【摘要】： 目的 (1)研究地塞米松、氨茶堿、鹽酸氨溴索和紅霉素對經(jīng)香煙預(yù)處理的大鼠肺泡巨噬細胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1和c-fos mRNA及其蛋白表達的影響,探討這幾種藥物在慢性阻塞性肺疾病抗氧化治療中的作用機制。 (2)研究TGF-β1對經(jīng)香煙預(yù)處理的大鼠肺泡巨噬細胞γ-GCS和c-fos mRNA及其蛋白表達的影響,探討TGF-β1在慢性阻塞性肺疾病氧化/抗氧化失衡中的作用機制。 方法 (1)通過支氣管肺泡灌洗(BAL)獲取大鼠肺泡巨噬細胞,隨機分為6組:對照組、香煙組、地塞米松組、氨茶堿組、沐舒坦組和紅霉素組。后4組分別加入地塞米松、氨茶堿、鹽酸氨溴索(沐舒坦)和紅霉素,使其終濃度分別為2.5μg/ml、20μg/ml、11μmol/ml和5μg/ml。2小時后除對照組外,每組均加入香煙煙霧提取物(CSE),對照組加入磷酸鹽緩沖液(PBS)。于24、48和12小時收取細胞爬片,采用免疫細胞化學(xué)方法分別檢測肺泡巨噬細胞中γ-GCS-HS、TGF-β1及c-fos蛋白表達水平。于18、36和6小時收取細胞爬片,采用原位雜交方法分別檢測肺泡巨噬細胞中γ-GCS-HS、TGF-β1及c-fos mRNA表達水平。 (2) BAL獲取大鼠肺泡巨噬細胞,隨機分為3組:對照組、香煙組和TGF-β1組。TGF-β1組加入終濃度為3ng/ml的TGF-β1 ,2小時后除對照組外,余兩組均加入CSE,對照組加入PBS。于20、10小時收取細胞爬片,采取免疫細胞化學(xué)方法分別檢測肺泡巨噬細胞中γ-GCS-HS及c-fos蛋白的表達。于10、5小時提取細胞總RNA,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)方法分別檢測肺泡巨噬細胞中γ-GCS-HS及c-fos mRNA的表達。 結(jié)果 (1)香煙對γ-GCS、TGF-β1和c-fos mRNA及其蛋白表達的影響:與對照組(0.206±0.006,0.163±0.019;0.219±0.015,0.190±0.002;0.518±0.031,0.341±0.054)比較,香煙組γ-GCS(0.493±0.090,0.468±0.065)、TGF-β1(0.412±0.017,0.280±0.018)和c-fos(1.369±0.150,1.121±0.124)mRNA及其蛋白的表達水平明顯增高,差別有統(tǒng)計學(xué)意義,P均0.01。 (2)地塞米松對γ-GCS、TGF-β1和c-fos mRNA及其蛋白表達的影響:與香煙組(0.493±0.090,0.468±0.065;0.412±0.017,0.280±0.018;1.369±0.150,1.121±0.124)比較,地塞米松組γ-GCS(0.370±0.818,0.314±0.085)、TGF-β1(0.363±0.060,0.212±0.009)和c-fos(0.983±0.081,0.595±0.399)mRNA及其蛋白的表達水平明顯降低,差別有統(tǒng)計學(xué)意義,P均0.01。
【圖文】：

香煙組與藥物組GCSmRNA及其蛋白的表達

香煙組與藥物組TGFmRNA及其蛋白的表達
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R563.9

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本文編號：2688775