【摘要】： 目的：1、探討金銀花水煎液在體外抑制綠膿桿菌（PA）形成生物膜（biofilm，BF）的能力。2、研究金銀花水煎液在體外對(duì)綠膿桿菌BF的破壞能力及與頭孢他啶（CAZ）的協(xié)同殺菌效果。 方法：采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)。1、觀察藥物對(duì)綠膿桿菌BF抑制作用的實(shí)驗(yàn)方法：以聚氯乙烯吸痰管作為BF載體，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件并在同等條件下制作綠膿桿菌體外BF模型共18份，，隨機(jī)等分為三組，分別為空白對(duì)照組，金銀花組和紅霉素（EM）組，金銀花及EM從開始制作BF模型時(shí)即分別加入綠膿桿菌懸液中，所用濃度對(duì)綠膿桿菌無殺滅作用，7天后計(jì)數(shù)載體表面粘附的活菌數(shù)并在電子掃描顯微鏡（SEM）下觀察BF的形成情況，與空白對(duì)照組對(duì)照，以明確金銀花和EM是否具有抑制綠膿桿菌形成BF的能力。2、觀察藥物對(duì)綠膿桿菌BF破壞作用的實(shí)驗(yàn)方法：制作綠膿桿菌體外BF模型共152份，將模型隨機(jī)等分為兩組，第一組觀察不同藥物及其組合對(duì)早期BF的作用，第二組觀察不同藥物及其組合對(duì)成熟BF的作用。各組再隨機(jī)等分為6小組，分別設(shè)為空白對(duì)照組，頭孢他啶（CAZ）組，金銀花組，EM組，金銀花+CAZ組和EM+CAZ組，空白對(duì)照組的觀察時(shí)間點(diǎn)為0，4，8，24小時(shí)，各藥物組加藥后的觀察時(shí)間點(diǎn)分別為4，8，24小時(shí)，每個(gè)小組均于第24小時(shí)用SEM觀察BF的形成情況。 結(jié)果：1、觀察藥物對(duì)BF抑制作用的實(shí)驗(yàn)中BF載體表面的活菌計(jì)數(shù)：金銀花組和EM組均低于空白對(duì)照組（P0.01），SEM下空白對(duì)照組有大量BF形成，而金銀花組和EM組幾乎不形成BF。2、觀察藥物對(duì)早期BF作用的實(shí)驗(yàn)中BF載體表面的活菌計(jì)數(shù)：金銀花組，EM組和空白對(duì)照組之間無差別（P0.05），而CAZ組則低于前述三組（P0.01）； WP=5 EM+CAZ組和金銀花+CAZ組之間無差別（P0.05），但均低于CAZ組（P0.05）。SEM下空白對(duì)照組有大量BF形成，金銀花組和EM組BF較少，但可見較多裸菌粘附于載體表面，EM+CAZ組和金銀花+CAZ組中載體表面的BF和裸菌均少。3、觀察藥物對(duì)成熟BF作用的實(shí)驗(yàn)中BF載體表面的活菌計(jì)數(shù)：金銀花組、EM組和空白對(duì)照組之間無差別（P0.05），而CAZ組低于前述三組（P0.01）；EM+CAZ組和金銀花+CAZ組均低于CAZ組（P0.01），且金銀花+CAZ組低于EM+CAZ組（P0.05）。SEM下空白對(duì)照組有大量BF形成，金銀花組和EM組BF形成較少，且金銀花組較EM組更少，但兩組均可見較多裸菌附著于載體表面，EM+CAZ組和金銀花+CAZ組中的BF和裸菌均少。 結(jié)論：1、金銀花能明顯抑制綠膿桿菌形成BF，并能抑制綠膿桿菌對(duì)固體表面的粘附能力，其抑制效果與EM相當(dāng)。2、金銀花能破壞綠膿桿菌的早期和成熟BF，與EM相比，二者對(duì)早期BF的破壞效果相當(dāng)，而對(duì)于成熟BF則金銀花的破壞作用更明顯。由于以上作用，金銀花在體外能增強(qiáng)CAZ對(duì)早期和成熟BF內(nèi)PA的殺菌能力，對(duì)于成熟BF，金銀花的這種協(xié)同效果較EM更明顯。
【圖文】：

二、 SEM 觀察結(jié)果㈠、早期和成熟 BF 的 SEM 表現(xiàn)綠膿桿菌在無菌生理鹽水中培養(yǎng) 7 天的空白 BF 載體（圖 4）：未見細(xì)菌和片狀 BF 附著在載體表面，只見載體表面原有的規(guī)則紋理。載體在綠膿桿菌懸液中培養(yǎng) 24 小時(shí)（圖 5）：細(xì)菌已表現(xiàn)出對(duì)固體表面的粘附性，這種粘附較為緊密，用無菌生理鹽水輕輕仔細(xì)沖洗已不能使其脫落，此時(shí)細(xì)菌尚未聚集成堆，而是分散排列，尚無 BF 形成。無藥物作用的早期 BF（圖 6）和成熟 BF（圖 7）：可見在載體表面有綠膿桿菌 BF 呈片狀分布，BF 內(nèi)細(xì)菌呈短桿狀，菌體長(zhǎng)短不一，彼此聚集成堆，周圍有凹凸不平的濃厚粘液狀物質(zhì)緊密包繞，細(xì)菌借助這些濃厚的粘液狀物質(zhì)連接成大片 BF。

二、 SEM 觀察結(jié)果㈠、早期和成熟 BF 的 SEM 表現(xiàn)綠膿桿菌在無菌生理鹽水中培養(yǎng) 7 天的空白 BF 載體（圖 4）：未見細(xì)菌和片狀 BF 附著在載體表面，只見載體表面原有的規(guī)則紋理。載體在綠膿桿菌懸液中培養(yǎng) 24 小時(shí)（圖 5）：細(xì)菌已表現(xiàn)出對(duì)固體表面的粘附性，這種粘附較為緊密，用無菌生理鹽水輕輕仔細(xì)沖洗已不能使其脫落，此時(shí)細(xì)菌尚未聚集成堆，而是分散排列，尚無 BF 形成。無藥物作用的早期 BF（圖 6）和成熟 BF（圖 7）：可見在載體表面有綠膿桿菌 BF 呈片狀分布，BF 內(nèi)細(xì)菌呈短桿狀，菌體長(zhǎng)短不一，彼此聚集成堆，周圍有凹凸不平的濃厚粘液狀物質(zhì)緊密包繞，細(xì)菌借助這些濃厚的粘液狀物質(zhì)連接成大片 BF。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R965;R563

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李越;抗生素M331的抗銅綠假單胞菌的作用及對(duì)其體外形成生物被膜影響的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2653281