【摘要】： 目的:急性肺損傷(acute lung injury , ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome , ARDS)是機(jī)體在遭受各種侵襲(如創(chuàng)傷、休克、感染、中毒等)后發(fā)生的急性肺間質(zhì)性炎和肺泡-毛細(xì)血管膜損傷,導(dǎo)致通透性肺水腫、肺動脈高壓、肺內(nèi)微血栓形成,以進(jìn)行性呼吸困難和難以糾正的低氧血癥為主要表現(xiàn)的臨床綜合征。ARDS是ALI的嚴(yán)重階段,二者具有性質(zhì)相同但程度不同的病理生理改變。 ALI/ARDS病因復(fù)雜,按原發(fā)病的不同將其分為肺內(nèi)源性急性肺損傷(ARDSp)和肺外源性急性肺損傷(ARDSexp),其中肺炎是引起ARDSp的最常見原因,敗血癥是引起ARDSexp的最常見原因。兩者肺損傷機(jī)制差異并不明確。糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids , GCs)具有強(qiáng)大的抗炎抗免疫作用,可以通過多種機(jī)制來抑制炎癥反應(yīng),改善血管通透性,減輕肺水腫,從而影響ALI的發(fā)生和發(fā)展。GCs用于ALI的治療已有很長的歷史,但在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)不同病因?qū)е碌腁LI患者對激素治療的反應(yīng)存在較大差異。 因此,本研究復(fù)制了肺內(nèi)、外感染兩種病因?qū)е碌腁LI/ARDS的動物模型,分析比較二者在病理改變、炎性介質(zhì)、激素干預(yù)效果等方面的差異,探討ALI發(fā)病機(jī)制、激素干預(yù)效果與機(jī)理,為臨床個體化治療肺內(nèi)外感染導(dǎo)致的ARDS提供理論依據(jù)。 方法:健康雄性SD大鼠48只,隨機(jī)分為6組,每組8只動物:①正常對照組(NS組):尾靜脈注射生理鹽水1ml②肺外感染組(LPS組):尾靜脈注射LPS(8mg/kg)③肺內(nèi)感染組(E.coli組):氣管內(nèi)緩慢滴注E.coli混懸液(3ml/kg)④正常對照+地塞米松組(NS+Dex組)⑤肺外感染組+地塞米松組(LPS+Dex組),⑥肺內(nèi)感染組+地塞米松組(E.coli+Dex組),④、⑤、⑥三組為激素干預(yù)組,造模后立即腹腔注射Dex(2mg/kg)。 E.coli組及E.coli+Dex組模型復(fù)制24小時后取材,其余各組模型復(fù)制4小時后取材。將動物以10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉,固定在手術(shù)臺上。股動脈穿刺采血,收集血液,離心(3000 rpm,4℃,10min),吸取上清,分裝,-80℃保存,用于細(xì)胞因子測定。開胸處死動物,暴露肺組織,止血鉗夾閉右主支氣管后,將右肺完整切除,取右肺上葉肺組織用于濕/干重比檢測,取右肺中葉肺組織用10%中性福爾馬林溶液固定,留做病理及免疫組織化學(xué)檢查,右后葉用4%戊二醛固定,留做透射電鏡檢查。分離出氣管,經(jīng)氣管插管行左肺支氣管肺泡灌洗,取支氣管肺泡灌洗液(BALF),離心(1200 rpm,4℃,10min),細(xì)胞沉淀用于細(xì)胞計數(shù)檢測,上清液分裝,-80℃保存,用于蛋白含量及細(xì)胞因子的測定。 結(jié)果:(1)LPS組和E.coli組光鏡下肺組織病理評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但E.coli組主要表現(xiàn)在肺組織結(jié)構(gòu)的毀損,氣道上皮壞死脫落,而LPS組主要表現(xiàn)為肺泡間隔的增寬和血管充血。LPS+Dex組病理評分顯著低于LPS組(P0.01)。電鏡觀察顯示兩模型組均有超微結(jié)構(gòu)的改變,E.coli組重于LPS組,LPS+Dex組超微結(jié)構(gòu)的改變較LPS組明顯減輕,而E.coli+Dex組與E.coli組比較無明顯差異。(2)E.coli組和LPS組肺W/D、BALF中細(xì)胞總數(shù)及蛋白含量均高于NS組(P0.01),除肺W/D外,其它兩個指標(biāo)在兩模型組之間有顯著差異(P0.01)。這三個指標(biāo)在LPS+Dex組均明顯下降(P0.05),而E.coli+Dex組只有BALF中細(xì)胞總數(shù)及蛋白含量下降(P0.01),E.coli+Dex組均明顯高于LPS+Dex組(P0.01)。(3)E.coli組和LPS組血清和BALF中TNF-α及IL-1β的含量均顯著高于NS組(P0.01),LPS組血清中TNF-α及IL-1β含量均明顯高于E.coli組(P0.05),而E.coli組BALF中TNF-α及IL-1β含量均明顯高于LPS組(P0.01),LPS+Dex組血清和BALF中TNF-α及IL-1β含量均低于LPS組(P0.05),E.coli+Dex組血清和BALF中TNF-α及IL-1β含量無明顯變化(P0.05)。(4)LPS組和E.coli組NF κB陽性細(xì)胞比值(34.08±3.82,36.33±4.05)明顯高于NS組(3.11±1.10,P0.01) , LPS+Dex組NF κB陽性細(xì)胞表達(dá)(26.14±3.91)較LPS組明顯降低(P0.01),而E.coli+Dex組(35.1±4.22)較E.coli組無明顯變化(P0.05)。 結(jié)論:1氣道內(nèi)注入大腸桿菌成功的復(fù)制了肺炎導(dǎo)致的內(nèi)源性急性肺損傷模型。 2兩模型組雖然在病理損傷程度上相近,但在具體病理表現(xiàn)上存在一定差異,E.coli組主要表現(xiàn)在肺組織結(jié)構(gòu)的毀損,氣道上皮壞死脫落,而LPS組主要變現(xiàn)為肺泡間隔的增寬和血管充血,肺組織結(jié)構(gòu)破壞不明顯。電鏡下E.coli組病變重于LPS組。說明急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展與其致病因素關(guān)系密切,不同病因所致的急性肺損傷存在著不同之處。 3糖皮質(zhì)激素對肺外性感染誘發(fā)的ALI有較為明顯的改善作用,而對肺炎誘發(fā)的ALI作用不明顯,這可能與糖皮質(zhì)激素受體水平,NF κB的活化程度及肺損傷的原發(fā)病因有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R563.8

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