【摘要】：目的 通過研究全氟己烷對肺泡巨噬細(xì)胞所分泌的各種細(xì)胞因子的蛋白質(zhì)表達(dá)、凋亡和細(xì)胞周期以及吞噬功能的影響,探討急性肺損傷時應(yīng)用PFC治療的分子作用機理及其對肺局部防御機能的影響。 方法 健康雄性Wistar大鼠放血處死后全肺灌洗獲取AM,貼壁純化。采用4種方法干預(yù)將AM分為4組:(1)正常對照(C)組:不做任何干預(yù);(2)脂多糖(LPS)組:按10ug/ml的劑量加入LPS刺激;(3)全氟己烷(PFH)組:按30%體積比(PFH:培養(yǎng)液)加入的PFH;(4)脂多糖+全氟己烷(LPS+PFH)組:加入PFH和LPS。在預(yù)培養(yǎng)20h后重懸AM,分4組干預(yù)處理4h后,收集AM,與1%雞紅細(xì)胞懸液培育后制片,瑞氏染色觀察并計算吞噬率和吞噬指數(shù),采用單因素方差分析比較組間差異;提取各組細(xì)胞的蛋白質(zhì)應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片飛行時間質(zhì)譜技術(shù)比較組間的蛋白質(zhì)表達(dá)差異;在純化后即用無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)并分為4組干預(yù)24h。收集AM,應(yīng)用透視電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,并聯(lián)合流式細(xì)胞技術(shù)采用單因素方差分析比較各組間凋亡率和細(xì)胞周期的差異。 結(jié)果 (1)LPS組與C組、PFH組與C組及LPS組和LPS+PFH組相比較共發(fā)現(xiàn)有15個相對分子量的差異表達(dá)蛋白質(zhì),分別為:3343 Da、4796 Da、4968 Da、5175 Da、5546 Da、7600 Da、7918 Da、9776 Da、10934 Da、11529 Da、14853 Da(接近14849 Da)、15257 Da、15823 Da、13763 Da、14001 Da。其對應(yīng)的Swiss—prot蛋白數(shù)據(jù)庫中共發(fā)現(xiàn)了47種相應(yīng)的蛋白質(zhì)。(2)LPS組和LPS+PFH組的凋亡率分別明顯高于C組和LPS組(10.06±1.72%/24.10±3.19% vs 1.06±0.13%/10.06±1.72%,P0.01),而PFH組與C組的凋亡率比較無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(2.81±0.41%vs1.06±0.13%,P0.05);細(xì)胞周期的各指標(biāo)在4組間均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。(3)AM的吞噬率和吞噬指數(shù)呈線性相關(guān)性關(guān)
【圖文】：

.蛋白質(zhì).在芯片表面可直接被捕獲，保留和純化(親合捕獲)0.芯片表面可通過表面增強的激光解吸附和離子化《S且刀D儀進(jìn)行閱讀保留在芯片上的蛋白質(zhì)可直接進(jìn)行質(zhì)譜分析。儼1比目戶Poretni晰尹燦加y圖7蛋白質(zhì)芯片和SELDI的原理示意圖

PFH組PFH十LPS組圖IC組:未吞噬雞紅細(xì)胞的AM體積較大，核呈紫紅色，位于中央。雞紅細(xì)胞呈梭形，有濃染的核;LPS組:可見吞噬了兩個紅細(xì)胞的AM;PFH組:吞噬了PFH的AM體積較大;被吞噬的PFH不被染色，，進(jìn)入胞漿后呈圓形;PFH+LPs組:吞噬了PFH和雞紅細(xì)胞的AM(wright，5stain，X1000)
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R563

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2696220