【摘要】：下呼吸道感染是嚴重危害人類健康的傳染性疾病之一,依照不同的臨床表征,可劃分為多種類型,包括社區(qū)獲得性肺炎、醫(yī)院獲得性肺炎、呼吸機相關(guān)性肺炎等,且不同的疾病類型感染的病原譜有各自的特點,同時又存在廣泛的交叉。因此,下呼吸道感染病原體的準確鑒定,對診治和臨床用藥具有重要意義。本論文以多重PCR技術(shù)為基礎(chǔ),結(jié)合多色探針熔解曲線分析技術(shù)和媒介探針技術(shù),建立一種快速、準確、簡便、成本低的鑒定方法,以滿足臨床的檢測需求。第一章,綜述了下呼吸道感染的背景、流行病學(xué)、病原體之間的相互作用、耐藥情況,隨后比較了幾種用于下呼吸道感染的常見檢測方法,評價其各自的優(yōu)缺點,在此基礎(chǔ)上提出了本論文主要研究目標和方法。第二章,我們結(jié)合多重PCR技術(shù)、多色探針熔解曲線分析技術(shù)和媒介探針技術(shù),設(shè)計下呼吸道多重媒介探針熔解曲線分析檢測體系,用于定性檢測感染下呼吸道常見的病原體,包含18種病原菌和1個耐藥基因。同時設(shè)計實驗考察體系的特異性、重復(fù)性、靈敏度、混合感染識別能力等,最后用臨床標本進行了評價。第三章,建立的下呼吸道多重媒介探針熔解曲線分析檢測體系,使用質(zhì)粒作為參考品進行體系性能考察。結(jié)果顯示體系特異良好,能準確區(qū)分各個檢測對象,體系重復(fù)性良好(CV0.5%),體系靈敏度可達50拷貝/反應(yīng),個別對象能達5拷貝/反應(yīng),混合感染識別能力最低能識別某一種菌的混合濃度50拷貝/反應(yīng)。后續(xù)對299例臨床標本進行檢測,結(jié)果顯示,標本檢測陽性率為61.87%(185/299),混合感染率21.40%。我們隨機抽取160份樣本進行單重對照體系的逐一檢測,結(jié)果表明,每種病原體兩者檢測方法的一致率均大于95%,證實了本體系的可靠性和準確性。
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R56
【圖文】：

第一章前言逡逑而我國兒童肺炎發(fā)病率介于兩者之間。相關(guān)資料表明，促成我國兒童死亡的主要逡逑原因是肺炎，１９９１年統(tǒng)計的五歲以下兒童因肺炎而死亡的人數(shù)是美國的１０倍以逡逑上［７］。盡管近幾年死亡人數(shù)有所下降，但是有關(guān)兒童肺炎死亡率和發(fā)病率等一些逡逑流行病學(xué)的數(shù)據(jù)依然不全面。對醫(yī)學(xué)界來講，下呼吸道感染病原體的準確鑒定依逡逑然是個急需解決的問題。逡逑

稱之為媒介子，３＇端則是與靶序列特異的雜交的一段區(qū)域，用于特異識別靶序逡逑列，并且對媒介子的３＇端進行氨基的封閉修飾，阻止其延伸。通用熒光探針實逡逑質(zhì)即為分子信標探針的結(jié)構(gòu)，如圖１－２邋Ｂ所示，它具有以下特點：（１）在我們逡逑設(shè)定的條件下，軟件預(yù)測只形成一種信標結(jié)構(gòu)；（２）邋５＇端標記熒光基團（ＦＭＡ、逡逑ＲＯＸ、ＨＥＸ、ＣＹ５）邋，邋３＇端根據(jù)熒光基團的不同，相應(yīng)標記上ＢＨＱ１或ＢＨＱ２逡逑的泮滅基團的標記；（３）通用熒光探針與體系內(nèi)任意檢測對象的序列都不會產(chǎn)逡逑生雜交而形成熔解；（４）媒介子序列是與通用熒光探針環(huán)上的某段序列互補。逡逑Ａ、Ｍｅｄｉａｔｏｒ邋ｐｒｏｂｅ邐Ｂ％邋Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ邋ｐｒｏｂｅ逡逑邐邐通用序列（媒介子）邐ｒ＾１Ｊ１逡逑邐靶特異曑（

本文編號：2720237