發(fā)布時間：2020-05-26 02:28

【摘要】：目的：在細胞水平上研究脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活血清補體對內(nèi)皮細胞的作用和影響。評價特定抗補體活性物質(zhì)對LPS激活補體損傷內(nèi)皮細胞以及LPS致急性肺損傷(acute lung injury, ALI)的保護作用。 方法：研究LPS激活血清補體的作用方式和特點,觀察LPS激活補體對內(nèi)皮細胞表達粘附分子和凋亡的影響。采用ELISA法檢測內(nèi)皮細胞釋放P-selectin、E-selectin和ICAM-1的變化,化學(xué)發(fā)光法檢測Caspase-3/7的活化情況,SRB法檢測LPS激活補體對內(nèi)皮細胞生長的影響。在前期工作中發(fā)現(xiàn),香椿果活性多酚是一個高活性的抗補體物質(zhì),能強烈地抑制補體激活。本實驗通過測定內(nèi)皮細胞P-selectin、E-selectin、ICAM-1和Caspase-3/7的變化情況,評價香椿果抗補體活性多酚對LPS激活血清補體損傷內(nèi)皮細胞的作用。動物實驗采用LPS致ALI模型,其中控制補體的實驗組分別提前2h給予蛇毒新型抗補體蛋白Atrase A和提前24 h給予眼鏡蛇毒因子(cobra venom factor, CVF)。在給予LPS后1h、6h、12h采集標(biāo)本,測定各組血清補體活性和肺含水量,取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)測定細胞數(shù)、蛋白含量、TNF-α、P-selectin含量,比色法測定肺組織勻漿中髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)含量,取肺組織行病理切片檢查,評價兩種抗補體蛋白對大鼠ALI的保護作用。 結(jié)果：LPS能夠激活血清補體,這種激活呈現(xiàn)量效、時效性。LPS激活血清補體可誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞瞬時顯著釋放P-selectin, E-selectin和ICAM-1表達也明顯上調(diào),同時可導(dǎo)致Caspase-3/7的活化。在本實驗條件下,LPS激活血清補體對內(nèi)皮細胞生長未產(chǎn)生抑制。香椿果抗補體活性多酚不能下調(diào)LPS激活補體損傷內(nèi)皮細胞表達粘附分子和誘導(dǎo)凋亡。在動物實驗中,模型組給予LPS后出現(xiàn)了典型的ALI癥狀,大鼠血清補體活性明顯下降�？寡a體蛋白實驗組均能明顯降低大鼠血清補體水平、肺組織MPO含量和BALF中細胞數(shù)、TNF-a和P-selectin含量,減輕肺組織炎癥反應(yīng)；但對肺含水量和BALF中蛋白含量的影響無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：LPS激活血清補體可損傷內(nèi)皮細胞,導(dǎo)致內(nèi)皮細胞顯著表達粘附分子以及發(fā)生凋亡。香椿果抗補體活性多酚雖能強烈抑制補體經(jīng)典途徑和替代途徑激活,但對LPS激活補體損傷內(nèi)皮細胞沒有保護作用。采用兩種不同類型的抗補體蛋白能有效減輕ALI的病理損傷,但兩者的保護作用特點存在顯著差異,其中Atrase A明顯優(yōu)于CVF,提示Atrase A所作用的某些補體特定靶標(biāo)成分在ALI中具有重要作用。
【圖文】：

3.1LPS激活血清補體誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷的情況 3.1.1LPS+NHS孵育混合物加入量的確定不同比例稀釋度的溶血活性顯示，1:10為最佳稀釋度(圖2)。LPS在預(yù)孵條件下，能激活補體經(jīng)典途徑和替代途徑，，這種激活具有劑量依賴性(圖3)和時間依賴性(圖4)。在預(yù)孵Zh的條件下，對經(jīng)典途徑和替代途徑溶血的ICS。分別為 118.48mg·L一1、 195.82mg·L一l。100 275505

本文編號：2681136