【摘要】：目的基于課題組前期的工作,建立先進(jìn)的煙霧吸入性肺損傷(Smoke inhalation injury,SII)大鼠模型,探討大鼠致傷后28天體內(nèi)病理生理及炎癥因子變化,檢測致傷1天與正常大鼠肺泡灌洗液中microRNAs(miRNAs)差異表達(dá),評估SII大鼠體內(nèi)潛在作用的microRNAs和相應(yīng)靶基因調(diào)節(jié)。方法將42只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為7組:正常對照組(n=6),煙霧吸入性肺損傷組6組(n=36)。建立煙霧吸入傷模型,分別于致傷后1,2,3,7,14,28天(n=6)取材,肺組織HE、Masson染色觀察煙熏造模后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)病理學(xué)改變,檢測肺組織濕干比重評價(jià)肺水腫程度,ELISA檢測血漿及支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的含量,運(yùn)用基因Affymetrix miRNAs 4.0芯片技術(shù)初步篩選出煙霧傷后差異性表達(dá)的miRNAs,q RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果,初步預(yù)測潛在作用的miRNAs以及相應(yīng)靶基因。結(jié)果肺組織病理學(xué)顯示,致傷前3天為發(fā)病急性期,以大氣道周圍病變?yōu)橹?氣道上皮細(xì)胞纖毛結(jié)構(gòu)破壞,氣道內(nèi)局部分泌物增加同時(shí)伴有局部肺泡間質(zhì)增厚、破裂融合;致傷7天后主要表現(xiàn)為局部肺間質(zhì)病變,肺泡融合,偶見炎性細(xì)胞侵潤灶;致傷28天大部分出現(xiàn)大片狀間質(zhì)病變,局部肺部纖維化表現(xiàn),膠原纖維沉積。損傷1天和2天組大鼠肺濕干比重高于正常對照組(P㩳0.05),損傷7天、14天和28天組明顯低于損傷1天組(P㩳0.05)。與正常對照組相比,血漿IL-6在損傷1天后明顯升高,其后降低,14天后出現(xiàn)第二個(gè)高峰(P0.05),肺泡灌洗液中IL-6損傷后未出現(xiàn)明顯改變,于損傷28天后出現(xiàn)輕度降低(P0.05);損傷1天后血漿中TNF-α含量出現(xiàn)明顯升高,而損傷28天組大鼠血漿TNF-α含量明顯低于正常對照組(P0.05),肺泡灌洗液中TNF-α的含量損傷后明顯升高,于損傷后2天和14天出現(xiàn)兩個(gè)高峰(P0.05);血漿IL-10含量在損傷后的第二天顯著增加,隨后降低,于損傷后第七天開始持續(xù)增加直至28天(P0.05),肺泡灌洗液IL-10與TNF-α的變化類似,在損傷后2天和14天出現(xiàn)兩個(gè)高峰(P0.05)。與正常對照組比較,SII模型組大鼠肺泡灌洗液表達(dá)上調(diào)(Fold Change≥2.0)的miRNAs有23個(gè);而表達(dá)下調(diào)的miRNAs只有2個(gè)。選取前12個(gè)差異表達(dá)的miRNAs中9個(gè)人鼠堿基序列相同的miRNAs,提取正常及損傷1天大鼠肺泡灌洗液中miRNAs,qRT-PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),肺泡灌洗液中miR-34c-5p,miR-92b-3p,miR-205,miR-34b-3p,miR-92a-3p,let-7b-5p,let-7c-5p與芯片結(jié)論一致(P0.05)。通過靶基因軟件預(yù)測及體外初步研究,發(fā)現(xiàn)rno-miR-34c-5p表達(dá)的增加可促進(jìn)了靶基因ntn-1的表達(dá)降低(P0.05)。結(jié)論本課題組研究了SII大鼠的病理生理改變和炎癥因子的動態(tài)變化,miRNAs芯片篩選SII大鼠BALF中miRNAs的差異表達(dá)變化,提示這些差異miRNAs可能作為SII的損傷診斷標(biāo)志物及潛在的藥物治療靶點(diǎn)。
【圖文】：

2、0.01M PBS 磷酸鹽緩沖液（pH 7.2~7.4）1 袋 PBS 磷酸緩沖液干粉溶于去離子水中，最后體積為 2L，配置成 0.01M磷酸鹽緩沖液。二、實(shí)驗(yàn)方法(一)煙霧發(fā)煙器簡介煙霧發(fā)煙器由武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院救援醫(yī)學(xué)研究所課題組基于此前煙霧發(fā)生器研發(fā)，明杰自動化有限公司制作。該儀器可實(shí)時(shí)調(diào)控?zé)熿F發(fā)生器內(nèi)溫度、煙霧濃度、CO 濃度、O2濃度等參數(shù)，確保動物造模的穩(wěn)定（圖 1）。

2、造模實(shí)驗(yàn)時(shí)間探索為建立 SII 大鼠模型，利用自行研發(fā)的煙霧發(fā)生器進(jìn)行動物造模。為優(yōu)化 的實(shí)驗(yàn)條件，借鑒國內(nèi)建造的大鼠模型[8]，將大鼠分別暴露于煙霧 12、15、1min，最終得出存活率分別為 100%、100%、75%、50%。結(jié)合肺組織 H 12 分鐘煙霧吸入組沒有觀察到明顯差異，暴露煙霧 15 分鐘導(dǎo)致肺嚴(yán)重的化，包括大氣道病變，增厚的肺泡和支氣管壁以及氣道周圍的炎性細(xì)胞浸于此，我們使用 15 分鐘煙霧暴露進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)研究。煙熏完后老鼠明顯活，聞及老鼠喘息，眼眶鼻周變紅，輕微滲血，于 10 分鐘后癥狀稍緩解。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R563

【參考文獻(xiàn)】

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1 王俊偉;陳鵬;錢學(xué)珂;李勇輝;崔進(jìn);朱小南;汪洋;王深明;王勁松;;miR-34b-3p調(diào)控衰老內(nèi)皮細(xì)胞血管新生功能的研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2016年16期

2 李文婷;劉真;賈赤宇;尹斌;舒彬;;香煙煙霧提取物刺激下微小RNA-146a對人肺腺癌A549細(xì)胞中Fas相關(guān)因子2及炎癥因子的影響[J];中華燒傷雜志;2016年02期

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本文編號：2682215