發(fā)布時間：2020-05-12 04:33

【摘要】：目的:研究堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)是否參與低氧誘導(dǎo)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)增殖及其與周期蛋白D1(CyclinD1)的關(guān)系。方法:取健康SPF級雄性大鼠,體外分離培養(yǎng)大鼠PASMCs,并傳至3代,分別采用低氧、常氧培養(yǎng)大鼠PASMCs,觀察不同培養(yǎng)條件下PASMCs生長情況。低氧組分為10%,5%,2%,1%氧濃度,分別培養(yǎng)PASMCs 24h,48h,72h,觀察細(xì)胞生長情況,采用MTT法檢測不同氧濃度時PASMCs增殖,選取增殖最活躍的氧濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中低氧組的氧濃度。采用隨機(jī)數(shù)法將細(xì)胞分為4組:1、常氧組,2、低氧組,3、低氧+NC siRNA組,4、低氧+bFGF siRNA組,5、低氧+CyclinD1 siRNA組,分別培養(yǎng)大鼠PASMCs 24h,48h,72h,采用RT-PCR、Western-blot分別檢測不同培養(yǎng)條件下bFGF、CyclinD1 RNA及蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1、體外成功培養(yǎng)的大鼠PASMCs經(jīng)形態(tài)學(xué)及α-actin免疫細(xì)胞化學(xué)染色法證實(shí)。2、低氧促進(jìn)大鼠PASMCs增殖,通過描繪生長曲線及MTT法發(fā)現(xiàn)PASMCs在1%氧濃度時增殖最為活躍。3、與常氧組相比,低氧組bFGF及CyclinD1 mRNA及蛋白表達(dá)均升高。4、bFGF mRNA及蛋白在轉(zhuǎn)染bFGF siRNA后表達(dá)量均明顯下降,而轉(zhuǎn)染CyclinD1 siRNA后表達(dá)量無明顯差異,CyclinD1 mRNA及蛋白在轉(zhuǎn)染bFGF siRNA及CyclinD1 siRNA后表達(dá)量均明顯下降。結(jié)論:1、低氧促進(jìn)大鼠PASMCs增殖,且bFGF參與低氧誘導(dǎo)大鼠PASMCs增殖。2、bFGF通過CyclinD1途徑參與低氧誘導(dǎo)大鼠PASMCs增殖。
【圖文】：

圖 1、原代大鼠 PASMCs 的體外培養(yǎng)（×100、×400）Fig 1：Primary cultured rat pulmonary artery smooth muscle cells.

圖 2、免疫細(xì)胞化學(xué)染色，細(xì)胞核染成亮藍(lán)Fig 2：PASMCs Smooth muscle actin (SMA) iht blue and the cytoplasm is dyed brown.3.2 不同氧濃度培養(yǎng)大鼠 PASMCs，，第 1 天不
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R563.9

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本文編號：2659661