本文關(guān)鍵詞：黃芩苷抗結(jié)核作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的結(jié)核病是一古老的疾病,從古至今,人類一直未曾停止與其不懈的斗爭。自上世紀(jì)40年代鏈霉素應(yīng)用于結(jié)核病治療,以及隨后一線抗結(jié)核藥利福平、異煙肼及乙胺丁醇的應(yīng)用,人類對結(jié)核病的控制才有了突破性進(jìn)展�？菇Y(jié)核藥的廣泛應(yīng)用以及不正規(guī)治療必然伴隨細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生,從最初單耐藥發(fā)展到多耐藥,甚至耐多藥及泛耐藥。近年來HIV與結(jié)核的雙重感染急劇上升,面臨HIV疫情及耐藥結(jié)核的威脅,抗結(jié)核新藥的研發(fā)迫在眉睫。中藥黃芩苷是藥用植物黃芩的黃酮類化合物,目前已研究其有多種療效�；谀壳敖Y(jié)核耐藥形勢及抗結(jié)核藥物毒副作用,本課題借助體外抑菌試驗及形態(tài)學(xué)觀察,以期明確黃芩苷的抗結(jié)核作用及機(jī)制,為中西醫(yī)結(jié)合治療結(jié)核病開拓思路,提供基礎(chǔ)實驗數(shù)據(jù),并為進(jìn)一步的臨床推廣打下基礎(chǔ)。 方法利用絕對濃度法進(jìn)行體外黃芩苷單藥抑菌試驗,求得黃芩苷MIC,評估黃芩苷的抗結(jié)核作用；利用棋盤法,將不同濃度梯度黃芩苷分別與不同濃度梯度的利福平、異煙肼及乙胺丁醇交叉進(jìn)行聯(lián)合抑菌試驗,通過絕對濃度法求得FIC,評估黃芩苷與抗結(jié)核藥物的聯(lián)合效應(yīng)。以熒光試劑5(6)-羧基-四甲基羅丹明琥珀酰亞胺酯標(biāo)記黃芩苷,熒光標(biāo)記黃芩苷進(jìn)行體外抑菌試驗,評價標(biāo)記前后黃芩苷的抑菌作用有無變化,制備藥理活性的熒光探針；激光掃描共聚焦顯微鏡對標(biāo)記黃芩苷作用后的結(jié)核菌進(jìn)行掃描及三維重建,觀察熒光標(biāo)記黃芩苷抗結(jié)核菌作用的部位。 結(jié)果108例黃芩苷體外抑菌試驗結(jié)果表明,黃芩苷對結(jié)核分枝桿菌有明確抑制作用,MIC值在0.75～12mg/ml之間,MIC為12mg/ml的菌株占8.33%,6mg/ml的菌株占45.87%,3mg/ml的菌株占37.62%,1.5mg/ml的菌株占6.48%,0.75mg/ml的菌株占0.93%,MIC50和MIC90均為6mg/ml。黃芩苷與INH、RFP、EMB的聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果表明,黃芩苷與INH、RFP的聯(lián)合效應(yīng)主要表現(xiàn)為協(xié)同或相加,與EMB的聯(lián)合效應(yīng)主要表現(xiàn)為拮抗。熒光標(biāo)記黃芩苷抑菌試驗結(jié)果表明,其MIC降低1個濃度梯度。LSCM觀察結(jié)果提示標(biāo)記黃芩苷進(jìn)入結(jié)核菌內(nèi)部發(fā)揮作用,而非僅粘附于結(jié)核菌表面。結(jié)“CT式”斷層掃描及三維重建結(jié)果,熒光標(biāo)記黃芩苷作用部位為結(jié)核菌細(xì)胞質(zhì),抗結(jié)核作用可能與影響核酸代謝,干擾基因表達(dá)及蛋白質(zhì)合成有關(guān)。 結(jié)論黃芩苷體外抑菌試驗確定黃芩苷的抗結(jié)核作用,MIC值在0.75～12mg/ml之間,MIC為12mg/ml的菌株占8.33%,6mg/ml的菌株占45.87%,3mg/ml的菌株占37.62%,1.5mg/ml的菌株占6.48%,0.75mg/ml的菌株占0.93%,MIC50和MIC90均為6mg/ml。黃芩苷對結(jié)核分枝桿菌的直接抑制作用可能與其黃酮環(huán)的烯烴結(jié)構(gòu)有關(guān),糖苷成分的改變也可能影響其抑菌活性。黃芩苷與INH、RFP及EMB的聯(lián)合藥敏試驗結(jié)果表明,黃芩苷與INH、RFP的聯(lián)合效應(yīng)主要表現(xiàn)為協(xié)同或相加,與EMB的聯(lián)合效應(yīng)主要表現(xiàn)為拮抗。說明黃芩苷能夠部分降低INH、RFP的耐藥性,降低藥物所需劑量,降低毒副作用,避免及延緩耐藥的發(fā)生；機(jī)制可能與影響已知耐藥靶基因,外排泵基因等有關(guān)。黃芩苷不能降低EMB的耐藥程度,反而進(jìn)一步增加其耐藥性,增加其使用劑量,更易誘發(fā)毒副作用；機(jī)制可能與競爭抑制作用或影響己知耐藥靶基因,外排泵基因及新的藥物靶基因有關(guān)。熒光標(biāo)記黃芩苷抑菌試驗結(jié)果表明,其MIC降低1個濃度梯度,提示抗結(jié)核活性增強(qiáng),推測有以下可能：1.氨基的加入增加了黃芩苷的抑菌活性2.黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中糖苷成分的存在易削弱其活性,氨基和5-(6)TAMRA SE的加入,可能削弱了葡萄糖苷鍵的穩(wěn)定性,從而增加標(biāo)記黃芩苷的抑菌活性3.黃芩苷的抑菌活性基團(tuán)可能不止黃酮環(huán)的烯烴結(jié)構(gòu),或許也與黃芩苷的6位羰基有關(guān)。LSCM觀察結(jié)果提示,標(biāo)記黃芩苷進(jìn)入結(jié)核菌內(nèi)部發(fā)揮作用,而非僅粘附于結(jié)核菌表面。結(jié)合“CT式”斷層掃描及三維重建結(jié)果,熒光標(biāo)記黃芩苷作用部位為結(jié)核菌細(xì)胞質(zhì),抗結(jié)核作用可能與影響核酸代謝,干擾基因表達(dá)及蛋白質(zhì)合成有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：黃芩苷 結(jié)核分枝桿菌 MIC FIC 5-(6)TAMRA SE 熒光標(biāo)記 LSCM
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R285;R521
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略語12-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、黃芩苷單藥體外抑菌試驗16-24
• 1.1 儀器與材料16-17
• 1.1.1 結(jié)核分枝桿菌16
• 1.1.2 試劑16
• 1.1.3 儀器16
• 1.1.4 改良羅氏固體培養(yǎng)基16-17
• 1.2 方法17-20
• 1.2.1 臨床痰標(biāo)本的初分離培養(yǎng)17-18
• 1.2.2 結(jié)核分枝桿菌的臨床常規(guī)藥敏試驗18-19
• 1.2.3 黃芩苷體外抑菌試驗19-20
• 1.3 統(tǒng)計學(xué)分析20
• 1.4 結(jié)果20-21
• 1.4.1 108例黃芩苷單藥抑菌MIC20-21
• 1.5 討論21-23
• 1.6 小結(jié)23-24
• 二、黃芩苷聯(lián)合抗結(jié)核藥體外抑菌試驗24-33
• 2.1 儀器與材料24-25
• 2.1.1 結(jié)核分枝桿菌24
• 2.1.2 試劑24
• 2.1.3 儀器24-25
• 2.1.4 改良羅氏固體培養(yǎng)基25
• 2.2 方法25-28
• 2.2.1 聯(lián)合藥敏培養(yǎng)基的制備25-27
• 2.2.2 接種27-28
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析28
• 2.4 結(jié)果28
• 2.4.1 黃芩苷聯(lián)合抗結(jié)核藥藥敏試驗的FIC指數(shù)28
• 2.5 討論28-31
• 2.6 小結(jié)31-33
• 三、黃芩苷抑菌機(jī)制初步研究33-46
• 3.1 黃芩苷熒光標(biāo)記33-36
• 3.1.1 儀器與材料34-35
• 3.1.2 方法35-36
• 3.2 熒光標(biāo)記黃芩苷的LSCM觀察36-37
• 3.2.1 儀器與材料36-37
• 3.2.2 方法37
• 3.3 結(jié)果37-43
• 3.3.1 熒光標(biāo)記黃芩苷的檢測及分離純化37-39
• 3.3.2 乙酸乙酸鈉緩沖液溶解黃芩苷的抑菌活性結(jié)果39
• 3.3.3 熒光標(biāo)記黃芩苷的抑菌活性39
• 3.3.4 熒光標(biāo)記黃芩苷作用結(jié)核菌的激光共聚焦顯微鏡觀察39-40
• 3.3.5 熒光標(biāo)記黃芩苷在結(jié)核菌內(nèi)的定位分析40-43
• 3.4 討論43-45
• 3.4.1 黃芩苷的熒光標(biāo)記43-44
• 3.4.2 乙酸乙酸鈉緩沖液溶解黃芩苷的抑菌活性44
• 3.4.3 熒光標(biāo)記黃芩苷的抑菌活性44-45
• 3.4.4 熒光標(biāo)記黃芩苷作用結(jié)核菌的激光共聚焦顯微鏡觀察45
• 3.4.5 熒光標(biāo)記黃芩苷在結(jié)核菌內(nèi)的定位分析45
• 3.5 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明53-54
• 綜述54-64
• 黃芩苷作用及機(jī)制研究進(jìn)展54-60
• 綜述參考文獻(xiàn)60-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊慧媛;宋育林;許建明;;抗結(jié)核藥物肝毒性研究現(xiàn)狀及其存在的問題[J];安徽醫(yī)藥;2008年04期

2 郁美娟,張海鳳,賴奕堅,孟慶華,張萬斌;新型羅丹明類熒光標(biāo)記探針的研究(Ⅱ)——羅丹明B-N-羥基琥珀酰亞胺酯的合成與標(biāo)記應(yīng)用[J];染料與染色;2004年05期

3 姬亞昆;凌均h

本文編號：267617