【摘要】： 目的 慢性氣道炎癥和氣道重塑是COPD的主要特征。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其內(nèi)源性抑制因子—組織金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）被認(rèn)為是通過(guò)破壞基質(zhì)的降解和沉積的平衡來(lái)參與COPD的發(fā)病。本研究擬通過(guò)建立COPD大鼠模型，了解膠原酶MMP-1、MMP-8、MMP-13和它們的天然抑制因子TIMP-1的表達(dá)情況，從而探討膠原酶在COPD發(fā)病中的作用。 方法 采用10周齡Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、異丙托溴銨組，對(duì)于模型組和異丙托溴銨組在第1、15天均給予經(jīng)氣管插管氣道內(nèi)注入脂多糖（LPS）0.2毫克/只，其余時(shí)間在72升的密閉玻璃箱中給予5%的煙薰0.5小時(shí)/次，每日兩次，共32天，自第8天給予異丙托溴銨霧化，每日1次，其余兩組以生理鹽水替代霧化。測(cè)定肺功能及進(jìn)行支氣管肺泡灌洗后，取肺組織石蠟切片HE 染色觀察肺組織病理改變，BALF計(jì)數(shù)和分類，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)MMP-1、MMP8和TIMP-1在肺泡和支氣管的表達(dá)。半定量RT-PCR檢測(cè)肺組織MMP-13mRNA和TIMP-1mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果 1、同對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織病理切片呈現(xiàn)類似于人的COPD病理學(xué)改變，表現(xiàn)為小氣道炎癥、上皮層增厚，平滑 WP=7 肌層增厚顯著；光鏡下表現(xiàn)為小葉中央型肺氣腫，單位面積肺泡數(shù)減少，肺泡面積增大。肺功能FEV0.3/FVC%降低、Ri、Re增加。2、與對(duì)照組比較，模型組和異丙托溴銨組的BALF中的細(xì)胞總數(shù)增加(分別為1.72±0.56、4.1±0.76、3.60±0.52，P0.05)，細(xì)胞成分以中性粒細(xì)胞增加為主。異丙托溴銨組細(xì)胞數(shù)雖較模型組有下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、免疫組織化學(xué)檢測(cè)，MMP-1、MMP-8和TIMP-1在三組大鼠支氣管和肺組織均有表達(dá)，表達(dá)細(xì)胞為上皮細(xì)胞，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肺實(shí)質(zhì)細(xì)胞；同對(duì)照組比較，模型組和異丙托溴銨組的MMP-1、MMP-8和TIMP-1的蛋白表達(dá)增強(qiáng)。4、半定量RT-PCR檢測(cè)支氣管肺組織中MMP-13、TIMP-1mRNA，發(fā)現(xiàn)模型組和異丙托溴銨組均較對(duì)照組升高。5、肺泡面積和肺組織MMP-1、MMP-8免疫活性強(qiáng)度成正相關(guān)（r分別為0.534、0.385，P0.05）,而TIMP-1則無(wú)顯著性相關(guān)（r=0.355,P0.05）。MMP-1、TIMP-1的表達(dá)活性強(qiáng)度和支氣管平滑肌層面積正相關(guān)（r分別為0.345、0.353，P0.05），MMP-8無(wú)顯著相關(guān)（r=0.210，P0.05）。6、同模型組比較，異丙托溴銨組在FEV0.3/FVC%、Ri、Re、BALF細(xì)胞總數(shù)和成分變化、氣道上皮層和平滑肌層面積無(wú)差異；MMP-1、MMP-8、TIMP-1蛋白表達(dá)、MMP-13mRNA和TIMP-1mRNA表達(dá)無(wú)顯著性差異。 結(jié)論 1、我們應(yīng)用氣道內(nèi)注入LPS結(jié)合煙薰的方法成功復(fù)制了COPD動(dòng)物模型；2、COPD大鼠支氣管和肺組織表達(dá)MMP-1、MMP-8、MMP-13和TIMP-1增多，膠原酶與TIMP-1間表達(dá)不平衡，可能參與了COPD肺結(jié)構(gòu)重塑的過(guò)程；3、異丙托溴銨組雖較模型組 WP=8 MMP-1、MMP-8、MMP-13和TIMP-1表達(dá)有所下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，尚需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量、延長(zhǎng)用藥時(shí)間、進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步觀察。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R563.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2731984