發(fā)布時(shí)間：2020-07-17 07:32

【摘要】： 目的:以哮喘小鼠為動(dòng)物模型,通過雙歧桿菌完整肽聚糖(Whole Peptidoglycan, WPG)與正常及哮喘小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(bone marrow-derived dendritic cell,BMDC)共培養(yǎng),探討雙歧桿菌WPG對(duì)小鼠BMDC的免疫調(diào)節(jié)作用以及WPG作用的時(shí)間-效應(yīng)規(guī)律,揭示以雙歧桿菌為代表的益生菌防治過敏性疾病的可能性機(jī)制。 方法:隨機(jī)將Balb/c小鼠分成正常鼠組和哮喘鼠組,每組8只,模型建立后無菌分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞, GM-CSF和IL-4聯(lián)合誘導(dǎo)七天生成未成熟樹突狀細(xì)胞,將細(xì)胞分為WPG組、陽性對(duì)照組、陰性對(duì)照組。其中WPG組加入雙歧桿菌WPG 5μg/ml,陽性對(duì)照組加入脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)1μg/ml、陰性對(duì)照組僅加入培養(yǎng)液,24小時(shí)后觀察DC形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測DC表面標(biāo)志物CD11c、CD86及MHC-Ⅱ的表達(dá),混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixed lymphocyte reaction ,MLR)檢測DC刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的能力,ELISA法測定DC培養(yǎng)上清中IL-12、IL-10的分泌水平;在正常小鼠WPG組DC加入WPG后0h、12h、24h、36h、48h、60h、72h收集培養(yǎng)上清液,用ELISA法檢測上清中IL-12及IL-10的分泌水平,以觀察WPG作用的時(shí)效性。 結(jié)果: 1.正常與哮喘鼠陰性組DC刺激淋巴細(xì)胞增殖能力、分泌IL-12及IL-10的量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與正常鼠陽性組比,哮喘鼠陽性組DC表面標(biāo)志CD86表達(dá)高而MHC-Ⅱ表達(dá)低,MLR、分泌IL-12及IL-10的量降低(P0.05)。在WPG作用下,正常鼠DC表面標(biāo)志CD86、MHC-Ⅱ表達(dá)同陽性組無差別,MLR、分泌IL-12及IL-10的量高于陰性對(duì)照組但低于陽性對(duì)照組,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);哮喘鼠WPG組DC表面標(biāo)志CD86表達(dá)低于哮喘鼠陽性組,MLR、分泌IL-12、IL-10的量高于哮喘鼠陰性組及陽性組(P0.05),但低于正常鼠WPG組及陽性組(P0.05)。 2.雙歧桿菌WPG與正常小鼠BMDC共培養(yǎng),在不同時(shí)間點(diǎn)測培養(yǎng)上清液中IL-12、IL-10的量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-12、IL-10的量在24小時(shí)內(nèi)隨時(shí)間的延長而增多,24小時(shí)達(dá)高峰,24小時(shí)后呈逐漸下降趨勢。 結(jié)論: 1.本研究通過建立哮喘小鼠動(dòng)物模型發(fā)現(xiàn),哮喘小鼠DC存在成熟及功能缺陷。在雙歧桿菌WPG作用下,哮喘鼠DC功能得到一定修復(fù),促進(jìn)了Th1/Th2平衡;但雙歧桿菌WPG的免疫調(diào)節(jié)作用有一定限度,不能使哮喘鼠DC的功能完全恢復(fù)正常。 2.雙歧桿菌WPG的作用存在時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,提示益生菌制劑只能在有效時(shí)間內(nèi)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2759159