【摘要】： 前言 銅綠假單胞菌所致的慢性呼吸道感染是目前臨床上常見且十分難治的一種感染，其難治性往往與生物被膜(biofilm，BF)的形成有關(guān)。BF是指細(xì)菌被自身分泌的多糖基質(zhì)包繞，彼此粘連并且粘附于各種表面或界面所形成的細(xì)菌群落。BF可以保護(hù)細(xì)菌逃避宿主的免疫和抗菌藥物的殺傷作用，即使應(yīng)用對(duì)銅綠假單胞菌十分敏感有效的抗生素，BF菌亦很難清除，臨床治療十分棘手。 迄今為止，國(guó)內(nèi)對(duì)BF的研究多局限于體外模型的設(shè)計(jì)和應(yīng)用，而體內(nèi)模型則更有利于綜合考慮內(nèi)環(huán)境的影響，并可探討宿主因素對(duì)BF形成的影響及體內(nèi)BF菌耐藥機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)用吸入法建立銅綠假單胞菌肺感染BF模型，研究體內(nèi)細(xì)菌BF的組織學(xué)及細(xì)菌學(xué)特征，并進(jìn)一步應(yīng)用藥物進(jìn)行干預(yù)，觀察藥物對(duì)肺部BF菌感染的作用，為防治此類感染提供依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法 1．銅綠假單胞菌肺感染BP模型的建立及觀察 (1)吸入法建立銅綠假單胞菌BF模型。將50只豚鼠分成四個(gè)組：A組10只，為吸生理鹽水組，作為BF模型的對(duì)照；B組30只，為BF模型建立組；C組和D組為抗生素干預(yù)組，每組5只，C組單用頭孢噻肟組，D組合用頭孢噻肟與羅紅霉素。所有動(dòng)物均事先應(yīng)用地塞米松抑制免疫(3mg／kg／日)，日一次，連用7天。將事先配好的濃度為6.25×10~8CFU／ml的銅綠假單胞菌菌懸液通過噴霧器以氣霧劑的形式，接種至豚鼠肺內(nèi)，A組接種生理鹽水。 每組均噴霧接種40分鐘。A組于接種后第3天和第7天取材F 組于接種后第3、7、10＼14、17及21天分別取材，C組和D組于接 種后第10天取材，每組每日各取5只動(dòng)物。 p）感染肺組織（標(biāo)本）取出后活菌計(jì)數(shù)。無菌取出一側(cè)肺組 織，用滅菌生理鹽水經(jīng)支氣管灌注沖洗，去除浮游菌。稱重后，置 于組織勻漿器內(nèi)勻漿，加人lml滅菌生理鹽水制成組織懸液，再做 IO倍系列稀釋，分別取各稀釋度標(biāo)本IO山接種于血瓊脂平板上， 37℃過夜培養(yǎng)后計(jì)數(shù)菌落數(shù)。 櫥）普通光學(xué)顯微鏡及掃描電鏡觀察。另一側(cè)肺組織取出 后，一部分用10％福爾馬林溶液固定對(duì)E染色，用普通光學(xué)顯微 鏡觀察。另一部分標(biāo)本則以2．5％戊二醛溶液固定，液氮冷凍斷 裂并經(jīng)系列處理后，用掃描電鏡觀察。 2．抗生素干預(yù) 實(shí)驗(yàn)分三組，包括接種銅綠假單胞菌后不用抗生素組（B 組人單用頭飽暖股組＊組）以及合用頭抱噬股與羅紅霉素組① 組人C組及D組動(dòng)物于接種后第7天開始分別應(yīng)用抗生素治 療，連用3天。其中頭抱喀能每日兩次次下注射給藥問 昨g／ 日入羅紅霉素則每日兩次口服給藥矚 日八三組動(dòng)物均于 接種后第10天取材。標(biāo)本取出后作上述同樣處理。 3．統(tǒng)計(jì)方法：資料的性質(zhì)為計(jì)量資料，且需進(jìn)行組間兩兩比 較，故采用方差分析SNK檢驗(yàn)，用SPSS軟件分析處理。 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 互．B組有三只動(dòng)物于接種后第1天死亡，其它各組動(dòng)物無死 亡。 2．銅綠假單胞菌肺感染BF模型的觀察 門則組動(dòng)物于取材日肺組織培養(yǎng)均見銅綠假單胞菌生長(zhǎng)， ·2· 第 10天時(shí)菌落數(shù)最多，為 5．25 X 10丫FU／l，第 ZI天時(shí)有所減 少，為 4．07 X 10’CFU／Inl。A組無細(xì)菌生長(zhǎng)。 p）普通光學(xué)顯微鏡觀察／組動(dòng)物肺組織除早期局部有少 許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)外，未見明顯異常。B組動(dòng)物肺組織則在接種后 第3天開始于實(shí)變區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)散在分布的結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)主要由炎性 細(xì)胞組成，以淋巴細(xì)胞為主。接種后第7天及14天時(shí)，，肺內(nèi)實(shí)變 明顯減輕，結(jié)節(jié)的大小同前比較增大，數(shù)目增多，外周包繞扁平的 類上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，呈現(xiàn)慢性肉芽腫樣結(jié)構(gòu)，并且多分布在 肺邊緣近胸膜處。到第21天時(shí)，肺內(nèi)肉芽腫結(jié)節(jié)仍存在，結(jié)節(jié)的 大小較先有所減小，數(shù)目亦減少。 p）掃描電鏡下見結(jié)節(jié)內(nèi)存在大量細(xì)菌，菌體被粘液樣基質(zhì) 包繞并彼此連結(jié)，中間鑲嵌有淋巴細(xì)胞。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，基質(zhì)的 厚度增加。 3．抗生素干預(yù)的結(jié)果 C組和D組動(dòng)物同B組比較肺組織菌落數(shù)均減少，但C組與 B組比較，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異不顯著對(duì)組同B組相比則存在顯著性差 異。聯(lián)合用藥后，光鏡下結(jié)節(jié)明顯變小，數(shù)目減少，電鏡下見BF 基質(zhì)的厚度明顯變��；而單用頭抱噬防組的結(jié)節(jié)大小及數(shù)目在F 基質(zhì)厚度的變化則不明顯。 討 論 1．吸人法建立的肺感染模型同臨床慢性肺部感染性疾病相接 近，有著重要的臨床意義。免疫抑制劑的應(yīng)用是本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒?的前提，在接種細(xì)菌之前應(yīng)用免疫抑制劑可以促進(jìn)吸人細(xì)菌在肺 內(nèi)的定植，臨床觀察亦發(fā)現(xiàn)往往免疫功能低下的病人容易形成BF 感染。國(guó)外文獻(xiàn)建立銅綠假單胞菌肺感染模型時(shí)用醋酸可的松抑 制免疫，我們?cè)陬A(yù)實(shí)驗(yàn)中用氫化可的松替代，藥物用量大門0mg／ ·3· kg／日X給藥部位組織壞死明顯。后改用地塞米松，藥物用量較 小O mg／kgi日X局部反應(yīng)輕微，免疫抑制作用亦肯定。定植在肺 內(nèi)的細(xì)菌即以BF的形式在體內(nèi)長(zhǎng)期存在，形成一種穩(wěn)定的慢性 感染。本實(shí)驗(yàn)建立的模型可用于較長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)研究。 2．國(guó)外文獻(xiàn)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R56

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 谷秀,李勝岐,張智潔,劉勇,李強(qiáng),潘莉莉;銅綠假單胞菌生物被膜中β-內(nèi)酰胺酶活性的檢測(cè)[J];中華內(nèi)科雜志;2001年09期

本文編號(hào)：2629685