【摘要】： 目的研究過氧化酶體增殖物激活受體a (peroxisome proliferator-activated receptor a, PPARa) mRNA在穩(wěn)定期的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者股外側(cè)肌中的表達(dá)及血清TNFa、IL-8、hsCRP水平,探討COPD肌萎縮發(fā)病機(jī)制。 方法將30例入選者分為健康組(10例)、COPD骨骼肌萎縮組(10例)、COPD骨骼肌非萎縮組(10例),首先進(jìn)行肺功能、身體組成、血?dú)夥治龅葯z查。再采用ELISA法檢測血清中IL-8、TNFa水平,我院生化實(shí)驗(yàn)室檢測hsCRP水平。最后以針吸活檢方法取所有入選者股外側(cè)肌50mg作為標(biāo)本,通過對實(shí)驗(yàn)條件的探討,建立了實(shí)時熒光定量RT-PCR檢測方法,檢測股外側(cè)肌PPARa mRNA相對表達(dá)量。 結(jié)果1. COPD骨骼肌萎縮患者臨床特點(diǎn)：COPD骨骼肌萎縮組較COPD骨骼肌非萎縮組患COPD時間長p0.01)。COPD骨骼肌萎縮組較COPD骨骼肌非萎縮組和健康組體質(zhì)量、體質(zhì)量指數(shù)、去脂肪質(zhì)量、去脂肪指數(shù)下降(均p＜0.01);COPD骨骼肌萎縮組較健康組脂肪質(zhì)量、脂肪指數(shù)下降(均p0.01)；COPD骨骼肌非萎縮組較健康組體質(zhì)量指數(shù)下降(p0.05)。三組肺功能FEV1%PRE、FEV1/FVC%、FVC%PRE兩兩比較均有差異(均p0.01),COPD骨骼肌萎縮組較COPD骨骼肌非萎縮組和健康組以上三項(xiàng)均低；COPD骨骼肌非萎縮組較健康組以上三項(xiàng)均低。COPD骨骼肌萎縮組和COPD骨骼肌非萎縮組PO2低與健康組(均p0.01)。 2.血清炎癥因子水平：血清CRP三組無差異,三組血清IL-8、TNFa兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.01),COPD骨骼肌萎縮組較COPD骨骼肌非萎縮組和健康組血清IL-8、TNFa均升高,COPD骨骼肌非萎縮組較健康組血清IL-8、TNFa均升高。 3.實(shí)時熒光定量RT-PCR條件探討：通過對實(shí)驗(yàn)條件的探討,確定PPARa mRNA和GAPDH實(shí)時熒光定量RT-PCR反應(yīng)體系均為cDNA 3.0μl, TaqDNA聚合酶0.1U/μl,1.0 ul,上下游引物各1.0μl,實(shí)時熒光定量試劑(One-step RT-PCR Kit)25μl,總體積50μl。擴(kuò)增條件：94°C預(yù)變性5 min,94°C變性45s,63℃復(fù)性45s,72°C延伸45s,33個循環(huán),72℃加時延伸5min。 4. PPARa mRNA表達(dá)：股外側(cè)肌PPARa mRNA表達(dá)量分別為：健康組0.82±0.15；COPD骨骼肌萎縮組0.44±0.12；COPD骨骼肌非萎縮組0.69±0.14,所有COPD0.56±0.18。COPD骨骼肌萎縮組股外側(cè)肌PPARa mRNA表達(dá)量與健康組及COPD骨骼肌非萎縮組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p0.01),COPD骨骼肌萎縮組股外側(cè)肌PPARa mRNA表達(dá)下降；COPD骨骼肌非萎縮組與健康組股外側(cè)肌PPARa mRNA表達(dá)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.05),但較健康組表達(dá)呈下降趨勢；所有COPD股外側(cè)肌PPARa mRNA表達(dá)量與健康組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01),所有COPD股外側(cè)肌PPARa mRNA表達(dá)量下降。 5.相關(guān)關(guān)系：股外側(cè)肌PPARa mRNA表達(dá)與FFMI及BMI正相關(guān)(r=0.586、r=0.626；p0.01)；與FEV1% PRE及FEV1% FVC正相關(guān)(r=0.574、r=0.613：p0.01)；與TNFa及IL-8負(fù)相關(guān)(r=-0.618、r=-0.690；p0.01)。 結(jié)論本研究顯示COPD合并骨骼肌萎縮的患者具有患COPD年限較長、身體組成發(fā)生改變、肺功能下降及慢性低氧血癥等臨床特點(diǎn)。股外側(cè)肌PPARa mRNA在所有COPD及COPD合并骨骼肌萎縮的患者中表達(dá)下降,在COPD骨骼肌非萎縮患者中表達(dá)呈下降趨勢。血清TNFa、IL-8在COPD骨骼肌萎縮及非萎縮患者中升高。PPARa mRNA表達(dá)與FFMI及BMI正相關(guān)；與TNFa及IL-8負(fù)相關(guān)；與FEV1% PRE及FEV1% FVC正相關(guān)。綜上表明PPARa mRNA表達(dá)下調(diào)參與了COPD慢性全身炎癥反應(yīng),不僅累及肺使得肺功能的進(jìn)一步下降,也可累及骨骼肌導(dǎo)致骨骼肌萎縮的發(fā)生,在COPD骨骼肌萎縮中起了重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R563.9
【圖文】：

.0BS矛0了560的加書即651075(A)(B)PPARamRNA和GApDH擴(kuò)增的熔解曲線(A:PPARamRNA，B:GAPDH)4.2.2擴(kuò)增曲線定量分析的目的基因和內(nèi)參基因擴(kuò)增曲線均呈“S”型說明擴(kuò)增成功，見圖根據(jù)擴(kuò)增曲線設(shè)置基線后計(jì)算出每個樣本的Ct值，因Ct值與模板中基因拷的對數(shù)成線性關(guān)系，所以根據(jù)Ct值就可以間接了解模板中基因的拷貝數(shù)從目的基因定量。如圖3所示內(nèi)參基因的Ct值為巧，而目的基因的Ct值為明內(nèi)參基因模板中基因的拷貝數(shù)較目的基因大，先進(jìn)入指數(shù)擴(kuò)增期。圖5內(nèi)參基因和目的基因擴(kuò)增曲線De勝.Rn粕Cyc!e

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2734844