發(fā)布時(shí)間：2020-07-01 00:55

【摘要】： 目的：支氣管哮喘是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅公眾健康的一種慢性疾病，涉及各個(gè)年齡組。世界許多國家都開展對哮喘治療的研究，但是其發(fā)病率及死亡率并未下降反而有上升（特別是兒童）。支氣管哮喘是一種由多種因素誘發(fā)的疾病，病因和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜。是以氣道高反應(yīng)性（AHR）和慢性氣道炎癥為特征的變態(tài)反應(yīng)性疾病，是由嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞和細(xì)胞因子參與的氣道慢性炎癥。在治療上以激素效果最佳，但長期應(yīng)用激素可帶來嚴(yán)重的副作用。因此有必要研究哮喘的發(fā)病機(jī)理，尋求新的治療哮喘的方法。白細(xì)胞介素13（IL-13）是近年來研究的熱點(diǎn)之一，認(rèn)為與哮喘發(fā)病密切相關(guān)。B7/CD28是主要的協(xié)同刺激途徑之一，目前認(rèn)為在哮喘的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。近年來的研究證實(shí)，在哮喘中T細(xì)胞的增生、活化、EOS的積聚以及TH2類細(xì)胞因子分泌增加均與B7-2(CD86)/CD28協(xié)同刺激途徑相關(guān)。 為了進(jìn)一步探討IL-13和CD86在哮喘癥中的作用及之間的相互關(guān)系，我們檢測了哮喘患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）IL-13基因表達(dá)和蛋白質(zhì)水平、哮喘病人PBMC中單核細(xì)胞和B細(xì)胞表達(dá)CD86水平；并用重組人IL-13（rhIL-13）干預(yù)呼吸道上皮細(xì)胞株(9HTE)及哮喘病 WP=10 人PBMC，了解其產(chǎn)生嗜酸性粒細(xì)胞趨化蛋白（Eotaxin）、IL-4、IFN-γ和CD86表達(dá)水平；用IL-13和CD86單克隆抗體分別阻斷IL-13和CD86，以觀察相關(guān)細(xì)胞因子產(chǎn)生和基因表達(dá)水平。從而進(jìn)一步探討哮喘的發(fā)病機(jī)理，為臨床治療哮喘提供一定的理論依據(jù)和途徑。 方法： 1．診斷為哮喘急性發(fā)作期患兒78例，哮喘緩解期患兒16例，門診體檢健康兒童66例作為研究對象。 2．肝素抗凝血分離PBMC，用ELISA法測定不同因素干預(yù)的PBMC培養(yǎng)上清細(xì)胞因子IL-4、IL-12、IL-13、IFN-γ、血漿IL-13、血漿總IgE及血漿Eotaxin水平。 3．RT-PCR半定量法測定PBMC中IL-4mRNA和IL-13mRNA表達(dá)水平。 4．分別用PE-CD14、PE-CD19和FITC-CD4標(biāo)記單核細(xì)胞、B細(xì)胞和T細(xì)胞，用直接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)分別測定哮喘患兒CD14+和CD19+細(xì)胞表面表達(dá)CD86水平，CD4+細(xì)胞表達(dá)CD30水平。 5．體外用不同濃度anti-CD86mAb干預(yù)PBMC后，用液相閃爍儀測定淋巴細(xì)胞增殖水平（cpm）。 結(jié)果： 1．哮喘組血漿IL-13和IgE水平較對照組明顯增高（P0.01）；哮喘組PBMC培養(yǎng)上清IL-13和IL-4水平較對照組增高（P0.05，P0.01），IFN-γ和IL-12水平較對照組明顯降低（P0.05〉。 2．對照組PBMC經(jīng)PHA刺激培養(yǎng)3d后IL-13達(dá)最高水平，以后逐 WP=11 漸下降；哮喘組3d達(dá)到較高水平，5d達(dá)更高水平，7d后有所下降，但3組間無顯著性差異（P0.05）；哮喘組PBMC培養(yǎng)3、5、7d的IL-13水平均較對照組高，差異有顯著性；但培養(yǎng)1d時(shí)，兩組水平均較低，差異無顯著性。 3.對照組和哮喘組PBMC經(jīng)PHA刺激1d后IL-4有明顯上升，在第3d仍保持較高水平，第5d明顯下降，第7d下降更明顯；1d和3d相比差異無顯著性，5d和7d相比差異無顯著性，1d和3d分別與5d和7d相比差異有顯著性。哮喘組PBMC培養(yǎng)1d、3d的水平均較對照組高，差異有顯著性；培養(yǎng)5d和7d仍較對照組增高，但差異無顯著性。 4.哮喘組PBMC中IL-13mRNA和IL-4mRNA表達(dá)水平均較對照組增高，差異有顯著性。 5.哮喘組CD4+細(xì)胞表達(dá)CD30的百分率較對照組明顯增高，差異有顯著性；哮喘組PBMC培養(yǎng)上清IL-4和IL-13的水平與CD30表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)。 6.哮喘組CD14+細(xì)胞表達(dá)CD86 MFI較對照組顯著上調(diào)；哮喘組PBMC經(jīng)LPS刺激后其CD19+，CD19+CD86+細(xì)胞百分率較對照組高； IgE水平哮喘組也較對照組高；哮喘組CD14+細(xì)胞的CD86 MFI與CD19+CD86+細(xì)胞百分率有顯著正相關(guān)；CD19+CD86+細(xì)胞百分率與血漿總IgE水平在哮喘組具有顯著正相關(guān)；哮喘組CD19+細(xì)胞百分率、CD19+CD86+細(xì)胞百分率與IL-4、IL-13水平呈顯著正相關(guān)。 7．9HTE細(xì)胞株經(jīng)IL-13和TNF-α干預(yù)后均能產(chǎn)Eotaxin，均較空 WP=12 白對照組增高，差異有顯著性； IL-13和TNF-α共同干預(yù)對Eotaxin產(chǎn)生并無疊加作用。IL-13能誘導(dǎo)9HTE細(xì)胞表達(dá)CD86，其程度與炎癥因子TNF-α相當(dāng)，而IL-13和TNF-α共同干預(yù)并無疊加作用。 8．哮喘急性發(fā)作組Eotaxin水平明顯高于對照組和哮喘緩解組，但對照組和哮喘緩解組比較差異無顯著性。 9．IL-13/TNF-α聯(lián)合干預(yù)對照組和哮喘組PBMC后產(chǎn)生的Eotaxin較單獨(dú)用IL-13干預(yù)水平高，兩組間具有顯著性差異，但總體水平是低的；無論在對照組和哮喘組IL-13和IL-13/TNF-α幾乎不能誘導(dǎo)PBMC產(chǎn)生IL-4；在哮喘組IL-13/TNF-α干預(yù)后IFN-γ產(chǎn)生水平較IL-13干預(yù)后為低，差異有顯著性。 10． 哮喘組PBMC經(jīng)IL-13/TNF-α干預(yù)后CD14+CD86+和CD19+CD86+的表達(dá)較IL-13干預(yù)組高，差異有顯著性； IL-13+TNF-α干預(yù)組CD14+CD86+和CD19+CD86+表達(dá)較正常對照組高，差異有顯著性。 11．IL-4mAb干預(yù)后哮喘組IL-13mRNA表達(dá)和IL-13水平降低,IFN-γ水平增加；IL-13mAb干預(yù)后哮喘組和正常組IL-4mRNA表達(dá)和IL-4水平無變化，但I(xiàn)L-12水平增加； IL-13mAb/IL-4mAb聯(lián)合干預(yù)后，哮喘組IL-12水平增加。 12．Anti-CD86 mAb濃度為5×10-2μg/ml和5×10-3μg/ml時(shí)正常人淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的cpm值?
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R562.25
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 第一部分細(xì)胞分泌 IgE 增加；CD30 陽性細(xì)胞增加與 PBMC 培養(yǎng)上清中 IL-4、IL-13 及血漿總IgE 水平呈顯著正相關(guān)；結(jié)果似提示：分泌 IL-4 和 IL-13 的 TH2 類細(xì)胞活化、增殖的克隆可能主要是由 CD30 陽性細(xì)胞克隆組成,而 IL-4 和 IL-13 的增加可誘導(dǎo) B細(xì)胞分泌較多的 IgE。PBMC 中活化的 CD4+細(xì)胞表達(dá) CD30 并不是特異性的,如在腎臟疾患小兒其CD30 表達(dá)也較對照組增高[28]。至于CD30 為何優(yōu)先表達(dá)于TH2 型細(xì)胞，并且在哮喘癥中與 IL-4、IL-13 和 IgE 水平有較強(qiáng)的相關(guān)性，CD30-CD30L 交聯(lián)后的信號傳導(dǎo)以及引起一系列的生理功能需進(jìn)一步的研究。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 第二部分表 2-2 哮喘患兒 PBMC 中 CD19+、CD19+CD86+細(xì)胞百分率和血漿總 IgE 水平（ x ±s）Tab 2 -2 The percentage of CD19+、CD19+CD86+ cells in PBMC and plasma totalIgE level in children with asthma（ x ±s）n CD19+（%） CD19+CD86+ (%) IgE（IU/ml）對照組 20 8.16±2.95 2.29±1.36 45.86±36.43哮喘組 20 13.47±3.99* 4.62±1.96* 286.25±234.18*注:* 與對照組相比差異有顯著性,P<0.01;

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 雷永紅;;支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制中細(xì)胞因子作用的研究[J];九江學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年01期

本文編號：2736066