【摘要】： 肥胖及炎癥因素均參與阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(OSAS)的發(fā)病。白細(xì)胞介素-6(IL-6)是肥胖及炎癥的重要調(diào)節(jié)因子之一,且與OSAS發(fā)病率增加密切相關(guān)。本研究旨在探討IL-6的遺傳變異與OSAS易感性的關(guān)系。 研究對(duì)象為中國(guó)華東地區(qū)151例OSAS患者及75例健康對(duì)照者。通過Haploview 4.1選擇了IL-6基因上21kb范圍內(nèi)的5個(gè)標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(htSNPs)。運(yùn)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增上述htSNPs,擴(kuò)增產(chǎn)物以限制性酶切及凝膠電泳進(jìn)行基因分型。通過SHEsis程序進(jìn)行連鎖不平衡(LD)分析及單倍型構(gòu)建。利用回歸分析計(jì)算優(yōu)勢(shì)比(Odd ratios, OR)和95%可信區(qū)間(95% confidence intervals, 95% CI),并對(duì)性別、年齡和BMI進(jìn)行校正。 研究結(jié)果表明:1、上述5個(gè)htSNPs位點(diǎn)在OSAS患者及健康對(duì)照者中的分布均無(wú)差異。2、在非肥胖組(n =117), IL-6單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs1800796(-572G/C)的G等位基因攜帶者患OSAS的風(fēng)險(xiǎn)低于C等位基因攜帶者(OR =0.48; 95% CI, 0.26-0.86; P =0.014);-572G/C多態(tài)性的(GG + CG)基因型攜帶者患OSAS的風(fēng)險(xiǎn)也低于CC基因型攜帶者(OR =0.38; 95% CI, 0.17-0.88; P =0.008)。3、非肥胖者單倍型TG(rs1880242及rs1800796)攜帶者患OSAS的風(fēng)險(xiǎn)明顯低于其他單倍型攜帶者(OR =0.39;95% CI,0.20-0.74,P =0.003)。4、非肥胖者睡眠呼吸障礙的嚴(yán)重程度(以AHI表示,次/h)與IL-6 -572G/C的C多態(tài)性位點(diǎn)攜帶率呈線性關(guān)系(GG基因型:14.3±5.1,CG基因型:22.0±3.6及CC基因型:34.8±3.5;P =0.012)。 本研究結(jié)果提示在非肥胖者中,IL-6-572G/C多態(tài)性中的CC基因型和C等位基因增加了OSAS患病風(fēng)險(xiǎn),而GG基因型和G等位基因則對(duì)OSAS發(fā)病有保護(hù)作用。一些單倍型對(duì)OSAS的易感性也有影響。本研究在國(guó)內(nèi)外首次揭示了IL-6的遺傳變異與OSAS易感性有關(guān)。IL-6 SNP基因分型可能成為非肥胖人群睡眠呼吸暫停綜合征患病風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)方法之一。 IL-6是一種重要的細(xì)胞因子,它在免疫應(yīng)答、細(xì)胞生長(zhǎng)、增值和凋亡等過程中發(fā)揮重要作用。研究表明IL-6及其主要效應(yīng)物STAT3促進(jìn)多種癌癥的形成,其中包括肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、黑色素瘤及各種血癌。大量數(shù)據(jù)表明,基因的常見變異可以影響常見疾病的遺傳易感性。IL-6基因中存在較多的多態(tài)性位點(diǎn),其中rs1800795 (-174G/C)、rs1800796 (-572C/G)和rs10499563 (-6331T/C)是三個(gè)重要的功能性多態(tài)位點(diǎn),它們可以改變IL-6的轉(zhuǎn)錄活性,調(diào)節(jié)IL-6的蛋白表達(dá)量,從而影響許多常見疾病的遺傳易感性。其中,IL-6 -174G/C和-572C/G多態(tài)性與腫瘤易感性的關(guān)系一直是學(xué)者研究的熱點(diǎn),而-6331T/C多態(tài)性與腫瘤易感性的關(guān)系至今尚未見報(bào)道。 為了全面的研究IL-6基因遺傳變異與非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)易感性的關(guān)系,我們通過Haploview軟件選擇了4個(gè)單倍型標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(haplotype tagging SNP, htSNP)來進(jìn)行基因分型,它們覆蓋了IL-6基因的單倍型區(qū)塊。這4個(gè)htSNP位點(diǎn)多態(tài)性通過PCR-限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)的方法對(duì)121例NSCLC患者和112例正常對(duì)照個(gè)體進(jìn)行基因分型。 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)包,利用回歸分析對(duì)性別、年齡和抽煙史進(jìn)行校正,我們發(fā)現(xiàn)4個(gè)htSNP(rs1880242、rs10499563、rs1800796和rs2069837)的基因型及等位基因頻率在患者與正常對(duì)照中的分布均無(wú)顯著差異。采用SHEsis程序進(jìn)行單倍型重構(gòu)與分析發(fā)現(xiàn),單倍型GTGA在NSCLC病人中的頻率明顯高于正常對(duì)照組(7.2% vs. 1.9%, P =0.004),提示該單倍型顯著增加了NSCLC的易感性(OR, 4.50; 95% CI, 1.49-13.53)。我們的研究表明,在漢族人群里IL-6基因區(qū)域的常見變異與NSCLC的易感性相關(guān),其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。 第三部分E-cadherin基因甲基化與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系 E-cadherin是跨膜糖蛋白家族的一員,在上皮細(xì)胞粘附、維持上皮完整性以及細(xì)胞分化過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明多種上皮癌變過程中可見E-cadherin表達(dá)下調(diào)或表達(dá)缺失。E-cadherin mRNA和蛋白的表達(dá)下降也多見于我國(guó)的NSCLC患者,但是我們先前的研究發(fā)現(xiàn)E-cadherin的基因變異在NSCLC患者中并不常見。這提示我們NSCLC患者中E-cadherin基因的表達(dá)減少可能是由于表觀遺傳學(xué)機(jī)制而導(dǎo)致的。據(jù)此,我們推測(cè)E-cadherin基因的甲基化參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程。 我們從35例NSCLC患者的癌組織和癌旁正常組織中提取DNA,并用重亞硫酸鹽修飾,并對(duì)修飾的DNA直接測(cè)序的方法來檢測(cè)E-cadherin基因5’端CpG島的甲基化情況。隨后,我們采用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)分析E-cadherin基因的mRNA表達(dá)量。甲基化分析顯示:28.6%(10/35)的癌組織存在至少一處E-cadherin基因的甲基化,而在與甲基化的癌組織對(duì)應(yīng)的癌旁組織中有60%(6/10)的個(gè)體未發(fā)現(xiàn)E-cadherin基因的甲基化。這提示我們E-cadherin基因5’端可能存在癌癥特異的甲基化位點(diǎn)。RT-PCR結(jié)果顯示:E-cadherin基因甲基化的10個(gè)NSCLC患者中,70%(7/10)的個(gè)體癌組織E-cadherin基因mRNA表達(dá)量高于對(duì)應(yīng)的癌旁對(duì)照組織;在E-cadherin未甲基化的25個(gè)NSCLC患者中,64%(16/25)的個(gè)體癌組織E-cadherin基因mRNA表達(dá)量高于對(duì)應(yīng)的癌旁對(duì)照組織。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)E-cadherin基因的mRNA表達(dá)降低與E-cadherin基因5’端的甲基化并無(wú)明顯相關(guān)性。NSCLC中E-cadherin基因的表達(dá)下調(diào)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R56;R734.2
【圖文】：

NSCLC細(xì)胞株在倒置顯微鏡200×下的細(xì)胞形態(tài)圖片

NSCLC細(xì)胞株E-cadherin基因MSP電泳圖

3.1.3 NSCLC 細(xì)胞株中 E-cadherin 基因去甲基化作用。3.1.3.1 細(xì)胞株中 E-cadherin 基因的啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化位點(diǎn)情況。從測(cè)序結(jié)果中我們可以發(fā)現(xiàn)，在我們所研究的區(qū)域中從翻譯起始位點(diǎn)到上游啟動(dòng)子區(qū)域 227bp 左右共計(jì)出現(xiàn) 19 個(gè)甲基化特異性位點(diǎn)，分布在-9、-15、-18、-22、-32、-35、-41、-45、-50、-55、-65、-89、-116、-119、-137、-160、-169、-176、-181 處，與 GeneBank 報(bào)道的序列完全相符，即在我們所研究的 E-cadherin 基因區(qū)域序列上出現(xiàn)的所有甲基化位點(diǎn)可通過設(shè)計(jì)的通用引物并測(cè)序的方法直觀顯示出來。

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本文編號(hào)：2774397