【摘要】： 研究背景 光氣是無色,具有爛干草味的窒息性氣體,是重要的化工原料,廣泛用于橡膠,塑料,染料,農(nóng)藥,醫(yī)藥等化工原料生產(chǎn)。在第一次世界大戰(zhàn)期間,曾被用作軍用毒劑。因此,聯(lián)合國裁軍委員會將光氣定為“雙用途毒劑”。由于光氣用途廣泛,接觸機會多,經(jīng)常因防護不當或意外泄漏發(fā)生人員中毒,導致急性肺損傷(acute lung injury,ALI),甚至發(fā)展成急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratorydistress syndrome,ARDS),危及生命。但目前中毒機制尚不清,也無特效療法,病死率較高,故研究光氣中毒機制具有重要意義。光氣毒作用主要是對呼吸系統(tǒng)的損害,其臨床特點是遲發(fā)性肺水腫甚至急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)。光氣毒作用與吸入濃度和時間有關�？諝庵凶罡呷菰S濃度約0.5mg/m~3。在較低濃度(20mg/m~3,1min)時,無明顯局部刺激作用,須經(jīng)一段癥狀緩解期后才出現(xiàn)肺泡毛細血管膜的損害,導致肺水腫。光氣中毒后可引發(fā)機體的早期保護性炎癥反應,但過度或失控的炎癥反應則可引起全身難以控制的“瀑布式炎癥級聯(lián)反應”,從而發(fā)生急性肺損傷(ALI),進而發(fā)生全身炎癥反應綜合征(systemicinflammatory response syndrome,SIRS),進展成急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。迄今光氣中毒機制假說頗多,包括�；饔谩⒅苯幼饔�、鹽酸作用、神經(jīng)反射作用、肺血流動力學改變等等,但任何一種假說都不能完滿地解釋肺水腫發(fā)生與發(fā)展過程。 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)又稱明膠酶B,是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的一種,可由多種炎性細胞產(chǎn)生,包括中性粒細胞、肺泡巨噬細胞以及結締組織細胞等。MMP-9直接參與肺臟炎癥、損傷過程中的細胞外基質(zhì)的分解和重塑,在急性肺損傷中發(fā)揮重要作用,但其在光氣吸入性肺損傷中的作用尚未見報道。 目前多項實驗研究證明基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在肺損傷中發(fā)揮著重要作用。Fligiel對28例ALI/ARDS患者支氣管肺泡灌洗液進行分析,結果顯示MMP-9,MMP-8,MMP-2均增高。張向峰等建立小鼠高氧環(huán)境下急性肺損傷模型,RT-PCR方法證明MMP-9mRNA在高氧引起的肺損傷中表達增多。KIM等發(fā)現(xiàn)在博來霉素引起的肺損傷中發(fā)現(xiàn)肺組織和支氣管肺泡灌洗液(BALF)中MMP-9和MMP-2均升高,MMP-9升高更明顯,早期主要起肺損傷作用,晚期肺組織中MMP-9和MMP-2也升高,起肺組織損傷修復作用,導致肺纖維化。我們假設光氣引起的肺損傷可能和其他因素引起的肺損傷存在由MMP-9介導的共同通路。 本實驗擬建立大鼠光氣吸入性肺損傷的模型,采用分子生物學方法探討MMP-9在光氣吸入性肺損傷中的表達及意義。 目的建立大鼠光氣吸入性肺損傷動物模型,觀察基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在大鼠光氣吸入性肺損傷中的表達并動態(tài)監(jiān)測MMP-9隨光氣染毒后時間延長的變化。 方法雄性SPF級SD大鼠(180-220g)50只,以隨機數(shù)字表法分為2個大組,五個亞組。即隨機分為空氣對照組和光氣暴露組,光氣暴露組又隨染毒后時間延長分為染毒后2,4,6,8h組。首先建立大鼠光氣吸入性肺損傷動物模型,模型制備按照參考文獻的方法進行,并有所改進。光氣染毒組置于動態(tài)染毒柜中,通入濃度為8.33mg/L的光氣(光氣純度為100%,由2g固體三光氣溶于5ml環(huán)己烷,在N,N-二甲基甲酰胺作用下產(chǎn)生,染毒方法根據(jù)文獻略做改動)染毒5min,對照組動物置于染毒柜內(nèi),除通入的是同樣流量的空氣之外,其余條件與染毒組完全相同。并分別于光氣染毒后2、4、6、8h采用免疫組化和實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法測定MMP-9在肺組織中的表達含量,同時動態(tài)對肺濕/干重比,支氣管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量,中性粒細胞數(shù)以及肺組織病理學改變進行監(jiān)測和對比分析。 結果與空氣對照組相比,光氣暴露組肺組織出現(xiàn)水腫、出血、炎性細胞浸潤,隨時間延長進一步加重。光氣暴露組肺濕/干重比值,BALF中蛋白含量,中性粒細胞計數(shù)均明顯高于空氣對照組(P＜0.05);光氣暴露四組間肺濕/干重比值,BALF中蛋白含量,中性粒細胞計數(shù)應用單因素方差分析比較,差別有統(tǒng)計學意義,隨時間延長肺損傷明顯加重(P＜0.05)。免疫組化結果證明光氣染毒組MMP-9表達含量較空氣對照組增高(P＜0.05),隨時間延長,MMP-9表達含量增高。光氣暴露各組MMP-9mRNA表達水平明顯高于空氣對照組(P＜0.01)。光氣暴露組應用單因素方差分析比較,MMP-9mRNA表達含量差別有統(tǒng)計學意義,隨時間延長,MMP-9mRNA表達含量明顯增高(P＜0.01)。 結論MMP-9的過度激活和表達及其與炎癥因子相互影響在光氣肺損傷過程中發(fā)揮重要的作用。
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R595.1;R563.8
【圖文】：

Zh組:局部陽性(又200)

h組:陽性(x100)

【參考文獻】

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1 陳宏莉;海春旭;梁欣;劉瑞;李嘉琳;王鵬;;大鼠光氣染毒后不同時間點肺水腫及炎癥反應的差異性研究[J];癌變.畸變.突變;2006年02期

2 王鵬,海春旭,梁欣,劉瑞;小鼠PMN的耗竭對光氣所致急性肺損傷的影響[J];第四軍醫(yī)大學學報;2004年08期

3 李娜;邱海波;;一氧化氮在急性肺損傷炎癥反應中的雙向調(diào)節(jié)作用[J];國際呼吸雜志;2006年03期

4 劉穎;劉志;;基質(zhì)金屬蛋白酶與急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征[J];國外呼吸雜志;2006年05期

5 張向峰,高明哲,Hussein D.Foda;基質(zhì)金屬蛋白酶 2 ,9在高氧所致急性肺損傷實驗中的表達(英文)[J];中華急診醫(yī)學雜志;2005年01期

6 申捷;張琳;何岱昆;黃文彬;;基質(zhì)金屬蛋白酶-9在大鼠光氣吸入性肺損傷中的作用[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學;2008年03期

7 秦緒軍;海春旭;梁欣;王鵬;陳宏莉;劉瑞;;大鼠急性光氣吸入對機體氧化損傷的研究[J];毒理學雜志;2005年04期

8 海春旭;;急性光氣中毒機制與防護研究進展[J];毒理學雜志;2007年05期

9 何岱昆;申捷;;光氣吸入性肺損傷的研究進展[J];職業(yè)衛(wèi)生與應急救援;2007年02期

本文編號：2724703