【摘要】： 本文采用腹腔注射內(nèi)毒素的方法復制小鼠急性肺損傷(acute lung injury, ALI)模型，旨在觀察ALI發(fā)病過程中肺組織及肺泡巨噬細胞(alveolar macrophage, AM)清道夫受體A(scavenger receptor class A, SR-A)的表達，探討SR-A對LPS的結(jié)合或清除作用及其對巨噬細胞(macrophage，Mφ)釋放炎癥因子TNF-α的影響；并采用細胞培養(yǎng)的方法，觀察增強巨噬細胞SR-A表達是否有助于對LPS的結(jié)合或清除并減少炎癥因子的釋放,以期進一步探討SR-A的作用機制。 實驗分組：動物實驗分為內(nèi)毒素0.5h、1h、2h、4h、8h組及生理鹽水對照組。細胞實驗分為①Mφ＋LPS組；②PMA＋Mφ＋LPS組；③PMA＋Mφ＋2F8＋LPS組。每組又分為內(nèi)毒素0.5h、1h、2h、4h、8h組及無血清培養(yǎng)液對照組，每個時相點及對照組均設4個復孔。 結(jié)果顯示：①生理鹽水對照組小鼠肺組織除支氣管上皮細胞沒有SR-A表達外，AM、肺血管內(nèi)皮細胞、血管平滑肌細胞、肺泡上皮細胞、中性粒細胞均有表達。內(nèi)毒素致傷后1h即可觀察到肺組織SR-A免疫組化染色弱于生理鹽水對照組，并且隨著致傷時間的延長，表達強度逐漸下降，且?guī)追N細胞下降趨勢一致。分離AM作細胞免疫化學染色，結(jié)果類似。以上結(jié)果表明，內(nèi)毒素可以下調(diào)肺內(nèi)SR-A的表達。用J774A.1細胞作體外實驗也發(fā)現(xiàn)類似結(jié)果，以4h、8h組降低最為顯著。流式細胞儀檢測AM及J774A.1細胞的SR-A表達與免疫化學染色結(jié)果相符，且細胞膜的SR-A下降較細胞總的SR-A下降顯著。②生理鹽水對照組小鼠肺組織勻漿液中LPS含量為0.32±0.21 EU/ml，腹腔注射內(nèi)毒素0.5h即可在肺組織檢測到大量內(nèi)毒素，含量為11.09±2.76 EU/ml；內(nèi)毒素各組肺組織LPS含量均非常顯著高于生理鹽水對照組(P0.01)；內(nèi)毒素1h、2h、4h、8h組肺組織LPS含量均非常顯著低于0.5h組(P0.01)，但1h、2h、4h、8h組各組間無顯著差異(P0.05)。③ELISA結(jié)果顯示，小鼠腹腔注射內(nèi)毒素后0.5h、1h、2h、4h、8h肺組織TNF-α含量均非常顯著高于生理鹽水對照組(P0.01)，并隨注射內(nèi)毒素時間延長而逐漸上升，2h達到峰值。④體外培養(yǎng)結(jié)果表明，佛波酯刺激巨噬細胞72h后，SR-A表達增加。⑤佛波酯上調(diào)SR-A表達后，用含LPS的培養(yǎng)液培養(yǎng)0.5h、1h、2h、4h、8h，細胞上清中LPS含量非常顯著低于對應時相點無佛波酯組(P0.01)，且用SR-A單克隆抗體阻斷SR-A后，可抑制LPS含量減低。⑥ELISA結(jié)果 顯示，無血清培養(yǎng)液對照組細胞培養(yǎng)上清中僅檢測到微量TNF-α，，LPS刺激后0.5h即可檢測到大量TNF-α，并隨時間延長而逐漸增加，1h達到峰值。佛波酯+LPS組細胞培養(yǎng)上清中TNF-α含量非常顯著低于無佛波酯組(P0.01)，用SR-A單克隆抗體阻斷SR-A后，可抑制佛波酯上調(diào)SR-A后所致的TNF-α含量減低。 以上結(jié)果表明：①內(nèi)毒素肺損傷發(fā)病過程中肺組織及AM SR-A表達下降。②佛波酯上調(diào)巨噬細胞SR-A表達后，可以促進巨噬細胞對LPS的結(jié)合，用SR-A單克隆抗體阻斷SR-A后，這種促進作用被抑制，推測LPS在肺內(nèi)滯留可能與SR-A的表達下降有關。③內(nèi)毒素肺損傷發(fā)病過程中肺組織勻漿中TNF-α水平升高，而體外實驗顯示上調(diào)SR-A的表達可以減少TNF-α的釋放，用SR-A單克隆抗體阻斷SR-A后，這種作用被抑制，推測肺組織及AM SR-A表達下降，可能是導致炎癥因子產(chǎn)生增多的機制之一。
【圖文】：

0 流式細胞儀檢測 M 與 FITC-LPS 的TC-LPS+M 組 B: FITC-LPF8+FITC-LPS+M 組 D: PMA+FITJ774A.1 細胞與 FITC-LPS 結(jié)合的平均2F8+FITC-LPS+M PMA+FITC-LP25.80 78.56 上清中 TNF- 含量血清培養(yǎng)液對照組細胞培養(yǎng)上清 0.5h 即可檢測到 TNF- 水平升高+LPS 組細胞培養(yǎng)上清中 TNF- 隆抗體阻斷 SR-A 后 佛波酯降
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R563

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 茍連平;呂湛;胡厚祥;張俊;陳麗;;洛伐他汀對THP-1細胞分化成泡沫細胞過程中清道夫受體A表達及MCP-1、TNF-α水平的影響[J];中國老年學雜志;2011年13期

2 ;[J];;年期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關會議論文 前10條

1 王自力;索占偉;許劍琴;穆祥;王新;;加味白頭翁湯主要成分對腸黏膜微血管內(nèi)皮細胞NO分泌的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學會2004學術年會暨第五屆全國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學術研討會論文集（上冊）[C];2004年

2 劉濤;俞玫;袁直;劉斌;沈彬;劉燕;;全血灌流用內(nèi)毒素吸附劑的研究[A];中國化學會第12屆反應性高分子（離子交換與吸附）學術研討會會議論文摘要預印集（一）[C];2004年

3 王友信;柴同杰;;兔舍中氣載內(nèi)毒素與革蘭氏陰性菌研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物微生態(tài)學分會第三屆第七次學術研討會論文集[C];2004年

4 張建芳;徐修禮;樊新;孫怡群;;不同疾病血漿內(nèi)毒素含量的測定及結(jié)果分析[A];第6次全國微生物學與免疫學大會論文摘要匯編[C];2004年

5 嚴鵬科;李世煌;段才聞;譚湘萍;梅崢嶸;司徒冰;肖國宏;;氧化型低密度脂蛋白對骨髓源性平滑肌樣細胞小凹蛋白1表達的抑制作用及其清道夫受體A的關系[A];2010年廣東省藥師周大會論文集[C];2011年

6 李珊珊;李澎;黃啟福;;心脈靈注射液對內(nèi)毒素刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞ET-1和NO分泌的影響[A];中醫(yī)藥研究學術研討會論文集[C];2004年

7 王開富;陸付耳;徐麗君;鄒欣;;清熱解毒與養(yǎng)陰增液法對內(nèi)毒素脫毒相關分子HDL和ALP影響的研究[A];湖北省暨武漢市生物化學與分子生物學學會第七屆第十四次學術年會論文摘要集[C];2003年

8 魏健;張慶富;;燙傷早期家兔復合內(nèi)毒素血癥血液流變學研究[A];中國微循環(huán)學會第五屆中國微循環(huán)學術大會論文摘要匯編[C];2004年

9 黎暉;劉望嬌;李志新;杜少輝;李伊為;陳東風;周健洪;張賽霞;;牛珀至寶微丸對內(nèi)毒素急性肺損傷膠原纖維表達的影響[A];第七次全國中西醫(yī)結(jié)合呼吸病學術交流大會論文匯編（一）[C];2004年

10 賀石林;;彌散性血管內(nèi)凝血的研究進展[A];第十一次全國中西醫(yī)結(jié)合兒科學術會議論文匯編[C];2004年

相關重要報紙文章 前10條

1 小環(huán);夏季謹防室內(nèi)毒氣侵害[N];中國中醫(yī)藥報;2001年

2 白山;排出內(nèi)毒保冬季健康[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2005年

3 ;中藥血必凈注射液的制備[N];科技日報;2005年

4 山東曲阜市第二人民醫(yī)院 馬建國;《醫(yī)學心悟》中外科病論治擷要[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

5 鄭發(fā);國家禁毒辦通報我國毒品問題特點及對策[N];法制日報;2003年

6 遼寧中醫(yī)藥大學附院風濕免疫科 曲淑芹;祛邪解毒論治類風濕關節(jié)炎[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

7 河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院 云鷹;“毒邪”在小兒紫癜性腎炎中的致病作用[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

8 本報記者　楊繼紅;窮途末路“毒鼠強”[N];山西日報;2003年

9 ;車內(nèi)空氣污染，要標本兼治[N];中國汽車報;2004年

10 本報記者 裴智勇;禁毒應對四大挑戰(zhàn)[N];人民日報;2003年

相關博士學位論文 前10條

1 李京華;親和膜分離器的設計、藥品中內(nèi)毒素的去除和鱟試劑靈敏度的測定方法研究[D];中國科學院研究生院（大連化學物理研究所）;2003年

2 姜明;類脂A結(jié)合肽的篩選和修飾及其在內(nèi)毒素中和過程中的作用[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學;2003年

3 王志宏;氟伐他汀對阿霉素腎病大鼠腎臟清道夫受體A基因表達的影響[D];吉林大學;2004年

4 麻莉;內(nèi)毒素結(jié)合肽EBP基因的克隆表達及其內(nèi)毒素拮抗效應研究[D];第三軍醫(yī)大學;2003年

5

本文編號：2679372