【摘要】：目的：通過中國四大產(chǎn)區(qū)(青海芒崖、四川新康、甘肅阿克塞、陜南)溫石棉及四種代用纖維(玻璃纖維、陶瓷纖維、硅灰石、巖棉)作用于中國倉鼠肺細(xì)胞(Chinese Hamster Lung Cell,V79細(xì)胞),探討粉塵對細(xì)胞的毒性作用以及比較溫石棉及代用纖維之間的毒性差異,和p73基因和p53基因在粉塵導(dǎo)致的細(xì)胞損傷中的表達(dá)及兩者間的相互關(guān)系。方法：選取四大產(chǎn)區(qū)溫石棉及四種代用纖維共八種設(shè)立25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml五種濃度的粉塵懸液分別作用于V79細(xì)胞,另設(shè)空白對照組,染毒24小時(shí)后用活細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell counting kit-8, CCK-8)檢測細(xì)胞增殖情況,比較各組細(xì)胞存活率。選擇50μg/ml這一濃度作用于V79細(xì)胞24小時(shí),每種粉塵設(shè)立三個(gè)平行對照組,另設(shè)立一個(gè)空白對照組。瑞氏-吉姆薩(Wright-Giemsa)染色觀察細(xì)胞形態(tài)；用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測p73基因和p53基因的表達(dá)。結(jié)果：(1)瑞氏-吉姆薩染色結(jié)果：多數(shù)溫石棉和代用纖維組可發(fā)現(xiàn)裸核、空泡以及黑褐色顆粒沉著現(xiàn)象。(2)細(xì)胞存活率：不同濃度的粉塵作用于V79細(xì)胞24小時(shí)后,多數(shù)以50μg/ml時(shí)細(xì)胞增殖最快,多數(shù)溫石棉組的細(xì)胞出現(xiàn)成倍增長,且溫石棉組的增殖普遍大于代用纖維組。(3)實(shí)時(shí)熒光定量PCR (real-time quatitat ive polymerase chain reaction,real-time Q-PCR)檢測p73基因和p53基因。1)p73基因：阿克塞組、玻璃纖維組、巖棉組、陜南組p73與空白對照組分別比較可以得出,阿克塞組、玻璃纖維組、巖棉組、陜南組的表達(dá)量明顯高于空白對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而青海芒崖組、四川新康組、陶瓷纖維組、硅灰石組分別與空白對照組對比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其余纖維組間兩兩對比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2)p53基因：空白對照組與各個(gè)粉塵組及各纖維組間相比,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3)p53基因與p73基因相關(guān)性檢驗(yàn)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：(1)多數(shù)溫石棉組和代用纖維組出現(xiàn)細(xì)胞中毒現(xiàn)象。(2)p73基因在阿克塞組、玻璃纖維組、巖棉組和陜南組的表達(dá)明顯高于空白對照組,提示這幾組溫石棉及代用纖維可能導(dǎo)致細(xì)胞惡性改變,p73基因是通過上調(diào)其表達(dá),在導(dǎo)致細(xì)胞惡性改變中可能發(fā)揮癌基因的作用。阿克塞組、玻璃纖維組、巖棉組和陜南組導(dǎo)致癌變的可能性更大,而其他纖維組導(dǎo)致癌變的可能性卻不明確。(3)p53在各組中的表達(dá)無明顯差異,p53在粉塵所致的細(xì)胞惡性改變中的作用不明確。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R563.9
【圖文】：

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圖2一3RNA電泳圖FigZ一3RNAeleetroPhoresisimages錄成cDNA細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采反轉(zhuǎn)錄成cDNA。I公司的RevertAidTMFristStrandcDNASynthesisK條件如下:在冰上預(yù)混下列溶液:totalRNAS林lrandomhexamerPrimer(0.2拼g/林l)l協(xié)ldeionizedwater，nueleasefree6林l

圖2一3RNA電泳圖FigZ一 3RNAeleetroPhoresisimages2.5.6逆轉(zhuǎn)錄成cDNA提取細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。采用MBI公司的 RevertAidTMFristStrandcDNASynthesisKit，在PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增，條件如下:(l)在冰上預(yù)混下列溶液: totalRNAS林l randomhexamerPrimer(0.2拼g/林l)l協(xié)l deionizedwater， nueleasefree6林l，‘1，1..‘1..

本文編號：2750684