【摘要】： 目的 探討不可分型流感嗜血桿菌(NTHi)與氣液界面無(wú)血清培養(yǎng)原代兔氣管粘膜上皮細(xì)胞的相互作用；將該菌作用于原代培養(yǎng)人的氣管、支氣管粘膜上皮細(xì)胞，誘導(dǎo)其分泌和表達(dá)前炎癥細(xì)胞因子并觀察其變化；了解上海地區(qū)門(mén)急診COPD急性加重期(AECB)患者氣道的細(xì)菌感染情況，分別比較膿痰組、白粘痰組的痰炎性細(xì)胞數(shù)與細(xì)菌陽(yáng)性率，并研究AECB患者氣道細(xì)菌感染對(duì)氣道炎癥的影響。 方法 (1)用低溫酶消化法分離兔氣管粘膜上皮細(xì)胞，無(wú)血清培養(yǎng)基及膠原覆蓋膜形成的氣液界面培養(yǎng)方式培養(yǎng)，使上皮細(xì)胞分化成假?gòu)?fù)層粘膜纖毛上皮細(xì)胞，然后加入NTHi感染上皮細(xì)胞，24小時(shí)后行掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)檢查；(2)同上法分離人氣管、支氣管粘膜上皮細(xì)胞(HBEC)，無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞融合成片，分別用NTHi、NTHi+紅霉素(0.1mg／L)、NTHi+紅霉素(10mg／L)、NTHi+慶大霉素(100mg／L)、NTHi+地塞米松(0.1mM)、正常未處理為對(duì)照組感染HBEC24h后，ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中IL-8、TNF-α的水平和免疫組化法檢查細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的變化；(3)收集門(mén)急診慢性支氣管炎、COPD急性加重期患者159份痰液進(jìn)行分離培養(yǎng)，并對(duì)痰顏色進(jìn)行評(píng)分、炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)與細(xì)胞分類檢查，研究膿痰組、白粘痰組的痰炎性細(xì)胞數(shù)與細(xì)菌陽(yáng)性率的差異；(4)收集97份取自于97例AECB患者痰，被分為5組，銅綠假單胞菌組、肺炎克雷白桿菌組、流感嗜血桿菌組、副流感嗜血桿菌組和無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)組，15份痰取自于15例正常健康對(duì)照組，對(duì)痰液進(jìn)行炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)與細(xì)胞分類檢查，并用ELISA法測(cè)定痰上清液中白細(xì)胞介素8(IL-8)、白細(xì)胞介素6(IL-6)與腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平。 結(jié)果 (1)NTHi感染24h后SEM示氣管粘膜上皮細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)破壞，90％細(xì)胞凋亡或死亡，纖毛倒伏、斷裂，細(xì)菌與非纖毛上皮細(xì)胞連接，TEM示細(xì)胞表面有較多微絨毛，細(xì)菌粘附在細(xì)胞表面，伴微絨毛延伸或偽足包繞細(xì)菌，將其吞噬至胞內(nèi)；(2)NTHi能顯著誘導(dǎo)HBEC釋放IL-8、TNF-α和細(xì)胞膜表達(dá)ICAM-1，與正常對(duì)照組相比(P＜0.001)，0.1mg／L紅霉素、慶大霉素組與NTHi組類似顯著誘導(dǎo)HBEC釋放IL-8、TNF-α和ICAM-1的表達(dá)，10mg／L紅霉素、地塞米松組抑制IL-8、TNF-α分泌和ICAM-1的表達(dá)，尤以地塞米松組為顯著；(3)共鑒定出致病菌92株(57.9％)， 省二軍醫(yī)大學(xué)不士學(xué)位論文 主要為流感嗜血桿菌、肺炎克雷白桿菌、銅綠假單胞菌，159份痰中副流感嗜血桿 菌共57株o5．90），膿痰87份，細(xì)菌陽(yáng)性率為82．7o，白粘痰72份，細(xì)菌陽(yáng)性率 27．8％，兩組相比有顯著差異沙功力01），膿痰白細(xì)胞總數(shù)顯著高于白粘痰？＜O．001）： K）AECB患者痰中＊｛、IL6、TNF川的水平及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于健康對(duì)照 組，銅綠假單胞菌組、Hi組、肺炎克雷白桿菌組IL－8、TNF－Q的水平及中性粒細(xì) 胞計(jì)數(shù)均顯著高于無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)組，銅綠假單胞菌組和Hi組IL－8、TNF－Q的水平高 于肺炎克雷白桿菌，HP組與無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)組相比IL－8、TNF－a的水平無(wú)顯著差異， 但中性粒細(xì)胞顯著升高，AECB患者各組IL6無(wú)顯著差異。 靴＊）NTHi粘附在上皮細(xì)胞表面，通過(guò)偽足和微絨毛延伸包繞細(xì)菌，將細(xì) 菌吞噬在胞內(nèi)，NTlli對(duì)上皮細(xì)胞有毒性作用，致上皮細(xì)胞變性壞死；＠）HBEC能 分泌IL8和hFk，NTHi作用后顯著誘導(dǎo)人氣管粘膜上皮細(xì)胞分泌和表達(dá)前炎癥 細(xì)胞因子，慶大霉素?zé)o抗炎作用，紅霉素有抗炎作用，地塞米松有顯著抗炎作用：O） AECB患者膿痰中細(xì)菌陽(yáng)性率較白粘痰顯著增高，可以作為抗菌藥物治療指征，氣 道細(xì)菌感染導(dǎo)致中性粒細(xì)胞明顯增高，痰顏色加深，氣道炎癥加重；以）AECB患者 氣道有Hi、銅綠假單胞菌、肺炎克雷白桿菌感染，其有關(guān)氣道炎癥標(biāo)志增加，支持 它們?cè)贏ECB中起著病原學(xué)作用。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R563.8
【圖文】：

第二軍茵又學(xué)碩壬學(xué)在論丈菌粘附在細(xì)胞表面(圖1一4，1一5)。TEM示多數(shù)上皮細(xì)胞凋亡或死亡，細(xì)胞表面有較多微絨毛，NTHi粘附在細(xì)胞表面，伴微絨毛延伸，有時(shí)有偽足包繞NTHi，將其吞噬胞內(nèi)，部分細(xì)菌通過(guò)細(xì)胞層進(jìn)人聚碳酸脂膜內(nèi)，細(xì)胞間可見(jiàn)到細(xì)菌。(圖1一6，1一7)。圖1一2正常上皮細(xì)胞纖毛sEMX4000圖1一3正常上皮細(xì)胞sEMX2000圖1一4圖1一5NTHi感染24h后上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變

第二軍茵又學(xué)碩壬學(xué)在論丈菌粘附在細(xì)胞表面(圖1一4，1一5)。TEM示多數(shù)上皮細(xì)胞凋亡或死亡，細(xì)胞表面有較多微絨毛，NTHi粘附在細(xì)胞表面，伴微絨毛延伸，有時(shí)有偽足包繞NTHi，將其吞噬胞內(nèi)，部分細(xì)菌通過(guò)細(xì)胞層進(jìn)人聚碳酸脂膜內(nèi)，細(xì)胞間可見(jiàn)到細(xì)菌。(圖1一6，1一7)。圖1一2正常上皮細(xì)胞纖毛sEMX4000圖1一3正常上皮細(xì)胞sEMX2000圖1一4圖1一5NTHi感染24h后上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變

NTHi作用HBEe24h后xZo.一

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 方正,修清玉,羅文侗;慢性阻塞性肺疾病中的流感嗜血桿菌感染[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年09期

2 修清玉,方正,賴國(guó)祥,王桂芳,羅文侗,陳吉泉;改良流感嗜血桿菌培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)研究與評(píng)價(jià)[J];中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志;1998年03期

本文編號(hào)：2755913