【摘要】：氣管插管、氣管切開、手術(shù)等致氣道損傷的醫(yī)源性因素以及氣管支氣管結(jié)核、良性腫瘤、外傷等均是良性氣管狹窄的常見原因,可引起氣道炎癥和肉芽組織、疤痕組織增生,造成嚴(yán)重的氣道狹窄,甚至危及生命。雖然有氣管球囊擴(kuò)張、熱消融切除、支架置入等呼吸介入治療手段,很多患者在介入治療后,仍會(huì)出現(xiàn)肉芽疤痕組織增生,形成再狹窄,復(fù)發(fā)率高達(dá)40-70%,是臨床大夫面臨的挑戰(zhàn)性難題。因此,探討氣管損傷性氣管狹窄的致病機(jī)制及其防治措施,具有重要的臨床意義。本課題組前期的研究表明,兔氣管損傷性氣管狹窄模型中存在炎癥及纖維化損傷,十四元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素紅霉素(EM)等藥物可減輕氣管損傷性氣管狹窄,具體機(jī)制尚不明確。近年研究表明,III型組蛋白去乙�；窼IRT1在抑制炎癥和臟器纖維化中起到重要作用,可能成為某些炎癥和纖維化疾病的治療靶點(diǎn)。然而,鮮有關(guān)于SIRT1在氣管損傷性氣管狹窄中的報(bào)道,SIRT1是否在氣管損傷性氣管狹窄的發(fā)病中起到一定作用?EM是否通過影響SIRT1表達(dá),發(fā)揮對(duì)氣管損傷性氣管狹窄的抑制作用?仍有待研究。本研究旨在初步探討氣管損傷性氣管狹窄的發(fā)病機(jī)制及調(diào)控,在組織細(xì)胞水平觀察SIRT1在氣管狹窄組織以及氣管成纖維細(xì)胞中的表達(dá),進(jìn)一步探討EM及布地奈德(BUD)在氣管損傷性氣管狹窄中的防治作用及機(jī)理,為此,本研究開展如下:第一部分兔氣管損傷性氣管狹窄中炎癥及纖維化變化及藥物干預(yù)的研究目的:探討兔氣管損傷性氣管狹窄模型中炎癥及纖維化指標(biāo)的變化趨勢,研究EM及聯(lián)合BUD藥物組合對(duì)氣管損傷性氣管狹窄的干預(yù)作用。方法:24只新西蘭大耳白兔隨機(jī)分為4組(各組n=6),其中A組為模型組,B組為紅霉素組,C組為布地奈德組,D組為聯(lián)合用藥組。每組均行氣管切開,以尼龍刷損傷氣管粘膜及縫合,建立氣管損傷性氣管狹窄模型。除A組外,其余各組分別在術(shù)前1周至術(shù)后第9日,予相應(yīng)藥物處理,術(shù)后第10天采集血標(biāo)本,應(yīng)用ELISA法檢測TGF-β1、VEGF、IL-6、IL-8血清濃度。收集氣管組織行HE染色,觀察各組氣管組織病理改變及測量氣管狹窄率。行氣管免疫組織化學(xué)染色觀察COL-I、COL-III表達(dá)情況。結(jié)果:B組及D組血清TGF-β1、VEGF、IL-1、IL-8均顯著低于A組(均P0.05)。A~D組氣管內(nèi)可見不同程度肉芽組織增生致氣管狹窄,其中A組管腔狹窄率為(53.3±4.4)%,B組~D組氣管狹窄率分別為(24.3±4.4)%,(47.8±6.5)%、(15.6±2.0)%,其中B組和D組氣管狹窄率顯著低于A組(均P0.05)。各組COL-I、COL-III均有表達(dá),B組及D組COL-I、COL-III蛋白表達(dá)量顯著低于A組(P0.05)。結(jié)論:兔氣管損傷性氣管狹窄中存在明顯的炎癥及纖維化損傷,EM可減輕氣管損傷性氣管狹窄,聯(lián)合BUD效果更佳,可能與減輕氣管損傷后的炎癥反應(yīng)及纖維化進(jìn)程有關(guān)。第二部分SIRT1在兔氣管損傷性氣管狹窄組織中表達(dá)及藥物干預(yù)的研究目的:檢測兔氣管損傷性氣管狹窄組織中SIRT1的表達(dá)情況以及及應(yīng)用EM或聯(lián)合BUD對(duì)SIRT1表達(dá)干預(yù)的變化。方法:24只新西蘭大耳白兔隨機(jī)分為4組(各組n=6),其中A組為模型組,B組為紅霉素組,C組為布地奈德組,D組為聯(lián)合用藥組。每組均行氣管切開,以尼龍刷損傷氣管粘膜及縫合建立氣管損傷性氣管狹窄模型。除A組外,其余各組分別在術(shù)前1周至術(shù)后第9日,予相應(yīng)藥物處理,術(shù)后第10天收集氣管組織行SIRT1免疫組化染色,觀察各組SIRT1表達(dá)情況。結(jié)果:A組氣管狹窄組織中SIRT1少量表達(dá),同A組相比,B組及D組SIRT1表達(dá)顯著增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:EM及聯(lián)合BUD能提升氣管狹窄組織中SIRT1的表達(dá),EM減輕氣管損傷性氣管狹窄的炎癥及纖維化進(jìn)程,可能部分是通過增強(qiáng)SIRT1表達(dá)而起作用。第三部分EM減輕氣管成纖維細(xì)胞炎癥及纖維化機(jī)制的初步探討目的:探討EM聯(lián)合BUD對(duì)TGF-β1刺激下人氣管成纖維細(xì)胞炎癥及纖維化指標(biāo)的影響及可能作用機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)人氣管成纖維細(xì)胞,分為正常對(duì)照(NC)組,TGF-β1組,EM 1mg/L(EM1)組,EM 10mg/L(EM10)組,BUD組,EM10+BUD組。TGF-β1組應(yīng)用10ng/m L的TGF-β1刺激,EM1組及EM10組分別為TGF-β1刺激前2小時(shí)預(yù)先給予濃度為1mg/L及10mg/L的紅霉素干預(yù),BUD組為TGF-β1刺激前2小時(shí)應(yīng)用濃度為10n M布地奈德干預(yù),EM10+BUD組為用TGF-β1刺激前2小時(shí)應(yīng)用10mg/L的紅霉素聯(lián)合10n M布地奈德聯(lián)合干預(yù),應(yīng)用ELISA評(píng)估TGF-β1刺激后及用藥干預(yù)后24小時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)上清炎癥因子IL-6,IL-8變化情況,應(yīng)用RT-PCR檢測各組COL-1、IL-6表達(dá)情況,應(yīng)用RT-PCR及免疫熒光檢測各組SIRT1表達(dá)情況。結(jié)果:1.與NC組相比,TGF-β1組細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-6、IL-8顯著升高;EM1組,EM10組,BUD組及EM10+BUD組均能顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-6、IL-8濃度(P0.05),其中EM1組和EM10組無明顯差異,而EM10+BUD組顯著優(yōu)于單用EM或BUD組(P0.05)。2.與NC組相比,TGF-β1組COL-1、IL-6的m RNA顯著升高,SIRT1的m RNA水平無顯著變化,EM1組、EM10組、EM10+BUD組均能顯著提升SIRT1表達(dá)(P0.05);EM1組、EM10組、BUD組、EM10+BUD組均能顯著降低COL-1、IL-6的表達(dá)(P0.05),其中EM10+BUD組效果最佳。3.TGF-β1組SIRT1免疫熒光表達(dá)較NC組無明顯變化,EM10組,EM10+BUD組SIRT1免疫熒光表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)論:1.EM減少TGF-β1作用下氣管成纖維細(xì)胞IL-6、IL-8以及COL-1的表達(dá),減輕炎癥及纖維化,EM聯(lián)合BUD有更佳的協(xié)同效果。EM可能通過提升SIRT1發(fā)揮上述干預(yù)作用。2.EM聯(lián)合糖皮質(zhì)激素有望成為氣管損傷性氣管狹窄及再狹窄的有效輔助治療藥。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R562.12
【圖文】：

圖 1-1 各組兔血清中炎癥因子濃度Figure 1-1 The serum concentratioins of inflammatory cytokines in different group*compared the same factor with Agroup, P＜0.05.# compared the same factor with B group, P＜0.02 各組兔氣管組織肉眼觀察及 HE 染色情況肉眼見各組兔氣管管腔存在不同程度狹窄，肉芽組織增生，D 組肉組織增生及管腔狹窄明顯減輕（圖 1-2）。組織病理學(xué)切片 HE 染色提示A 組氣管狹窄段可見上皮細(xì)胞脫落，局部鱗狀上皮化生，粘膜下明顯肉組織增生，可見單核淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、纖維母細(xì)胞浸潤及小血增生，而其余三組肉芽組織增生情況均有所減輕，D 組僅有少許粘膜下生，炎癥細(xì)胞浸潤及新生血管均明顯減少（圖 1-3）。

圖 1-1 各組兔血清中炎癥因子濃度Figure 1-1 The serum concentratioins of inflammatory cytokines in different groupcompared the same factor with Agroup, P＜0.05.# compared the same factor with B group, P＜0.各組兔氣管組織肉眼觀察及 HE 染色情況肉眼見各組兔氣管管腔存在不同程度狹窄，肉芽組織增生，D 組肉織增生及管腔狹窄明顯減輕（圖 1-2）。組織病理學(xué)切片 HE 染色提組氣管狹窄段可見上皮細(xì)胞脫落，局部鱗狀上皮化生，粘膜下明顯肉織增生，可見單核淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、纖維母細(xì)胞浸潤及小血生，而其余三組肉芽組織增生情況均有所減輕，D 組僅有少許粘膜下，炎癥細(xì)胞浸潤及新生血管均明顯減少（圖 1-3）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 徐明鵬;李莉華;甘羅曼;柳廣南;甘敬華;覃恩愿;孟曉燕;肖陽寶;;紅霉素預(yù)防兔氣管損傷后氣管狹窄研究[J];國際呼吸雜志;2017年11期

2 李莉華;徐明鵬;甘羅曼;黎雨;梁毅林;李文濤;覃恩愿;甘敬華;柳廣南;;小劑量紅霉素對(duì)氣管損傷后肉芽組織增生的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2017年10期

本文編號(hào)：2719838