【摘要】： 研究背景： 急性肺損傷(acute lung injury，ALI)，是因肺部急性炎癥和肺水腫導致的特殊類型呼吸衰竭綜合征，與多種致病因素如肺炎、敗血癥、急性胰腺炎、藥物過量服用等有關，嚴重時稱之為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)。臨床表現(xiàn)為頑固性低氧血癥、呼吸頻數(shù)和呼吸窘迫，胸部X線顯示雙肺彌漫性浸潤影，后期多并發(fā)多器官功能障礙。ALI／ARDS的死亡率很高，到目前為止，仍然沒有治療ALI和ARDS的特效藥物，因此探索治療新靶點，尋找和開發(fā)ARDS治療新藥是研究者的目標。 我們以前的研究表明隱孔菌發(fā)酵物(cryptoporus volvatus ferment substance，CVFS)或從隱孔菌發(fā)酵物中提取的多糖對豚鼠、大鼠過敏性炎癥有明顯的藥理活性。本實驗探討隱孔菌多糖(cryptoporus polysaccharide，CP)能否改善內毒素脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導的小鼠和大鼠ALI，并探索其作用機制。 目的： 研究隱孔菌多糖靜脈灌注對實驗性急性肺損傷的抗炎、抗氧化、減輕肺水腫、改善氧分壓的作用及機制。 方法： 一、隱孔菌多糖對小鼠急性肺損傷的保護作用 脂多糖(LPS)4mg·kg~(-1)氣管內滴入誘導小鼠急性肺損傷。在滴入前10 min和滴入后3h，尾靜脈注射分別給予不同劑量的CP或陽性對照藥地塞米松(dexamethasone，DXM)。LPS誘導6h后測定支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavage fluid，BALF)中的白細胞總數(shù)、中性粒細胞數(shù)、蛋白含量、中性粒細胞髓過氧化酶(myeloperoxidase，MPO)和超氧陰離子自由基(O_2~(●-))；測定肺毛細血管的通透性，測定肺組織勻漿腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素-10(interleukin-10，IL-10)水平；肺組織切片觀察肺組織炎癥浸潤、損傷和水腫等病理改變來研究CP對LPS誘導小鼠急性肺損傷的影響。 二、隱孔菌多糖對大鼠急性肺損傷的保護作用 脂多糖(LPS)5mg·kg~(-1)氣管內滴入誘導大鼠急性肺損傷。在滴入前10min緩慢靜脈恒速(0.5ml·h~(-1))注射不同劑量的CP或陽性對照藥DXM。LPS誘導6h后血氣分析測定動脈血氧分壓(arterial partial pressure of oxygen，P_aO_2)、動脈血二氧化碳分壓(arterial partial pressure of carbon dioxide，P_aCO_2)、動脈血PH值、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中的白細胞總數(shù)、中性粒細胞數(shù)、MPO含量及肺組織切片觀察肺組織炎癥浸潤、損傷和水腫等病理改變來研究CP對LPS誘導大鼠急性肺損傷的影響。 結果： 一、隱孔菌多糖對小鼠急性肺損傷的保護作用 1．CP 1、3、10、30和100mg·kg~(-1)靜脈注射呈劑量依賴性減少BALF中的白細胞總數(shù)，其抑制率分別為10.9、21.5、41.3、48.3和54.3％；呈劑量依賴性減少中性粒細胞數(shù)目，，其抑制率分別為30.7、47.7、65.5、75.3和82.2％。DXM 0.5 mg·kg~(-1)靜脈注射的抑制率分別為60.0％和66.7％，其作用相當于CP的20倍左右。 2．CP 3、10、30和100 mg·kg~(-1)靜脈注射能明顯減少BALF中的總蛋白含量，其抑制率分別為0、9.7、24.7和24.0％；DXM 0.5 mg·kg~(-1)的抑制率為33.8％。 3．CP 1、3、10、30和100mg·kg~(-1)靜脈注射呈劑量依賴性減少伊文氏蘭滲出，其抑制率分別為17.2、41.4、44.7、65.2和67.1％；DXM 0.5 mg·kg~(-1)的抑制率為57.0％，其作用相當于CP的20倍左右。 4．CP 1、3、10、30和100mg·kg~(-1)靜脈注射呈劑量依賴性降低BALF中的MPO水平，其抑制率分別為6.6、6.6、9.2、27.8和36.9％；DXM 0.5mg·kg~(-1)的抑制率為25.1％，CP 30 mg·kg~(-1)作用強度相當于DXM 0.5 mg·kg~(-1)。但CP對BALF中O_2~(●-)水平降低無明顯作用，DXM 0.5 mg·kg~(-1)作用明顯。 5．CP 1、10和30 mg·kg~(-1)靜脈注射呈劑量依賴性降低肺組織勻漿TNF-α水平，其抑制率分別為39.2、43.8和50.9％；10 mg·kg~(-1)組，30 mg·kg~(-1)組與模型組比較有非常顯著的差異(P＜0.01)，DXM 0.5 mg·kg~(-1)靜脈注也能明顯降低TNF-α水平，抑制率為63.3％，CP 30 mg·kg~(-1)與其作用強度接近。CP 1、10和30 mg·kg~(-1)及DXM 0.5 mg·kg~(-1)靜脈注射均不能改變IL-10水平(P＞0.05)。 6．CP 1、10和30 mg·kg~(-1)靜脈注射呈劑量依賴性降低肺濕重／干重比值，其抑制率分別為7.0、8.3和11.0％；30mg·kg~(-1)組與模型組比較有非常顯著的差異(P＜0.01)，DXM 0.5 mg·kg~(-1)靜脈注射也有明顯的抑制作用，抑制率為13.0％，其作用相當于CP的20倍左右。 7．CP 1、3、10、30和100mg·kg~(-1)靜脈注射呈劑量依賴性改善LPS誘導的肺組織間隙大量中性粒細胞浸潤和肺水腫現(xiàn)象。 二、隱孔菌多糖對大鼠急性肺損傷的保護作用 1．CP 10和30 mg·kg~(-1)緩慢靜脈恒速注射能明顯改善LPS誘導的大鼠動脈血氧分壓下降(P＜0.05)，而DXM 0.5 mg·kg~(-1)緩慢靜脈恒速注射無明顯作用，但DXM能明顯改善LPS誘導的大鼠動脈血二氧化碳分壓上升(P＜0.05)。 2．CP 1、10和30 mg·kg~(-1)緩慢靜脈恒速注射呈劑量依賴性減少BALF中的白細胞總數(shù)，其抑制率分別為0.75、33.8和52.3％；呈劑量依賴性減少中性粒細胞數(shù)目，其抑制率分別為23.4、80.3和87.4％。DXM 0.5mg·kg~(-1)靜脈注射的抑制率分別為35.3％和79.2％，其作用強度相當于CP10 mg·kg~(-1)。 3．CP 1、10和30 mg·kg~(-1)緩慢靜脈恒速注射呈劑量依賴性降低MPO水平，其抑制率分別為15.8，30.6和34.0％；DXM 0.5 mg·kg~(-1)的抑制率為34.4％，CP 30mg·kg~(-1)作用強度相當于DXM 0.5 mg·kg~(-1)。 4．CP各劑量組緩慢靜脈恒速注射對降低大鼠肺濕重／干重比值無顯著作用。 5．CP 1、10和30 mg·kg~(-1)緩慢靜脈恒速注射呈劑量依賴性改善LPS誘導的肺組織間隙大量中性粒細胞浸潤和肺水腫現(xiàn)象。 結論： 綜上結果表明，CP能降低LPS誘導小鼠急性肺損傷時的肺組織TNF-α水平升高，抑制肺組織中性粒細胞浸潤，抑制肺毛細血管通透性，減少蛋白滲出及肺水含量，降低BALF上清的MPO水平，改善肺組織炎癥病理變化。在大鼠急性肺損傷模型中，CP除了有明顯的抗炎，改善肺組織炎癥病理變化作用外，還能明顯改善LPS誘導的大鼠動脈血氧分壓下降。這些結果提示CP具有抗炎、抗氧化、減輕肺水腫和改善動脈血氧分壓等多方面作用，在治療ALI和ARDS方面具有進一步的研發(fā)價值。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R563.8

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