發(fā)布時間：2017-03-25 18:08

  本文關鍵詞：肺癆康對耐異煙肼肺結核小鼠miRNA-29b和caspase-3及caspase-7的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：檢測肺癆康治療耐異煙肼肺結核小鼠肺組織中caspase-3、caspase-7和miRNA-29b的表達水平,探討肺癆康治療耐異煙肼肺結核的機制,為中醫(yī)藥治療耐藥肺結核的機制提供新思路。方法：1.SPF級昆明種小鼠尾靜脈注射耐異煙肼結核分枝桿菌菌懸液,建立耐異煙肼肺結核小鼠模型,以生理鹽水、肺癆康、異煙肼、肺癆康聯合異煙肼灌胃56天；尾靜脈注射H37RV標準結核分枝桿菌菌懸液,建立肺結核小鼠模型,以生理鹽水灌胃56天；另設空白對照組,以生理鹽水灌胃56天；2.免疫組化檢測各組小鼠肺組織中caspase-3、caspase-7表達水平；3.采用Real time quantity-PCR(實時熒光定量聚合酶鏈反應)技術檢測各組小鼠肺組織中miRNA-29b的表達水平；4.采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗結果進行統(tǒng)計學分析。結果：1.空白對照組小鼠肺組織未檢測出結核分枝桿菌；耐異煙肼肺結核模型組小鼠、標準菌肺結核模型組小鼠肺組織均檢測出結核分枝桿菌。2.根據免疫組化評價標準,與空白對照組小鼠肺組織比較,caspase-3在標準菌肺結核模型組小鼠肺組織中高表達(P0.01),在耐異煙肼肺結核模型組小鼠肺組織中高表達(P0.05)；經過肺癆康干預后,caspase-3的表達高于空白對照組(P0.05),但比治療前下降；經過肺癆康聯合異煙肼干預后,caspase-3的表達與空白對照組無顯著差異(P0.05)；經過異煙肼干預后,caspase-3的表達高于空白對照組(P0.05)。3.根據免疫組化評價標準,與空白對照組小鼠肺組織比較,caspase-7在標準菌肺結核模型組小鼠肺組織中高表達(P0.01),在耐異煙肼肺結核模型組小鼠肺組織中高表達(P0.01)；經過肺癆康聯合異煙肼干預后,caspase-7的表達與空白對照組無顯著差異(P0.05)；經過肺癆康干預后,caspase-7的表達與空白對照組無顯著差異(P0.05)；經過異煙肼干預后,caspase-7表達與空白對照組無顯著差異(P0.05)。4.在空白對照組小鼠肺組織中,MiRNA-29b的表達最低；與空白對照組比較,MiRNA-29b在標準肺結核模型組小鼠肺組織中高表達(P0.01),在耐異煙肼肺結核模型組小鼠肺組織中高表達(P0.01),且在耐異煙肼肺結核模型組小鼠肺組織中最高；與耐異煙肼肺結核模型組比較,miRNA-29b的表達在肺癆康干預后降低(P0.01),在異煙肼干預后降低(P0.01),在肺癆康聯合異煙肼干預后降低(P0.05),其中肺癆康、肺癆康聯合異煙肼干預后,下降幅度大于異煙肼干預后的結果。肺癆康、肺癆康聯合異煙肼干預后miRNA-29b的表達相近,且都低于在標準肺結核模型中的表達。結論：1.小鼠尾靜脈注射耐異煙肼結核桿菌菌懸液,7天后,小鼠肺組織中檢測出結核桿菌,說明這種方法造�？尚�。2.在耐異煙肼肺結核小鼠肺組織中,caspase-3的免疫組化染色表達升高,經過肺癆康干預后降低,說明肺癆康治療耐異煙肼肺結核,可能與caspase-3引起的細胞凋亡有關。3.在耐異煙肼肺結核小鼠肺組織中,caspase-7的免疫組化染色表達升高,經過肺癆康干預后降低,說明肺癆康治療耐異煙肼肺結核,可能與caspase-7導致的細胞凋亡有關。4.MiRNA-29b在耐異煙肼肺結核小鼠模型肺組織中呈高表達,經過肺癆康干預后降低,說明肺癆康抗耐異煙肼肺結核,可能通過miRNA-29b的降低而發(fā)揮作用。
【關鍵詞】：肺癆康 耐異煙肼肺結核小鼠 MiRNA-29b Caspase-3 Caspase-7
【學位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R521
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• 英文摘要4-7
• 英文縮略詞表7-11
• 引言11-13
• 實驗研究13-38
• 第一部分 耐異煙肼肺結核小鼠模型的建立13-19
• 1 實驗材料13-14
• 1.1 實驗動物13
• 1.2 實驗試劑及配置13
• 1.3 實驗儀器、設備和器材13
• 1.4 實驗菌株13-14
• 1.5 實驗場地14
• 2 實驗方法14
• 2.1 實驗動物分組14
• 2.2 造模方法14
• 3 觀察指標及方法14-15
• 3.1 小鼠體征和體重14
• 3.1.1 小鼠體征14
• 3.1.2 小鼠體重14
• 3.2 肉眼下小鼠肺部形態(tài)觀察14
• 3.3 小鼠肺部細菌培養(yǎng)與菌落計數14-15
• 4 統(tǒng)計學處理方法15
• 5 實驗結果15-17
• 5.1 小鼠體征和體重變化15-16
• 5.1.1 一般體征變化15
• 5.1.2 體重變化15-16
• 5.2 小鼠肺部形態(tài)變化16-17
• 5.3 小鼠肺部結核分枝桿菌培養(yǎng)四周的菌落計數17
• 6 數據分析及小結17-19
• 第二部分 肺癆康對耐異煙肼肺結核小鼠中caspase-3和caspase-7的影響19-33
• 1 實驗材料19-20
• 1.1 實驗動物19
• 1.2 實驗藥物19
• 1.3 實驗試劑及配置19
• 1.4 實驗儀器、設備和器材19-20
• 1.5 實驗菌株20
• 1.6 實驗場地20
• 2 實驗方法20-21
• 2.1 干預用藥的制備及用法用量20-21
• 2.2 實驗動物分組21
• 2.3 造模方法21
• 2.4 藥物干預方法21
• 3 觀察指標及方法21-24
• 3.1 小鼠體征及體重21
• 3.2 小鼠肺部形態(tài)21-23
• 3.2.1 肉眼下形態(tài)觀察21-22
• 3.2.2 光鏡下形態(tài)觀察22-23
• 3.3 小鼠肺部細菌培養(yǎng)與菌落計數23-24
• 4 小鼠caspase-3和caspase-7的測定24-25
• 4.1 標本準備24
• 4.2 標本檢測24-25
• 4.3 染色判定25
• 4.4 圖像采集及觀察25
• 5 統(tǒng)計學處理方法25
• 6 實驗結果和分析25-30
• 6.1 小鼠體征、體重改變25-27
• 6.1.1 一般形態(tài)變化25-26
• 6.1.2 體重變化26-27
• 6.2 小鼠肺部形態(tài)變化27-28
• 6.2.1 肉眼觀察下的變化27-28
• 6.2.2 HE染色光鏡下小鼠肺部病理形態(tài)改變28
• 6.3 小鼠肺部結核桿菌培養(yǎng)與菌落計數28-29
• 6.4 小鼠肺組織caspase-3的表達29
• 6.5 小鼠肺組織caspase-7的表達29-30
• 7 實驗結果分析和小結30-33
• 7.1 體重統(tǒng)計結果分析30-31
• 7.2 肉眼下觀察結果分析31
• 7.3 光鏡下觀察結果分析31
• 7.4 小鼠肺部結核桿菌培養(yǎng)與菌落計數31
• 7.5 免疫組化caspase-3統(tǒng)計結果分析31-32
• 7.6 免疫組化caspase-7統(tǒng)計結果分析32
• 7.7 小結32-33
• 第三部分 肺癆康抗治療異煙肼肺結核小鼠中MiRNA-29b的表達意義33-38
• 1 實驗材料33
• 1.1 實驗試劑33
• 1.2 實驗儀器和設備33
• 1.3 標本準備33
• 1.4 實驗場地33
• 2 實驗方法33-35
• 2.1 RNA的提取和鑒定33-34
• 2.2 引物設計34
• 2.3 Real time quantity-PCR34-35
• 2.4 分析方法35
• 2.5 統(tǒng)計學方法35
• 3 實驗結果35-36
• 4 實驗結果分析及小結36-38
• 討論38-49
• 1 肺結核的研究及治療概論38-40
• 1.1 中醫(yī)對肺結核的研究及治療38-39
• 1.1.1 中醫(yī)對肺結核病因病機認識38-39
• 1.1.2 中醫(yī)對肺結核的防治39
• 1.2 西醫(yī)對肺結核的治療概論39-40
• 2 耐藥肺結核的研究40-42
• 2.1 耐藥肺結核的產生和分子機制探討41
• 2.2 耐藥肺結核的治療41-42
• 2.2.1 中醫(yī)藥對耐藥肺結核的治療41-42
• 2.2.2 西醫(yī)對耐藥肺結核的治療42
• 3 肺癆康的探討42-44
• 3.1 肺癆康來源、應用42-43
• 3.2 藥物分析43-44
• 3.3 配伍意義44
• 4 對耐異煙肼結核小鼠模型的評價44-45
• 5 對陽性藥物的評價45
• 6 對caspase-3和caspase-7在肺癆康抗耐異煙肼肺結核中的探討45-47
• 6.1 caspase的概況46
• 6.2 Caspase-3、caspase-7在結核中的表達46-47
• 6.3 Caspase-3在肺癆康抗耐異煙肼肺結核中的表達及意義47
• 6.4 Caspase-7在肺癆康抗耐異煙肼肺結核中的表達及意義47
• 7 對MiRNA-29b在肺癆康抗耐異煙肼肺結核中的探討47-49
• 7.1 MiRNA的概況47-48
• 7.2 MiRNA與結核病的研究48
• 7.3 MiRNA-29b與肺癆康抗耐異煙肼肺結核的表達及意義48-49
• 結論49-50
• 問題和展望50-51
• 致謝51-52
• 參考文獻52-58
• 附件1：附圖58-61
• 附件2：文獻綜述61-67
• 參考文獻65-67
• 附件3：在讀期間公開發(fā)表的學術論文、專著及科研成果67-68

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