【摘要】：目的：通過中國四大產(chǎn)區(qū)(青海芒崖、四川新康、甘肅阿克塞、陜南)溫石棉及四種代用纖維(玻璃纖維、陶瓷纖維、硅灰石、巖棉)作用于中國倉鼠肺細胞(Chinese Hamster Lung Cell,V79細胞),探討粉塵對細胞的毒性作用以及比較溫石棉及代用纖維之間的毒性差異,和p73基因和p53基因在粉塵導致的細胞損傷中的表達及兩者間的相互關系。方法：選取四大產(chǎn)區(qū)溫石棉及四種代用纖維共八種設立25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml五種濃度的粉塵懸液分別作用于V79細胞,另設空白對照組,染毒24小時后用活細胞計數(shù)試劑盒(cell counting kit-8, CCK-8)檢測細胞增殖情況,比較各組細胞存活率。選擇50μg/ml這一濃度作用于V79細胞24小時,每種粉塵設立三個平行對照組,另設立一個空白對照組。瑞氏-吉姆薩(Wright-Giemsa)染色觀察細胞形態(tài)；用實時熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測p73基因和p53基因的表達。結果：(1)瑞氏-吉姆薩染色結果：多數(shù)溫石棉和代用纖維組可發(fā)現(xiàn)裸核、空泡以及黑褐色顆粒沉著現(xiàn)象。(2)細胞存活率：不同濃度的粉塵作用于V79細胞24小時后,多數(shù)以50μg/ml時細胞增殖最快,多數(shù)溫石棉組的細胞出現(xiàn)成倍增長,且溫石棉組的增殖普遍大于代用纖維組。(3)實時熒光定量PCR (real-time quatitat ive polymerase chain reaction,real-time Q-PCR)檢測p73基因和p53基因。1)p73基因：阿克塞組、玻璃纖維組、巖棉組、陜南組p73與空白對照組分別比較可以得出,阿克塞組、玻璃纖維組、巖棉組、陜南組的表達量明顯高于空白對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。而青海芒崖組、四川新康組、陶瓷纖維組、硅灰石組分別與空白對照組對比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。其余纖維組間兩兩對比差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2)p53基因：空白對照組與各個粉塵組及各纖維組間相比,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3)p53基因與p73基因相關性檢驗無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論：(1)多數(shù)溫石棉組和代用纖維組出現(xiàn)細胞中毒現(xiàn)象。(2)p73基因在阿克塞組、玻璃纖維組、巖棉組和陜南組的表達明顯高于空白對照組,提示這幾組溫石棉及代用纖維可能導致細胞惡性改變,p73基因是通過上調其表達,在導致細胞惡性改變中可能發(fā)揮癌基因的作用。阿克塞組、玻璃纖維組、巖棉組和陜南組導致癌變的可能性更大,而其他纖維組導致癌變的可能性卻不明確。(3)p53在各組中的表達無明顯差異,p53在粉塵所致的細胞惡性改變中的作用不明確。
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R563.9
【圖文】：

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圖2一3RNA電泳圖FigZ一 3RNAeleetroPhoresisimages2.5.6逆轉錄成cDNA提取細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。采用MBI公司的 RevertAidTMFristStrandcDNASynthesisKit，在PCR儀上進行擴增，條件如下:(l)在冰上預混下列溶液: totalRNAS林l randomhexamerPrimer(0.2拼g/林l)l協(xié)l deionizedwater， nueleasefree6林l，‘1，1..‘1..

本文編號：2750684