【摘要】：目的通過(guò)對(duì)膽堿能抗炎通路標(biāo)志性蛋白IκB、p-IkB、NF-κBp65在急性肺損傷(acute lung injury,ALI)小鼠模型中的表達(dá)變化及小鼠生存率的研究,探索該通路是否對(duì)ALI有保護(hù)作用。方法實(shí)驗(yàn)選擇SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠,體重20-22g。將小鼠隨機(jī)分為4組,分別是空白對(duì)照組(C),脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)組(L),LPS+nicotine組(LN)和 LPS+甲基牛扁亭(methyllycaconitine)組(LM),每組 10 只(n=10)。通過(guò)腹腔注射LPS建立小鼠急性肺損傷模型。L組小鼠稱(chēng)重后僅腹腔注射LPS(10 mg/kg)。LN組和LM組小鼠在腹腔注射LPS前30min,腹腔分別注射nicotine(1.2 mg/kg)和methyllycaconitine(2.4 mg/kg)。C組小鼠僅腹腔注射相同容量的生理鹽水。各組小鼠均在LPS注射完成后6h取材。應(yīng)用4%水合氯醛(1 ml/100 g)腹腔注射麻醉小鼠,眼球取血離心獲取上清,Elisa法檢測(cè)血清中主要炎性因子IL-6、TNF-α的表達(dá)。之后打開(kāi)胸腔,暴露心臟和肺組織,結(jié)扎左肺門(mén),取左肺新鮮肺組織,一部分通過(guò)稱(chēng)量肺組織濕重和干重計(jì)算其比值,了解肺組織水腫程度;剩余部分用Western Blot法檢測(cè)ALI發(fā)生過(guò)程中膽堿能抗炎通路的下游標(biāo)志性蛋白IκB、p-IκB、NF-kBp65的表達(dá)。右肺用4℃的多聚甲醛溶液(4%)灌注固定,石蠟包埋后切片,HE染色法觀察肺組織形態(tài)病理學(xué)變化;組織免疫熒光觀察膽堿能抗炎通路中NF-κB p65蛋白的核內(nèi)轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果Elisa法檢測(cè)各組血清炎性因子水平數(shù)據(jù)顯示,IL-6和TNF-α表達(dá)結(jié)果呈現(xiàn)相同趨勢(shì)。與C組相比,L組和LM組小鼠血清IL-6、TNF-α表達(dá)量增加顯著(p0.01);與L組相比,LN組IL-6、TNF-α的表達(dá)量明顯減少(p0.01)。各組肺組織干濕比的結(jié)果比較,與C組相比,L組W/D顯著增加(p0.05),LM組W/D也明顯增加(p0.05),表明水腫程度嚴(yán)重。與L組相比,LN組W/D明顯降低(p0.05),水腫程度有明顯改善。Western blot結(jié)果顯示,相比較C組,L組和LM組p-IκB的總蛋白表達(dá)量增加明顯(p0.05);與L組相比,LN組p-IkB的總蛋白表達(dá)顯著下降(p0.05)。IκB的總蛋白表達(dá)量與p-IκB呈現(xiàn)相反趨勢(shì)。與C組相比,L組和LM組中NF-kB p65的核內(nèi)表達(dá)顯著增加(p0.05);與L組相比,LN組NF-κBp65核內(nèi)表達(dá)量明顯下降(p0.05)。與C組相比,L組和LM組NF-κBp65在胞漿中的表達(dá)顯著下調(diào)(p0.05);與L組相比,LN組NF-kB p65胞漿內(nèi)表達(dá)量明顯上調(diào)(p0.05)。HE染色結(jié)果顯示,C組為正常的肺組織結(jié)構(gòu);與C組相比,L組和LM組肺組織結(jié)構(gòu)破壞明顯,肺組織水腫嚴(yán)重,且有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);與L組相比,LN組肺組織破壞程度明顯改善。免疫熒光結(jié)果顯示,C組肺組織結(jié)構(gòu)正常,核質(zhì)清晰;與C組相比,L組和LM組NF-κB p65熒光抗體與細(xì)胞核明顯大量重疊且肺組織結(jié)構(gòu)破壞明顯;與L組相比,LN組NF-kBp65熒光抗體與細(xì)胞核重疊現(xiàn)象幾乎消失,核質(zhì)相對(duì)清晰。結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)條件下,可以得出如下結(jié)論:1.膽堿能抗炎通路的激活對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI有保護(hù)作用。2.膽堿能抗炎通路通過(guò)降低下游蛋白IkB的磷酸化和減少NF-κB p65的核轉(zhuǎn)移發(fā)揮肺保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R563

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本文編號(hào)：2782713