【摘要】：表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth factor receptor, EGFR)是表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員之一,是原癌基因c-erbB 1的表達(dá)產(chǎn)物,分子量大約170kd.EGFR可通過(guò)直接和間接兩條途徑被激活�；罨腅GFR可通過(guò)下游信號(hào)導(dǎo)通路激活基因轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)而啟動(dòng)細(xì)胞核內(nèi)有關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄、調(diào)節(jié)蛋白合成、細(xì)胞分裂、增殖和分化和炎癥性反應(yīng)等。 鋅也普遍存在于空氣微細(xì)顆粒污染物中。鋅在顆粒物所含多種金屬中所占比例最高。當(dāng)前的主導(dǎo)觀點(diǎn)認(rèn)為空氣微細(xì)顆粒物的呼吸道毒性與其化學(xué)成分,尤其與某些可溶性金屬離子相關(guān)。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn),吸入含鋅顆粒物或者氣管滴注鋅鹽溶液均能引起呼吸道炎癥。體外研究顯示,外源鋅離子可激活細(xì)胞內(nèi)多個(gè)信號(hào)傳導(dǎo)通路,如表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)等。EGFR磷酸化啟動(dòng)了呼吸道上皮細(xì)胞信號(hào)通路,在組織修復(fù)及正常的細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程中起到重要作用。但是EGFR在鋅離子致呼吸道損傷過(guò)程中的作用還不清楚。研究目的 探討鋅離子對(duì)大鼠呼吸道EGFR表達(dá)及活化的影響以及EGFR在鋅離子誘導(dǎo)呼吸道炎癥過(guò)程的作用。 材料與方法 1.復(fù)制動(dòng)物炎癥模型。清潔級(jí)雄性Wistar大鼠30只采用隨機(jī)分為6組,每組5只,支氣管灌注法分別給予PBS和硫酸鋅溶液各3組,分別于灌注后4 h、8 h、24 h處死。 2. EGFR信號(hào)傳導(dǎo)通路阻斷實(shí)驗(yàn)。清潔級(jí)雄性Wistar大鼠20只隨機(jī)分為4組,每組5只。用DMSO或PD153035溶液預(yù)灌注各2組,約30min;經(jīng)過(guò)預(yù)灌注處理的2組大鼠分別灌注PBS或硫酸鋅溶液,于灌注后8h處死。 3.觀察指標(biāo)。收集支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid, BALF),使用ELISA試劑盒檢測(cè)IL-8和LDH含量；考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)總蛋白滲出情況；計(jì)數(shù)滲出炎癥細(xì)胞；肺組織做病理切片觀察炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況。Western blot檢測(cè)EGFR表達(dá)及Tyr1068活化情況。 4.采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS12.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,數(shù)據(jù)以x±s表示。應(yīng)用2×3析因設(shè)計(jì)方差分析,比較不同灌注液及時(shí)間對(duì)大鼠急性呼吸道炎癥的影響,篩選最佳時(shí)間；應(yīng)用2×2析因設(shè)計(jì)方差分析,比較預(yù)灌注液和灌注液的主效應(yīng)及其交互作用。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果 1.鋅離子能引起大鼠呼吸道炎癥。灌注硫酸鋅8h后BALF白細(xì)胞計(jì)數(shù)含量為3.44×109/L；灌注PBS 8 h后BALF白細(xì)胞計(jì)數(shù)為1.89×109/L。不同灌注液作用后大鼠BALF白細(xì)胞計(jì)數(shù)(F=12.149,P0.01)不同。灌注硫酸鋅4h、8h和24 h后白細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為2.01×109/L、3.44×109/L和1.03×109/L。不同時(shí)間點(diǎn)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(F=29.569,P0.01)也不同。 2.PD153035能夠抑制鋅離子引起的呼吸道炎癥。不同預(yù)灌注液作用后大鼠白細(xì)胞計(jì)數(shù)、總蛋白、LDH和IL-8含量(F=37.872、26.212、28.741和24.347,P0.01)不同。PD153035預(yù)灌注組中硫酸鋅所致炎癥反應(yīng)較DMSO組中硫酸鋅的作用明顯減弱；PD153035硫酸鋅組EGFR表達(dá)量(271.818)及Tyr1068磷酸化(239.676)較DMSO組明顯減少(436.320和428.360)。 結(jié)論 硫酸鋅溶液能夠引起大鼠呼吸道急性炎癥；硫酸鋅可致大鼠呼吸道細(xì)胞內(nèi)EGFR磷酸化；PD153035可明顯減弱硫酸鋅所致的EGFR磷酸化和大鼠呼吸道急性炎癥程度。
【圖文】：

置于電泳轉(zhuǎn)移液中浸泡，浸泡時(shí)間大約巧而n。2)浸泡后，取出凝膠、PVDF膜和濾紙，精確對(duì)齊，疊成“三明治”形式，如圖1所示。從“+”極到“一”極的順序依次是:3層濾紙、PVDF膜、凝膠、3層濾紙，放在半干式電轉(zhuǎn)儀中，小心地用玻璃棒排出所有氣泡，接通電源開(kāi)始轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜條件為11llA/c擴(kuò)膜，90mino一5晰id即十陽(yáng)胎fe。+丫一~~、、、‘洲、烈!錢(qián)3從從戶(hù)Qp‘r州粼c粼紅獷公柞e，一一氣，，-.一~--一抽婦一一‘甲一一-~一一，戶(hù)內(nèi)內(nèi)，，內(nèi)戶(hù)州沖內(nèi)中，曰兩.，...

圖3Bradford法測(cè)定蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算結(jié)果注液作用后BALF中總蛋白含量(F=50.436，尸<0.01)不同，引起總蛋白含量升高;不同時(shí)間點(diǎn)總蛋白含量伍二10.582，，尸4h和24h比較sh總蛋白含量最高，見(jiàn)圖4。不同灌注液和用(F=7.988，p=0.002)。表SBALF蛋白含量結(jié)果(g·ul)。=5PBs硫酸鋅F時(shí)間(P)F組別(尸)F0.63士0.381.11士0，390.12士0.171.85士0.622.93士0.580.42士0.2541.58250.43670.0010.0010
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R56

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2689422