【摘要】： 目的：IL-23／Th17細(xì)胞軸在許多炎癥性疾病中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用,但I(xiàn)L-23在過敏性氣道炎癥中的作用尚不十分清楚。本文旨在觀察IL-23-IL-23R信號(hào)是否參與了哮喘過敏性氣道炎癥的發(fā)生,并進(jìn)一步探討其調(diào)控過敏性氣道炎癥的可能機(jī)制。 方法：(1)選取卵清蛋白(OVA)致敏和非致敏的B6背景雌性小鼠各4-6只,提取其肺組織,采用RT-PCR法測定IL-23p19, IL-12p35, IL-12/IL-23p40和IL-23受體(IL-23R)mRNA的表達(dá)。(2)選取IL-23基因敲除(IL-23 KO)及相同背景的野生型雌性小鼠各4-6只,OVA致敏誘導(dǎo)哮喘模型。提取肺組織,采用HE染色了解炎癥細(xì)胞在肺部的浸潤情況。進(jìn)行肺泡灌洗,計(jì)數(shù)肺泡灌洗液中的細(xì)胞總數(shù),以及采用細(xì)胞甩片及Giemsa染色技術(shù),進(jìn)行細(xì)胞分類的計(jì)數(shù)。RT-PCR法測定肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞過氧化物(EPO)的表達(dá)。ELISA法測定血清中OVA特異性IgE的表達(dá)及肺引流淋巴結(jié)細(xì)胞和脾細(xì)胞體外經(jīng)OVA再刺激后,Th2和Th17相關(guān)細(xì)胞因子的水平。(3)利用人類CD2位點(diǎn)啟動(dòng)子,產(chǎn)生在T細(xì)胞上過度表達(dá)IL-23R的兩組轉(zhuǎn)基因小鼠。RT-PCR法測定其IL-23R的表達(dá)水平,選取其中一組作為實(shí)驗(yàn)用小鼠。選取IL-23R轉(zhuǎn)基因(IL-23R Tg)和B6小鼠,分別從其脾及淺表淋巴結(jié)組織中通過流式分選出原始T淋巴細(xì)胞(naive T細(xì)胞)。經(jīng)過Th17及Thl條件下的體外活化4天,在伴或不伴重組鼠細(xì)胞因子IL-23的作用下,流式細(xì)胞術(shù)測定產(chǎn)生IL-17及IFN-γ的細(xì)胞比例。(4)選取IL-23RTg及相應(yīng)的野生型B6雌性小鼠各4-6只,OVA致敏誘導(dǎo)哮喘模型。提取肺組織,采用HE染色了解炎癥細(xì)胞在肺部的浸潤情況。進(jìn)行肺泡灌洗,計(jì)數(shù)肺泡灌洗液中的細(xì)胞總數(shù),以及采用細(xì)胞甩片及Giemsa染色技術(shù),進(jìn)行細(xì)胞分類的計(jì)數(shù)。RT-PCR法測定肺組織中EPO的表達(dá)。ELISA法測定血清中OVA特異性IgE的表達(dá)及肺引流淋巴結(jié)細(xì)胞和脾細(xì)胞體外經(jīng)OVA再刺激后,Th2和Th17相關(guān)細(xì)胞因子的水平。(5)選取IL-23 KO及相應(yīng)的野生型小鼠,采用流式細(xì)胞術(shù)從野生型小鼠的脾及淺表淋巴結(jié)組織中分選出原始T淋巴細(xì)胞,從IL-23 KO及野生型小鼠的脾組織中分別分選出經(jīng)放射線處理后的抗原呈遞細(xì)胞(APC)。在IL-2,IL-4及抗IFN-γ(anti-IFN-γ)細(xì)胞因子的存在下,naive T細(xì)胞經(jīng)抗CD3 (anti-CD3)及分別來自IL-23 KO及野生型小鼠的APC的重新刺激。5天后,流式細(xì)胞術(shù)測定產(chǎn)生IL-4及IL-17的細(xì)胞比例。ELISA法測定Th2相關(guān)細(xì)胞因子的水平。RT-PCR法測定轉(zhuǎn)錄因子T-bet,GATA-3和Foxp3的表達(dá)。(6)選取IL-23R Tg及相應(yīng)的野生型小鼠,分別從其脾及淺表淋巴結(jié)組織中通過流式分選出原始T淋巴細(xì)胞。在IL-2,IL-4及anti-IFN-γ,伴或不伴重組鼠細(xì)胞因子工L-23的存在下,naiveT細(xì)胞分別經(jīng)anti-CD3及anti-CD28的重新刺激。5天后,流式細(xì)胞術(shù)測定產(chǎn)生IL-4及IL-17的細(xì)胞比例。ELISA法測定Th2相關(guān)細(xì)胞因子的水平。RT-PCR法測定轉(zhuǎn)錄因子T-bet, GATA-3和Foxp3的表達(dá)。 結(jié)果：(1)OVA致敏小鼠的肺部IL-23p19, IL-12p35, IL-12/IL-23p40和IL-23RmRNA的表達(dá)均較未致敏小鼠顯著升高(P0.05)。(2)OVA致敏誘導(dǎo)的哮喘模型中,IL-23 KO小鼠肺部炎癥細(xì)胞的浸潤較野生型小鼠明顯受到了抑制。IL-23KO小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)較野生型小鼠顯著降低(P0.05),其中單核巨嗜細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量均顯著減少(P0.05),淋巴細(xì)胞輕度減少(P0.05)。IL-23 KO小鼠肺部EPO的表達(dá)及血清中IgE的水平均較野生型小鼠顯著降低(P0.05)。IL-23 KO小鼠肺引流淋巴結(jié)細(xì)胞及脾細(xì)胞體外OVA再刺激后,肺引流淋巴結(jié)細(xì)胞IL-5及IL-13的分泌水平較野生型小鼠顯著降低(P0.05),IL-4輕度降低(P0.05),脾細(xì)胞IL-4,IL-5和IL-13的分泌水平均較野生型小鼠顯著降低(P0.05)。而肺引流淋巴結(jié)細(xì)胞及脾細(xì)胞分泌IL-17及IL-17F的水平未見明顯差別。(3)所產(chǎn)生的IL-23R Tg小鼠胸腺IL-23R的表達(dá)水平較野生型小鼠顯著升高,選取其中一組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在Th17條件下,IL-23R Tg小鼠的T細(xì)胞分化較野生型小鼠,加入重組鼠細(xì)胞因子IL-23極大地提高了產(chǎn)生IL-17細(xì)胞的比例；在Thl條件下,IL-23R Tg小鼠的T細(xì)胞分化較野生型小鼠,加入重組鼠細(xì)胞因子IL-23顯著抑制了產(chǎn)生IFN-γ細(xì)胞的比例。(4)OVA致敏誘導(dǎo)的哮喘模型中,IL-23RTg小鼠肺部炎癥細(xì)胞的浸潤較野生型小鼠明顯增加。IL-23RTg小鼠肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)較野生型小鼠顯著升高(P0.05),其中單核巨嗜細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量均顯著增加(P0.05),淋巴細(xì)胞輕度增加(P0.05)。IL-23RTg小鼠肺部EPO的表達(dá)及血清中IgE的水平均較野生型小鼠顯著升高(P0.05)。IL-23R Tg小鼠肺引流淋巴結(jié)細(xì)胞及脾細(xì)胞體外OVA再刺激后,肺引流淋巴結(jié)細(xì)胞及脾細(xì)胞分泌IL-4,IL-5和IL-13的水平均較野生型小鼠顯著增高(P0.05),而其分泌IL-17及IL-17F的水平未見明顯差別。(5)原始T淋巴細(xì)胞在IL-23缺陷的APC活化下,產(chǎn)生IL-4細(xì)胞的比例較野生型APC明顯減少,其分泌的細(xì)胞因子IL-4及IL-5顯著降低(P0.05),IL-13輕度降低(P0.05),同時(shí)轉(zhuǎn)錄因子GATA3的表達(dá)明顯降低(P0.05), T-bet及Foxp3的表達(dá)輕度升高(P0.05)。(6)來自IL-23R Tg小鼠的原始T淋巴細(xì)胞在anti-CD3及anti-CD28的刺激下,增加重組鼠細(xì)胞因子IL-23使產(chǎn)生IL-4的細(xì)胞比例明顯增加,其分泌的細(xì)胞因子IL-4及IL-13顯著增加(P0.05),IL-5輕度增加(P0.05)。來自野生型小鼠的原始T淋巴細(xì)胞在重組鼠細(xì)胞因子IL-23的作用下,僅IL-13的分泌顯著增加(P0.05)。同時(shí),在IL-23的刺激下,僅IL-23R Tg小鼠T細(xì)胞引起轉(zhuǎn)錄因子GATA3的表達(dá)顯著增加(P0.05)。 結(jié)論：IL-23-IL-23R信號(hào)參與了哮喘過敏性氣道炎癥的發(fā)生,它不僅可以通過維持IL-17的產(chǎn)生來形成嗜中性粒細(xì)胞炎癥,更重要的是可能通過直接調(diào)節(jié)Th2細(xì)胞的分化來影響過敏性氣道炎癥。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R562.25
【圖文】：

1.過敏原激發(fā)下小鼠肺IL一23和IL一23R的表達(dá)(1)OVA致敏小鼠的肺部IL一23p19，IL一12p35和IL一12/IL一23p40的表達(dá)均較未致敏小鼠顯著升高，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(見圖3)u只份盆;dx節(jié)eIO匕圖3小鼠肺部IL一23pl9，IL一12p35和IL一12/IL一 23p40mRNA的表達(dá)注 :*P<0.05(2)OVA致敏小鼠的肺部幾一23R的表達(dá)較未致敏小鼠顯著升高，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(見圖4)10u。一.的。﨎dx.三節(jié)巴劣比的N。已NonOVA圖4小鼠肺部IL一 23RmRNA的表達(dá)注 :*P<0.05

注 :*P<0.05(2)OVA致敏小鼠的肺部幾一23R的表達(dá)較未致敏小鼠顯著升高，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(見圖4)10u。一.的。﨎dx.三節(jié)巴劣比的N。已NonOVA圖4小鼠肺部IL一 23RmRNA的表達(dá)注 :*P<0.05

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本文編號(hào)：2724099