休克致ALI 4h肺組織IL-1β(333.83±31.18pg/ml)和TNFα(776.67±103.67pg/ml)增高,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),其后肺組織IL-1β和TNFα水平降至正常。③肺組織MPO檢測結(jié)果:失血性休克致ALI 4h達高峰(38.33±3.88U/g肺組織),其后逐漸下降,持續(xù)至48h(9.66±2.16U/g肺組織)仍高于對照組(8.00±0.89U/g肺組織),差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);抗-HMGB1抗體干預4h組肺組織MPO水平(25.67±1.63U/g肺組織)與失血性休克致ALI 4h組(38.33±3.88U/g肺組織)相比顯著降低,但仍高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。④肺組織EBD檢測結(jié)果:失血性休克致ALI組四個時間點觀察肺組織EBD均顯著高于對照組(4.63±0.43g/ml/g肺組織),差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),峰值在ALI 24h(20.05±2.79g/ml/g肺組織)�？�-HMGB1抗體干預24h組肺組織EBD水平(5.68±0.53g/ml/g肺組織)與失血性休克致ALI 24h組相比顯著降低,但仍高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。⑤肺組織HMGB1檢測結(jié)果:肺組織HMGB1水平在ALI 16h開始升高(HMGB1/β-actin 0.99±0.16),至ALI 24h達高峰(HMGB1/β-actin 1.00±0.32),并持續(xù)至ALI 48h(HMGB1/β-actin 0.90±0.27),與對照組(HMGB1/β-actin 0.50±0.18)相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 結(jié)論:①在失血性休克誘發(fā)的ALI中,HMGB1在肺組織中的表達增高。肺組織HMGB1水平在休克后16小時左右升高,持續(xù)至24h左右達到高峰,并持續(xù)至48h。②在失血性休克誘發(fā)的ALI中,肺組織IL-1β和TNFα在ALI 4h左右有所增高,其后降至正常。③抗—HMGB1抗體干預組肺組織MPO及EBD值與ALI組相比顯著降低。以上結(jié)果提示:HMGB1是失血性休克誘發(fā)的急性肺損傷的晚期炎癥介質(zhì),與肺泡中性粒細胞積聚及肺水腫的進展有關。動物模型抗HMGB1抗體治療可減輕ALI肺部表現(xiàn),減緩ALI進展�？笻MGB1免疫治療為失血性休克所致ALI提供了可能的新的治療靶點。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R459.7;R563.8
【圖文】：

彌漫性炎癥改變較4h組明顯，以24h組肺組織急性彌漫性病變最重，并持續(xù)至48h組�？挂籋MGBI抗體干預組小鼠肺組織也可見肺泡間質(zhì)水腫增厚，肺泡內(nèi)見水腫液及多形核粒細胞，但程度較同時間點ALI組減輕(見圖1一3)。圖1:對照組小鼠肺組織(HE染色， X100)肺泡結(jié)構(gòu)基本無破壞，肺泡間質(zhì)基本無炎癥細胞浸潤

抗體干預24h組小鼠肺組織(HE染色，X100)

肺間質(zhì)明顯水腫，肺泡腔變窄，肺間質(zhì)及肺泡內(nèi)大量多形核粒細胞及紅細胞滲出圖3:抗體干預24h組小鼠肺組織(HE染色， X100)肺間質(zhì)水腫，肺泡內(nèi)少量白細胞及紅細胞滲出，與圖2相比程度較輕

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 錢桂生;急性肺損傷和急性呼吸窘迫綜合征[J];內(nèi)科急危重癥雜志;2004年04期

本文編號：2786502