【摘要】：目的探討IL-19對(duì)哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖及ASMCs上ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2表達(dá)水平的影響。方法健康雄性Wistar大鼠20只,體重均約250g,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,分為兩組。通過(guò)對(duì)大鼠進(jìn)行霧化卵清蛋白,制備哮喘模型大鼠。提取哮喘大鼠ASMCs進(jìn)行培養(yǎng),分別以1μg/L、10μg/L、100μg/L IL-19干預(yù)ASMCs生長(zhǎng)。哮喘模型建立后實(shí)驗(yàn)分為兩部分: 1.探討IL-19對(duì)哮喘大鼠ASMCs增殖的作用。取大鼠氣道平滑肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),均以1μg/L、10μg/L、100μg/L IL-19干預(yù)ASMCs生長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)分為5組:(1)對(duì)照組、(2)哮喘組、(3)、(4)、(5)組分別為不同濃度的IL-19干預(yù)組。采用流式細(xì)胞儀、四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)各組ASMCs增殖情況,觀察不同濃度IL-19對(duì)ASMCs增殖的影響。 2.探討IL-19對(duì)哮喘大鼠ASMCsERK信號(hào)傳導(dǎo)通路活性的影響。實(shí)驗(yàn)分組同第一部分。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)ASMCs上ERK1/2 mRNA表達(dá),免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)磷酸化ERK1/2 (p-ERK1/2)蛋白的表達(dá)及定位。 結(jié)果 1.與正常鼠相比,慢性哮喘大鼠ASMCs增殖明顯,處于S期的細(xì)胞比例、A值明顯增高。經(jīng)10μg/L、100μg/L IL-19干預(yù)后,慢性哮喘大鼠ASMCs處于S期的細(xì)胞比例減少,A值亦降低。且兩組間比較有明顯差異。而經(jīng)1μg/L IL-19干預(yù)后,慢性哮喘大鼠ASMCs處于S期的細(xì)胞比例及A值均無(wú)明顯變化。 2.與正常對(duì)照組ASMCs比較,哮喘組ERK mRNA、ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表達(dá)量顯著增高。經(jīng)10μg/L、100μg/L IL-19干預(yù)之后,上述指標(biāo)較哮喘組均顯著降低,且兩組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但仍高于正常對(duì)照組。但經(jīng)1μg/L IL-19干預(yù)之后,ASMCs的ERKmRNA、p-ERK1/2蛋白的表達(dá)量與哮喘組比較,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論 1.一定濃度的IL-19可以抑制慢性哮喘大鼠ASMCs的增殖、下調(diào)慢性哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞上ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2表達(dá)。提示IL-19可能是通過(guò)調(diào)節(jié)ERK基因的轉(zhuǎn)錄及其蛋白的表達(dá)而改變ERK通道的活性進(jìn)而對(duì)氣道平滑肌細(xì)胞的增殖進(jìn)行調(diào)控。
【圖文】：

圖1 氣道壁HE染色法 (250×)Fig.1 The airway HE(250×)圖2 大鼠氣道平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)(100×)Fig.2 Growth form of rat’s ASMCs(100×)圖3 大鼠氣道平滑肌細(xì)胞α-actin 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 (400×)Fig.3 immunocytochemical staining of α-actin in ASMCs (400×)

圖2 大鼠氣道平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)(100×)Fig.2 Growth form of rat’s ASMCs(100×)圖3 大鼠氣道平滑肌細(xì)胞α-actin 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 (400×)Fig.3 immunocytochemical staining of α-actin in ASMCs (400×)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R562.25

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本文編號(hào)：2710463