【摘要】： 目的:通過對(duì)非COPD不吸煙者(對(duì)照組)、非COPD吸煙者(吸煙組)、吸煙COPD患者(COPD組)肺組織表達(dá)的蛋白質(zhì)組進(jìn)行比較。尋找差異表達(dá)蛋白,以期為揭示COPD的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制提供新的線索。 方法:收集因肺癌行肺葉切除的對(duì)照組、吸煙組、COPD組的肺組織標(biāo)本各24例(其中吸煙組與COPD組的吸煙指數(shù)無(wú)顯著性差異),提取組織總蛋白,各組內(nèi)按照隨機(jī)每6例構(gòu)建一個(gè)蛋白池。對(duì)每一個(gè)蛋白池進(jìn)行雙向凝膠電泳(2-DE),通過對(duì)凝膠進(jìn)行圖像掃描獲取2-DE圖像,利用PDQUEST軟件對(duì)3組研究對(duì)象的2-DE圖像進(jìn)行比較分析,識(shí)別出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。從凝膠中切取差異表達(dá)的蛋白質(zhì)斑點(diǎn),TPCK-Trypsin酶解后進(jìn)行MOLDI-TOF-MS分析,獲取肽質(zhì)量指紋圖譜,借助于Mascot Distiller/Mascot Wizard軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。對(duì)鑒定的部分代表性的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色和Western blot檢測(cè),一方面驗(yàn)證蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,另一方面對(duì)蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定位和半定量分析。 結(jié)果: 1.對(duì)照組、吸煙組、COPD組的肺組織蛋白質(zhì)組進(jìn)行2-DE分別分離出775±38、641±33、729±21個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)。通過對(duì)3組研究對(duì)象的2-DE圖像進(jìn)行比較分析,共找到表達(dá)差異大于1.5倍的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)47個(gè)。通過對(duì)47個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定,共鑒定出24種蛋白質(zhì),功能主要涉及基本代謝酶類、氧化應(yīng)激蛋白、凝血/纖溶相關(guān)蛋白、蛋白降解相關(guān)酶及細(xì)胞生長(zhǎng)分化相關(guān)蛋白等,其中21種蛋白在COPD肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)研究中未見報(bào)道。與對(duì)照組相比,22種蛋白質(zhì)在吸煙組表達(dá)上調(diào),在COPD組表達(dá)水平進(jìn)一步增高。 2.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:HSP27蛋白表達(dá)于肺內(nèi)各種類型細(xì)胞,Cathepsin D主要表達(dá)于肺泡結(jié)構(gòu)區(qū)域,PPIA及D4-GDI表達(dá)于除支氣管上皮細(xì)胞以外的各種肺組織細(xì)胞,3組間的表達(dá)強(qiáng)度變化趨勢(shì)與蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果一致。 3.Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示:與不吸煙者相比較,HSP27、Cathepsin D、PPIA、D4-GDI在吸煙者肺組織表達(dá)上調(diào),COPD患者較非COPD吸煙者表達(dá)水平進(jìn)一步增高。3組間的表達(dá)強(qiáng)度變化趨勢(shì)與蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果一致。 結(jié)論: 1.通過對(duì)對(duì)照組、吸煙組及COPD組進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)比較分析,成功鑒定了24種差異表達(dá)的蛋白質(zhì),主要為基本代謝酶類、凝血/纖溶相關(guān)蛋白質(zhì)、氧化應(yīng)激相關(guān)酶類、蛋白降解相關(guān)酶以及細(xì)胞生長(zhǎng)分化相關(guān)蛋白質(zhì)。 2.本研究結(jié)果首次說明:吸煙能夠?qū)е路谓M織HSP27、PPIA及D4-GDI等蛋白質(zhì)表達(dá)水平升高,吸煙者肺組織的HSP27、Cathepsin D、PPIA及D4-GDI等蛋白質(zhì)表達(dá)水平與COPD的發(fā)病機(jī)制和COPD易感性相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R563.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 李香蘭;尤慶山;楊艷梅;馬玉彥;唐雅莉;蔡會(huì)龍;郭汝濤;;表面增強(qiáng)激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)篩查肺癌血清特異性蛋白質(zhì)及其臨床意義[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年02期

2 歐陽(yáng)卿;胡瑞成;戴愛國(guó);譚雙香;;慢性阻塞性肺疾病與非慢性阻塞性肺疾病吸煙者肺組織蛋白質(zhì)組學(xué)比較分析[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2010年01期

3 陳林;戴愛國(guó);胡瑞成;;aPKC及ERK在慢性阻塞性肺疾病大鼠中對(duì)NRF2-γ-GCS的調(diào)控作用[J];中國(guó)病理生理雜志;2007年11期

4 胡瑞成,戴愛國(guó),譚雙香;慢性阻塞性肺疾病患者肺部缺氧誘導(dǎo)因子1α表達(dá)研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2002年08期

5 ;慢性阻塞性肺疾病診治指南(2007年修訂版)[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2007年01期

本文編號(hào)：2758230