【摘要】： 研究背景:慢性阻塞性肺疾病(COPD)是嚴(yán)重影響人類健康的常見多發(fā)病,患病人數(shù)多,死亡率高,社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重,是全球性公共衛(wèi)生問題。該病發(fā)病機(jī)制未完全明了,且無理想的治療方法。煙霧暴露是COPD的重要致病因素。除慢性氣道和肺部炎癥、蛋白酶/抗蛋白酶失衡以及氧化/抗氧化失衡等學(xué)說外,肺間隔細(xì)胞凋亡在COPD發(fā)生發(fā)展中的作用日益受到重視,且與上述學(xué)說有千絲萬縷的聯(lián)系。肺間隔細(xì)胞凋亡的累積效應(yīng)將導(dǎo)致肺氣腫的發(fā)生和呼吸功能的降低,導(dǎo)致呼吸衰竭的發(fā)生。因此,干預(yù)肺間隔細(xì)胞凋亡是目前COPD防治研究中的一項(xiàng)重要課題。轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白-2(transcription factoractivator protein-2,AP-2)家族是一組發(fā)育調(diào)節(jié),維甲酸誘導(dǎo)的基因DNA結(jié)合蛋白,AP-2α(transcription factor activator protein-2α,AP-2α)是最早被鑒定和研究的AP-2家族成員,參與了許多基因的表達(dá)如VEGF、P~(53)、p~(21WAF/CIP)、Bcl-2、錳過氧化物岐化酶(Manganese superoxidedismutase,MnSOD)等;參與了脊椎動(dòng)物細(xì)胞黏附、生長、凋亡、組織分化、胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生等病理生理過程。其中大部分研究集中在AP-2α對(duì)增殖凋亡的調(diào)控上。依據(jù)細(xì)胞類型及實(shí)驗(yàn)條件的不同,AP-2α分別發(fā)揮促凋亡或促增殖的作用。但是,在煙霧暴露所致的COPD大鼠肺組織及香煙提取物(CSE)刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304中AP-2α是否表達(dá),是否對(duì)煙霧暴露引起的細(xì)胞凋亡及Caspase-3的活化有影響,其機(jī)制是否與其激活結(jié)構(gòu)域有關(guān)等等,尚無相關(guān)報(bào)道。 目的:研究熏煙所致COPD大鼠肺組織中肺間隔細(xì)胞的凋亡情況及AP-2α的表達(dá)水平;進(jìn)一步通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究AP-2α對(duì)CSE誘導(dǎo)的ECV304凋亡的影響及機(jī)制。 方法:采用被動(dòng)吸煙80天的方法復(fù)制大鼠COPD模型,采用TUNEL法檢測肺組織細(xì)胞凋亡、Western blot法檢測肺組織中活化的Caspase-3、免疫組織化學(xué)及Western blot法檢測胞核中AP-2α蛋白的表達(dá);通過MTT、Hoechst染核、Western blot等方法研究CSE對(duì)ECV304增殖、凋亡、Caspase-3和AP-2α表達(dá)的影響;通過腺病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、Hoechst染核、Western blot等方法研究過表達(dá)AP-2α對(duì)CSE誘導(dǎo)的ECV304凋亡、Caspase-3活化的影響。采用質(zhì)粒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、Hoechst染核、Western blot等方法研究過表達(dá)AP-2α的突變體AP-2Δ(只具有結(jié)合結(jié)構(gòu)域,而沒有轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域)對(duì)CSE誘導(dǎo)的ECV304凋亡、Caspase-3活化的影響。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,用Bartlett法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),兩組間比較用t檢驗(yàn),多組間比較用單因素方差分析,多個(gè)樣本均數(shù)的多重比較用LSD-t檢驗(yàn)。多個(gè)樣本率的比較用X~2檢驗(yàn)。 結(jié)果:研究發(fā)現(xiàn),煙霧暴露80天成功復(fù)制了COPD大鼠模型,表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤,肺泡腔擴(kuò)大,FEV_(0.3)/FVC降低,肺間隔細(xì)胞凋亡增多,Caspase-3活化增加;同時(shí)AP-2α蛋白表達(dá)增加。在CSE刺激的ECV304細(xì)胞中,細(xì)胞凋亡增多,AP-2α表達(dá)增加;AP-2α的過表達(dá)可抑制CSE誘導(dǎo)的ECV304細(xì)胞凋亡,表現(xiàn)為細(xì)胞凋亡率降低和Caspase-3的活性片段(17KD)減少。AP-2Δ瞬時(shí)轉(zhuǎn)染ECV304細(xì)胞并使其過表達(dá)后對(duì)基礎(chǔ)及CSE誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、Caspase-3的活化沒有明顯影響。 結(jié)論:AP-2α在煙霧暴露法復(fù)制的COPD大鼠肺組織及CSE刺激的ECV304細(xì)胞中表達(dá)增加。在CSE刺激的ECV304細(xì)胞中,AP-2α抑制CSE誘導(dǎo)的Caspase-3的活化及細(xì)胞凋亡,其作用需要其激活結(jié)構(gòu)域存在。AP-2α可能參與了COPD的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R563.9
【圖文】：

正常對(duì)雙組大民的肺組爾(BBx100)

正常對(duì)照組肺池間隔細(xì)胞洲亡(光碗x400)

通過 BandLeader軟件進(jìn)行蛋白條帶灰度定量分析(用灰度值表示，該值越高，含量越高)。與對(duì)照組相比，COPD組大鼠肺組織中活化的CasPase一3表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(盡0.001)。見圖3，表4。正常對(duì)照組COPO組CasPase一317KDB一aetin42KD圖3:熏煙組和對(duì)照組大鼠肺組織胞漿蛋白中Caspase一3的表達(dá)。(p一actin作為胞漿蛋白的內(nèi)對(duì)照)表 4COPD組與對(duì)照組大鼠肺組織胞漿蛋白中活化的Caspase一3(17xD)的比較(x士s)組別例數(shù)對(duì)照組 ActiveCasPase一3/日一aetin 0.9199士0.0011COPD組 2.3524士0.0042注，與對(duì)照組相比，P<0.001(卜114.2，卜21)。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

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本文編號(hào)：2769964