【摘要】： 目的:急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(acute lung injury /acute respiratory distress syndrome, ALI/ARDS)是指由心源性以外的各種肺內(nèi)外致病因素導(dǎo)致的急性、進(jìn)行性缺氧性呼吸衰竭。ALI和ARDS具有性質(zhì)相同的病理生理改變,嚴(yán)重的ALI被定義為ARDS。ALI/ARDS的病理基礎(chǔ)是由多種炎癥細(xì)胞(巨噬細(xì)胞、嗜中性細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等)介導(dǎo)的肺臟局部炎癥反應(yīng)和炎癥反應(yīng)失控所致的肺毛細(xì)血管膜損傷。ALI/ARDS的高危因素有:直接肺損傷因素,包括:嚴(yán)重肺感染、胃內(nèi)容物吸入、肺挫傷等等;間接肺損傷因素,包括:膿毒癥、嚴(yán)重的非胸部創(chuàng)傷、重癥胰腺炎等等。在臨床上因胃內(nèi)容物誤吸引起的ALI/ARDS占30%左右,胃內(nèi)容物吸入肺內(nèi)引起急性呼吸窘迫綜合征是臨床所見的嚴(yán)重肺部并發(fā)癥,在行氣管插管或氣管切開時(shí)也會(huì)增加吸入的發(fā)生率。 在ARDS的發(fā)生發(fā)展中,促炎性細(xì)胞因子和抗炎性細(xì)胞因子的共同作用介導(dǎo)著炎癥的發(fā)生和發(fā)展。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí),前列腺素E1、肺表面活性物質(zhì)、溴環(huán)己胺醇等對(duì)鹽酸吸入性肺損傷有一定的保護(hù)作用。盡管目前對(duì)其治療措施有很大進(jìn)展,但ARDS的病死率仍居高不下,約在50%左右,治療方面亟待取得重大突破。糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids, GCs)為一種多途徑抗炎藥物,但是其在ARDS中的臨床應(yīng)用一直存在爭議,不同原因誘發(fā)的ARDS激素治療效果差異懸殊,幾十年來一直令臨床醫(yī)師倍感困惑。糖皮質(zhì)激素具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫功能,同時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長和凋亡有重要的調(diào)節(jié)作用,糖皮質(zhì)激素的這些作用都是由糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor, GR)介導(dǎo)的,而作為蛋白質(zhì)的GR則是通過細(xì)胞內(nèi)的基因組機(jī)制由糖皮質(zhì)激素受體mRNA翻譯而來。由于ALI/ARDS的病因復(fù)雜,不同病因的ALI/ARDS在病理學(xué)和病理生理學(xué)上有許多相似之處,但其病情的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的差別很大,所以對(duì)糖皮質(zhì)激素治療的反應(yīng)性差異也極大。 我們建立了鹽酸(Hydrochloric acid, HCl)吸入的“一次打擊”和靜脈應(yīng)用脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)后再合并HCl吸入的“二次打擊”ALI動(dòng)物模型,比較肺組織上糖皮質(zhì)激素受體mRNA表達(dá)水平,血清細(xì)胞因子中腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1beta, IL-1β)、白介素-4(interleukin-4, IL-4 )、白介素-10(interleukin-10, IL-10)的水平及地塞米松(Dexamethasone, DEX)干預(yù)后對(duì)其水平的影響,假設(shè)經(jīng)糖皮質(zhì)激素干預(yù)后兩種動(dòng)物模型可能存在一定的差別,探討糖皮質(zhì)激素干預(yù)對(duì)不同誘因?qū)е碌募毙苑螕p傷大鼠的糖皮質(zhì)激素受體mRNA和細(xì)胞因子改變影響的差異與機(jī)理,為臨床上選擇性應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療由于肺內(nèi)外復(fù)合因素導(dǎo)致的ARDS,特別是為胃液吸入相關(guān)性ARDS的治療提供理論依據(jù)。 方法:試驗(yàn)用雄性SD大鼠48只,體重250-300g,隨機(jī)分為6組:①NS組,②HCl組,③LPS+HCl組,④NS+DEX組,⑤HCl+DEX組,⑥LPS+HCl+DEX組,每組8只動(dòng)物。④、⑤、⑥三組為激素干預(yù)組。造模結(jié)束后立即腹腔注射DEX (2mg/kg)。①、④二組為對(duì)照組,尾靜脈注射+氣管內(nèi)滴入NS;②、⑤二組為HCl組,氣管內(nèi)滴入pH值為1.8的HCl(2ml/kg);③、⑥二組為LPS+HCl組,尾靜脈同部位注入LPS(4mg/kg)4小時(shí)之后氣管內(nèi)再滴入pH值為1.8的HCl(0.5ml/kg)。 復(fù)制模型后4小時(shí),每組8只動(dòng)物,10%水合氯醛腹腔注射麻醉(4ml/kg ),經(jīng)開胸心臟抽血處死動(dòng)物,收集血液,離心(3000rpm,4℃,10min),吸取上清,-80℃保存,檢測血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的含量。用兩把止血鉗鉗夾右主支氣管根部,在兩鉗間切斷主支氣管取下右肺,其中稱取右肺前葉100mg保存于-80℃冰箱,用于肺組織總RNA的提取,再行RT-PCR;右肺下葉用10%的中性福爾馬林液固定,常規(guī)石蠟包埋做病理切片,觀察肺組織病理形態(tài)學(xué)變化并評(píng)分;其余的兩葉用于濕重/干重(wet weight/dry weight, W/D )的測定(80℃,48h)。左肺經(jīng)氣管插管行左肺支氣管肺泡灌洗,取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),離心(1200rpm,4℃,10min),吸取上清,-80℃保存,檢測BALF中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的含量和蛋白水平。細(xì)胞沉淀懸浮于等量生理鹽水中,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。 結(jié)果:(1) HCl組和LPS+HCl組BALF中細(xì)胞總數(shù)高于NS組(P0.01)。HCl+DEX組和HCl組細(xì)胞總數(shù)無明顯差異。LPS+HCl+DEX組和LPS+HCl組細(xì)胞總數(shù)無明顯差異。HCl組和LPS+HCl組BALF中PMN%高于NS組(P0.01)。LPS+HCl+DEX組較LPS+HCl組BALF中PMN%降低(P0.01),HCl+DEX組和HCl組PMN%無明顯差異。(2) HCl組和LPS+HCl組肺組織GRmRNA/β-actinmRNA顯著低于NS組(P0.01)。LPS+HCl+DEX組GRmRNA/β-actinmRNA較LPS+HCL組升高(P0.05)。HCl+DEX組和HCl組無明顯差異。(3) HCl組和LPS+HCl組肺W/D和BALF中蛋白含量均顯著高于NS組(P0.05)。LPS+HCl+DEX組肺W/D較LPS+HCl組降低(P0.05)。HCl+DEX組BALF中蛋白含量較HCl組有明顯降低(P0.05)。(4) HCl組和LPS+HCl組血清和BALF中TNF-α均較NS組有明顯升高(P0.01)。LPS+HCl+DEX組血清和BALF中TNF-α較LPS+HCl組有明顯降低(P0.05)。所有組血清中IL-1β含量未測得。HCl組和LPS+HCl組BALF中IL-1β均較NS組有明顯升高(P0.05)。(5) HCl組和LPS+HCl組血清和BALF中IL-4、IL-10含量均顯著高于NS組(P0.05)。LPS+HCl+DEX組和LPS+HCl組血清和BALF中IL-4含量無顯著差異。LPS+HCl+DEX組血清中IL-10較LPS+HCl組有明顯升高(P0.05)。HCl+DEX組BALF中IL-10較HCl組有明顯升高(P0.01)。LPS+HCl+DEX組BALF中IL-10較LPS+HCl組有明顯升高(P0.01)。 光鏡(LM)下結(jié)果表明:HCl組和LPS+HCl組肺體積增大,明顯水腫,肺表面可見點(diǎn)灶狀出血,光鏡下觀察均可見肺間質(zhì)及肺泡腔水腫、滲出、出血等病理變化,病理積分無明顯差異。 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x|-)±s)表示。GCs干預(yù)組與非GCs干預(yù)組比較用t檢驗(yàn),不同模型組組間比較用單因素方差分析(One way ANOVA),P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1氣管內(nèi)滴入HCl的“一次打擊”和靜脈注射LPS再氣管內(nèi)滴入HCl的“二次打擊”均可造成大鼠的急性肺損傷,成功地復(fù)制了兩種不同病因所致ALI模型。 2兩個(gè)模型組在肺病理、蛋白滲漏、細(xì)胞因子及糖皮質(zhì)受體mRNA水平均存在一定的差異,說明ALI的病理生理過程和致病因素是緊密相連的。 3糖皮質(zhì)激素的干預(yù)效果和病因是密切相關(guān)的,它能減輕靜脈注射LPS再氣管內(nèi)滴入HCl致ALI的肺部炎癥性損傷,但對(duì)單純較大量HCl吸入致ALI無明顯改善作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R563.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2719555