發(fā)布時間：2020-05-25 02:02

【摘要】： 本文采用腹腔注射內(nèi)毒素的方法復(fù)制小鼠急性肺損傷(acute lung injury, ALI)模型，旨在觀察ALI發(fā)病過程中肺組織及肺泡巨噬細(xì)胞(alveolar macrophage, AM)清道夫受體A(scavenger receptor class A, SR-A)的表達(dá)，探討SR-A對LPS的結(jié)合或清除作用及其對巨噬細(xì)胞(macrophage，Mφ)釋放炎癥因子TNF-α的影響；并采用細(xì)胞培養(yǎng)的方法，觀察增強(qiáng)巨噬細(xì)胞SR-A表達(dá)是否有助于對LPS的結(jié)合或清除并減少炎癥因子的釋放,以期進(jìn)一步探討SR-A的作用機(jī)制。 實驗分組：動物實驗分為內(nèi)毒素0.5h、1h、2h、4h、8h組及生理鹽水對照組。細(xì)胞實驗分為①Mφ＋LPS組；②PMA＋Mφ＋LPS組；③PMA＋Mφ＋2F8＋LPS組。每組又分為內(nèi)毒素0.5h、1h、2h、4h、8h組及無血清培養(yǎng)液對照組，每個時相點及對照組均設(shè)4個復(fù)孔。 結(jié)果顯示：①生理鹽水對照組小鼠肺組織除支氣管上皮細(xì)胞沒有SR-A表達(dá)外，AM、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞均有表達(dá)。內(nèi)毒素致傷后1h即可觀察到肺組織SR-A免疫組化染色弱于生理鹽水對照組，并且隨著致傷時間的延長，表達(dá)強(qiáng)度逐漸下降，且?guī)追N細(xì)胞下降趨勢一致。分離AM作細(xì)胞免疫化學(xué)染色，結(jié)果類似。以上結(jié)果表明，內(nèi)毒素可以下調(diào)肺內(nèi)SR-A的表達(dá)。用J774A.1細(xì)胞作體外實驗也發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果，以4h、8h組降低最為顯著。流式細(xì)胞儀檢測AM及J774A.1細(xì)胞的SR-A表達(dá)與免疫化學(xué)染色結(jié)果相符，且細(xì)胞膜的SR-A下降較細(xì)胞總的SR-A下降顯著。②生理鹽水對照組小鼠肺組織勻漿液中LPS含量為0.32±0.21 EU/ml，腹腔注射內(nèi)毒素0.5h即可在肺組織檢測到大量內(nèi)毒素，含量為11.09±2.76 EU/ml；內(nèi)毒素各組肺組織LPS含量均非常顯著高于生理鹽水對照組(P0.01)；內(nèi)毒素1h、2h、4h、8h組肺組織LPS含量均非常顯著低于0.5h組(P0.01)，但1h、2h、4h、8h組各組間無顯著差異(P0.05)。③ELISA結(jié)果顯示，小鼠腹腔注射內(nèi)毒素后0.5h、1h、2h、4h、8h肺組織TNF-α含量均非常顯著高于生理鹽水對照組(P0.01)，并隨注射內(nèi)毒素時間延長而逐漸上升，2h達(dá)到峰值。④體外培養(yǎng)結(jié)果表明，佛波酯刺激巨噬細(xì)胞72h后，SR-A表達(dá)增加。⑤佛波酯上調(diào)SR-A表達(dá)后，用含LPS的培養(yǎng)液培養(yǎng)0.5h、1h、2h、4h、8h，細(xì)胞上清中LPS含量非常顯著低于對應(yīng)時相點無佛波酯組(P0.01)，且用SR-A單克隆抗體阻斷SR-A后，可抑制LPS含量減低。⑥ELISA結(jié)果 顯示，無血清培養(yǎng)液對照組細(xì)胞培養(yǎng)上清中僅檢測到微量TNF-α，，LPS刺激后0.5h即可檢測到大量TNF-α，并隨時間延長而逐漸增加，1h達(dá)到峰值。佛波酯+LPS組細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α含量非常顯著低于無佛波酯組(P0.01)，用SR-A單克隆抗體阻斷SR-A后，可抑制佛波酯上調(diào)SR-A后所致的TNF-α含量減低。 以上結(jié)果表明：①內(nèi)毒素肺損傷發(fā)病過程中肺組織及AM SR-A表達(dá)下降。②佛波酯上調(diào)巨噬細(xì)胞SR-A表達(dá)后，可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞對LPS的結(jié)合，用SR-A單克隆抗體阻斷SR-A后，這種促進(jìn)作用被抑制，推測LPS在肺內(nèi)滯留可能與SR-A的表達(dá)下降有關(guān)。③內(nèi)毒素肺損傷發(fā)病過程中肺組織勻漿中TNF-α水平升高，而體外實驗顯示上調(diào)SR-A的表達(dá)可以減少TNF-α的釋放，用SR-A單克隆抗體阻斷SR-A后，這種作用被抑制，推測肺組織及AM SR-A表達(dá)下降，可能是導(dǎo)致炎癥因子產(chǎn)生增多的機(jī)制之一。
【圖文】：

0 流式細(xì)胞儀檢測 M 與 FITC-LPS 的TC-LPS+M 組 B: FITC-LPF8+FITC-LPS+M 組 D: PMA+FITJ774A.1 細(xì)胞與 FITC-LPS 結(jié)合的平均2F8+FITC-LPS+M PMA+FITC-LP25.80 78.56 上清中 TNF- 含量血清培養(yǎng)液對照組細(xì)胞培養(yǎng)上清 0.5h 即可檢測到 TNF- 水平升高+LPS 組細(xì)胞培養(yǎng)上清中 TNF- 隆抗體阻斷 SR-A 后 佛波酯降
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R563

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本文編號：2679372