本文關鍵詞：黃芩苷抗結核作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的結核病是一古老的疾病,從古至今,人類一直未曾停止與其不懈的斗爭。自上世紀40年代鏈霉素應用于結核病治療,以及隨后一線抗結核藥利福平、異煙肼及乙胺丁醇的應用,人類對結核病的控制才有了突破性進展。抗結核藥的廣泛應用以及不正規(guī)治療必然伴隨細菌耐藥性的產(chǎn)生,從最初單耐藥發(fā)展到多耐藥,甚至耐多藥及泛耐藥。近年來HIV與結核的雙重感染急劇上升,面臨HIV疫情及耐藥結核的威脅,抗結核新藥的研發(fā)迫在眉睫。中藥黃芩苷是藥用植物黃芩的黃酮類化合物,目前已研究其有多種療效�；谀壳敖Y核耐藥形勢及抗結核藥物毒副作用,本課題借助體外抑菌試驗及形態(tài)學觀察,以期明確黃芩苷的抗結核作用及機制,為中西醫(yī)結合治療結核病開拓思路,提供基礎實驗數(shù)據(jù),并為進一步的臨床推廣打下基礎。 方法利用絕對濃度法進行體外黃芩苷單藥抑菌試驗,求得黃芩苷MIC,評估黃芩苷的抗結核作用；利用棋盤法,將不同濃度梯度黃芩苷分別與不同濃度梯度的利福平、異煙肼及乙胺丁醇交叉進行聯(lián)合抑菌試驗,通過絕對濃度法求得FIC,評估黃芩苷與抗結核藥物的聯(lián)合效應。以熒光試劑5(6)-羧基-四甲基羅丹明琥珀酰亞胺酯標記黃芩苷,熒光標記黃芩苷進行體外抑菌試驗,評價標記前后黃芩苷的抑菌作用有無變化,制備藥理活性的熒光探針；激光掃描共聚焦顯微鏡對標記黃芩苷作用后的結核菌進行掃描及三維重建,觀察熒光標記黃芩苷抗結核菌作用的部位。 結果108例黃芩苷體外抑菌試驗結果表明,黃芩苷對結核分枝桿菌有明確抑制作用,MIC值在0.75～12mg/ml之間,MIC為12mg/ml的菌株占8.33%,6mg/ml的菌株占45.87%,3mg/ml的菌株占37.62%,1.5mg/ml的菌株占6.48%,0.75mg/ml的菌株占0.93%,MIC50和MIC90均為6mg/ml。黃芩苷與INH、RFP、EMB的聯(lián)合藥敏試驗結果表明,黃芩苷與INH、RFP的聯(lián)合效應主要表現(xiàn)為協(xié)同或相加,與EMB的聯(lián)合效應主要表現(xiàn)為拮抗。熒光標記黃芩苷抑菌試驗結果表明,其MIC降低1個濃度梯度。LSCM觀察結果提示標記黃芩苷進入結核菌內部發(fā)揮作用,而非僅粘附于結核菌表面。結“CT式”斷層掃描及三維重建結果,熒光標記黃芩苷作用部位為結核菌細胞質,抗結核作用可能與影響核酸代謝,干擾基因表達及蛋白質合成有關。 結論黃芩苷體外抑菌試驗確定黃芩苷的抗結核作用,MIC值在0.75～12mg/ml之間,MIC為12mg/ml的菌株占8.33%,6mg/ml的菌株占45.87%,3mg/ml的菌株占37.62%,1.5mg/ml的菌株占6.48%,0.75mg/ml的菌株占0.93%,MIC50和MIC90均為6mg/ml。黃芩苷對結核分枝桿菌的直接抑制作用可能與其黃酮環(huán)的烯烴結構有關,糖苷成分的改變也可能影響其抑菌活性。黃芩苷與INH、RFP及EMB的聯(lián)合藥敏試驗結果表明,黃芩苷與INH、RFP的聯(lián)合效應主要表現(xiàn)為協(xié)同或相加,與EMB的聯(lián)合效應主要表現(xiàn)為拮抗。說明黃芩苷能夠部分降低INH、RFP的耐藥性,降低藥物所需劑量,降低毒副作用,避免及延緩耐藥的發(fā)生；機制可能與影響已知耐藥靶基因,外排泵基因等有關。黃芩苷不能降低EMB的耐藥程度,反而進一步增加其耐藥性,增加其使用劑量,更易誘發(fā)毒副作用；機制可能與競爭抑制作用或影響己知耐藥靶基因,外排泵基因及新的藥物靶基因有關。熒光標記黃芩苷抑菌試驗結果表明,其MIC降低1個濃度梯度,提示抗結核活性增強,推測有以下可能：1.氨基的加入增加了黃芩苷的抑菌活性2.黃酮類化合物結構中糖苷成分的存在易削弱其活性,氨基和5-(6)TAMRA SE的加入,可能削弱了葡萄糖苷鍵的穩(wěn)定性,從而增加標記黃芩苷的抑菌活性3.黃芩苷的抑菌活性基團可能不止黃酮環(huán)的烯烴結構,或許也與黃芩苷的6位羰基有關。LSCM觀察結果提示,標記黃芩苷進入結核菌內部發(fā)揮作用,而非僅粘附于結核菌表面。結合“CT式”斷層掃描及三維重建結果,熒光標記黃芩苷作用部位為結核菌細胞質,抗結核作用可能與影響核酸代謝,干擾基因表達及蛋白質合成有關。
【關鍵詞】：黃芩苷 結核分枝桿菌 MIC FIC 5-(6)TAMRA SE 熒光標記 LSCM
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R285;R521
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略語12-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、黃芩苷單藥體外抑菌試驗16-24
• 1.1 儀器與材料16-17
• 1.1.1 結核分枝桿菌16
• 1.1.2 試劑16
• 1.1.3 儀器16
• 1.1.4 改良羅氏固體培養(yǎng)基16-17
• 1.2 方法17-20
• 1.2.1 臨床痰標本的初分離培養(yǎng)17-18
• 1.2.2 結核分枝桿菌的臨床常規(guī)藥敏試驗18-19
• 1.2.3 黃芩苷體外抑菌試驗19-20
• 1.3 統(tǒng)計學分析20
• 1.4 結果20-21
• 1.4.1 108例黃芩苷單藥抑菌MIC20-21
• 1.5 討論21-23
• 1.6 小結23-24
• 二、黃芩苷聯(lián)合抗結核藥體外抑菌試驗24-33
• 2.1 儀器與材料24-25
• 2.1.1 結核分枝桿菌24
• 2.1.2 試劑24
• 2.1.3 儀器24-25
• 2.1.4 改良羅氏固體培養(yǎng)基25
• 2.2 方法25-28
• 2.2.1 聯(lián)合藥敏培養(yǎng)基的制備25-27
• 2.2.2 接種27-28
• 2.3 統(tǒng)計學分析28
• 2.4 結果28
• 2.4.1 黃芩苷聯(lián)合抗結核藥藥敏試驗的FIC指數(shù)28
• 2.5 討論28-31
• 2.6 小結31-33
• 三、黃芩苷抑菌機制初步研究33-46
• 3.1 黃芩苷熒光標記33-36
• 3.1.1 儀器與材料34-35
• 3.1.2 方法35-36
• 3.2 熒光標記黃芩苷的LSCM觀察36-37
• 3.2.1 儀器與材料36-37
• 3.2.2 方法37
• 3.3 結果37-43
• 3.3.1 熒光標記黃芩苷的檢測及分離純化37-39
• 3.3.2 乙酸乙酸鈉緩沖液溶解黃芩苷的抑菌活性結果39
• 3.3.3 熒光標記黃芩苷的抑菌活性39
• 3.3.4 熒光標記黃芩苷作用結核菌的激光共聚焦顯微鏡觀察39-40
• 3.3.5 熒光標記黃芩苷在結核菌內的定位分析40-43
• 3.4 討論43-45
• 3.4.1 黃芩苷的熒光標記43-44
• 3.4.2 乙酸乙酸鈉緩沖液溶解黃芩苷的抑菌活性44
• 3.4.3 熒光標記黃芩苷的抑菌活性44-45
• 3.4.4 熒光標記黃芩苷作用結核菌的激光共聚焦顯微鏡觀察45
• 3.4.5 熒光標記黃芩苷在結核菌內的定位分析45
• 3.5 小結45-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明53-54
• 綜述54-64
• 黃芩苷作用及機制研究進展54-60
• 綜述參考文獻60-64
• 致謝64

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊慧媛;宋育林;許建明;;抗結核藥物肝毒性研究現(xiàn)狀及其存在的問題[J];安徽醫(yī)藥;2008年04期

2 郁美娟,張海鳳,賴奕堅,孟慶華,張萬斌;新型羅丹明類熒光標記探針的研究(Ⅱ)——羅丹明B-N-羥基琥珀酰亞胺酯的合成與標記應用[J];染料與染色;2004年05期

3 姬亞昆;凌均h

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