【摘要】： 目的：阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(Obstructive sleep apnea-hyponea syndrome，OSAHS)是一種常見(jiàn)的慢性睡眠呼吸疾患，慢性間歇性缺氧是OSAHS患者特征性的病理生理改變，OSAHS對(duì)人們健康的危害突出表現(xiàn)為它的高患病率和其對(duì)全身多系統(tǒng)、多器官的影響。由于OSAHS患者夜間反復(fù)呼吸暫停需較長(zhǎng)時(shí)間才可能導(dǎo)致各系統(tǒng)較嚴(yán)重并發(fā)癥，故在人類進(jìn)行OSAHS發(fā)病機(jī)制的前瞻性研究比較困難，且臨床研究存在許多干擾因素，使得很多研究在人體上進(jìn)行有一定的局限性，所以研制OSAHS的動(dòng)物模型對(duì)于闡明OSAHS對(duì)機(jī)體的影響及其機(jī)制是非常重要的。本實(shí)驗(yàn)在臨床研究的同時(shí)，旨在建立理想的慢性間歇性缺氧大鼠模型，研究OSAHS對(duì)機(jī)體心、腦、血管系統(tǒng)的影響及其可能機(jī)制，以期為OSAHS臨床治療及并發(fā)癥的防治提供必要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1．慢性間歇性缺氧SD大鼠模型的制備：健康雄性3月齡SD大鼠22只，隨機(jī)選取6只大鼠進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，并在間歇缺氧艙中行血氧檢測(cè)；然后將余下大鼠隨機(jī)分為2組，即空白對(duì)照(UC)組，慢性間歇低氧(CIH)組，每組8只。所有大鼠先飼養(yǎng)一周，使其適應(yīng)新環(huán)境。IH組大鼠每天9AM—5PM放入常壓間歇低氧艙中，給予循環(huán)充入氮?dú)夂涂諝猓看窝h(huán)為8分鐘，間歇缺氧艙內(nèi)氧濃度波動(dòng)于8.5—21％，UC大鼠不予任何處理。實(shí)驗(yàn)周期為4周。 2．功能性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)：①大鼠尾動(dòng)脈血壓測(cè)量(尾套管法)：測(cè)壓均在上午進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前基礎(chǔ)血壓測(cè)量在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的前一天進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)期間每周測(cè)量血壓一次，每次測(cè)壓結(jié)束后，當(dāng)日仍給予7小時(shí)間歇低氧干預(yù)。大鼠尾動(dòng)脈血壓測(cè)量方法參照大鼠尾壓測(cè)量?jī)x使用說(shuō)明書。②學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)定：實(shí)驗(yàn)4周后應(yīng)用Morris水迷宮系統(tǒng)測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。通過(guò)測(cè)試大鼠在Morris水迷宮中平均潛伏期來(lái)評(píng)估其學(xué)習(xí)能力，穿越平臺(tái)次數(shù)及跨越目標(biāo)象限時(shí)間占總時(shí)間百分比來(lái)評(píng)估其記憶能力。 3．形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)結(jié)束常規(guī)處死大鼠，觀察下列指標(biāo)變化：心、腦、肺、腎、血管的常規(guī)病理改變(HE染色)及超微結(jié)構(gòu)改變；心肌毛細(xì)血管密度(capillary density，CD)；大鼠海馬CA1區(qū)IGF-1蛋白及心、肺、腎、血管的VEGF表達(dá)情況(免疫組化，S-P法)。 結(jié)果：1．慢性間歇性缺氧下血?dú)饨Y(jié)果：缺氧最低點(diǎn)時(shí)大鼠動(dòng)脈血氧分壓20.9mmhg～29.7mmhg，最低血氧飽和度范圍為31.2％～58.3％，恢復(fù)艙內(nèi)氧濃度至21％后，測(cè)得動(dòng)脈血氧分壓71.6mmhg～106.4mmhg，動(dòng)脈血氧飽和度為92.2％～97.4％，符合人類重度阻塞型睡眠呼吸暫停綜合征(SaO_2＜80％)的血氧飽和度診斷標(biāo)準(zhǔn)。 2．生理功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①．大鼠尾動(dòng)脈收縮壓檢測(cè)結(jié)果：CIH大鼠收縮壓逐漸升高，從第2周開(kāi)始顯著升高，第2，3，4周時(shí)其收縮壓分別升高了13.75mmHg(p＜0.01)，22.25mmHg(p＜0.01)和29.87mmHg(p＜0.01)。實(shí)驗(yàn)后兩組大鼠比較，第1周收縮壓無(wú)顯著差異，第2周后CIH大鼠較UC大鼠收縮壓明顯升高(p＜0.05或p＜0.01)。②．Morris水迷宮學(xué)習(xí)成績(jī)(定位航行實(shí)驗(yàn))：第5天訓(xùn)練結(jié)束時(shí)，CIH組大鼠逃避潛伏期明顯長(zhǎng)于UC組，兩組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。Morris水迷宮記憶成績(jī)：實(shí)驗(yàn)組的穿越平臺(tái)次數(shù)[(1.38±0.92次)較正常組顯著減少[(3.75±1.04)，p＜0.01]；實(shí)驗(yàn)組在跨越目標(biāo)象限時(shí)間占整個(gè)游泳的時(shí)間百分率(20.52±3.41)也較正常組顯著減少[(39.89±5.63)，p＜0.01]。 3．形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：①大鼠心、腦、肺、腎、血管組織均出現(xiàn)明顯慢性缺氧改變：②IH大鼠海馬CA1區(qū)胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(Insulin-like Growth Factor-1，IGF-1)蛋白較UC組表達(dá)明顯減少，大鼠海馬CA1區(qū)IGF-1表達(dá)和認(rèn)知功能損害程度呈負(fù)相關(guān)(r=0.867，p＜0.01)。③大鼠心、腦、肺、腎、血管組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達(dá)較UC組表達(dá)明顯增加； 結(jié)論：1．本實(shí)驗(yàn)建立的慢性間歇低氧大鼠模型是一種成熟的OSAHS動(dòng)物模型，可滿足OSAHS基礎(chǔ)研究的需要。 2．慢性間歇性低氧可導(dǎo)致大鼠心肌細(xì)胞損傷；CIH引發(fā)VEGF表達(dá)的上調(diào)，一方面促進(jìn)心肌缺氧后的代償性改變，另一方面可能促進(jìn)動(dòng)脈粥樣斑塊的發(fā)生發(fā)展。 3．慢性間歇性低氧可導(dǎo)致大鼠持續(xù)性血壓升高；并可引起腎小動(dòng)脈血管管壁增厚；其增厚的程度與VEGF表達(dá)上調(diào)相關(guān)。 4．慢性間歇性低氧可導(dǎo)致大鼠認(rèn)知功能下降；其下降的程度與海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的損害程度相關(guān)；IGF-1對(duì)海馬神經(jīng)元可能具有保護(hù)作用。 研究背景與研究目的：阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)是有潛在危險(xiǎn)性并可致心腦血管并發(fā)癥及多器官損害的臨床綜合征。目前已證實(shí)OSAHS是高血壓病、冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可導(dǎo)致心衰、心律失常、心絞痛、心肌梗死和夜間猝死。有研究認(rèn)為老年人中OSAHS發(fā)病率更高。本研究旨在通過(guò)前瞻性的隊(duì)列研究探討在老年冠心病人群中OSAHS對(duì)于心腦血管死亡率的影響及經(jīng)鼻持續(xù)氣道正壓通氣呼吸機(jī)(nCPAP)治療對(duì)其長(zhǎng)期預(yù)后的影響。 方法：應(yīng)用前瞻性隊(duì)列研究老年冠心病合并OSAHS組3年隨訪的心腦血管死亡率與對(duì)照組和nCPAP治療組的差異。選取2002年3月至2004年10月擬行多導(dǎo)睡眠圖檢查的我科住院老年冠心病病人196例，進(jìn)行平均1112±379天的追蹤隨訪。最終179例進(jìn)入研究，失訪17例，失訪率8.7％；依據(jù)多導(dǎo)睡眠圖檢查結(jié)果，分為觀察組(AHI≥15／h，即中、重度OSAHS患者)和對(duì)照組(AHI＜15／h，即輕度OSAHS患者和非OSAHS患者)，依據(jù)病人自己意愿從觀察組中選取33例進(jìn)行長(zhǎng)期nCPAP治療(治療中平均戴機(jī)5小時(shí)／晚以上)。 結(jié)果：2006年3月隨訪截止，共21名病人死于心腦血管事件或接受冠脈重建術(shù)(包括冠脈搭橋術(shù)和冠脈支架植入術(shù))，其中觀察組17人，對(duì)照組4人，治療組0人。以分組、年齡、身高、體重、體重指數(shù)、嗜睡評(píng)分等為自變量進(jìn)行COX回歸生存分析，生存率僅與年齡和分組因素有關(guān)，控制年齡因素的分層COX回歸生存分析，生存率僅與分組因素有關(guān)，觀察組心腦血管死亡率(20.5％)明顯高于對(duì)照組(6.4％)和治療組(0％)。 結(jié)論：合并OSAHS的老年冠心病人群較一般老年冠心病人群的心腦血管死亡率明顯增高，經(jīng)nCPAP治療的OSAHS老年冠心病患者的心腦血管死亡率明顯低于未經(jīng)治療的合并OSAHS的老年冠心病人群，與一般老年冠心病人群的心腦血管死亡率沒(méi)有差異。OSAHS和年齡是老年冠心病患者的心腦血管死亡風(fēng)險(xiǎn)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R541.4;R56
【圖文】：

Morris水迷宮(中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院精神病學(xué)研究所制備)間歇低氧艙:由有機(jī)玻璃艙、HBO一2B型控氧儀、氮?dú)鈨?chǔ)氣瓶和排氣裝置四個(gè)部分組成。(見(jiàn)圖1)圖1間歇低氧艙與氣體輸送程控儀5實(shí)驗(yàn)氣體氮?dú)?純度>99.99%)(長(zhǎng)沙萍湖制氧廠)2.實(shí)驗(yàn)方法2.1慢性間歇性低氧SD大鼠模型的制備實(shí)驗(yàn)期間，每天gAM一SPM將CIH組大鼠置于間歇低氧艙內(nèi)，向艙內(nèi)循環(huán)充入氮?dú)夂团懦龌旌峡諝猓看窝h(huán)8分鐘，即4分鐘充入氮?dú)猓S持艙內(nèi)氧氣最低

博士學(xué)位論文基礎(chǔ)研究第二章材料與方法濃度達(dá)8.5%，維持時(shí)間1分鐘，隨后2分鐘排出艙內(nèi)混合空氣，使艙內(nèi)氧濃度恢復(fù)到21%維持1分鐘，至下一循環(huán)。艙內(nèi)氧濃度變化見(jiàn)圖2。UC組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，不予任何處理。每天除實(shí)驗(yàn)時(shí)間外，2組大鼠生活環(huán)境和飼養(yǎng)條件均相同。動(dòng)脈血?dú)鈾z測(cè)我們測(cè)定了6只大鼠在此間歇低氧條件下的動(dòng)脈血氧飽和度變化情況，方法為:先將大鼠用苯巴比妥鈉(100mg/kg)腹腔注射麻醉，放入間歇缺氧艙中，約巧分鐘后進(jìn)入麻醉狀態(tài)，在缺氧艙內(nèi)將其腹部朝上固定于解剖臺(tái)上，局部消毒后，切開(kāi)腹部皮膚，分離腹主動(dòng)脈，其中3只在缺氧艙內(nèi)氧濃度降至最低點(diǎn)30秒內(nèi)直視下抽取腹主動(dòng)脈血行血?dú)夥治觯硗?只大鼠在循環(huán)充氣過(guò)程中當(dāng)缺氧艙內(nèi)氧濃度恢復(fù)至21%時(shí)同樣方法抽取。2.2功能性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)2.2.1大鼠尾壓測(cè)量?jī)x測(cè)量血壓方法(尾套管法)測(cè)壓均在上午進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前基礎(chǔ)血壓測(cè)量在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的前一天進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)期間每周測(cè)量血壓一次

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6 黃天風(fēng),黃

本文編號(hào)：2715414